Molekulárno-biologické aspekty nádorov prsníka

1. Molekulárno-biologické aspekty nádorov prsníka Doc. MUDr. Žúbor Pavol, PhD Gynekologicko-pôrodnícka klinika Prednosta: prof. MUDr. J. Danko, CSc

2. Karcinóm prsníka • Najčastejšie malígne ochorenieu žien • Variabilnýklinický a histopatologickým obraz • Náročná liečba Najefektívnejším prístupom k problematike je identifikácia rizikových jedincov a odhalenie pacientov v skorom štádiu ochorenia

3. WHO/ rok • Celosvetovo 1.150.000prípadov a 411.000úmrtí ročne • SVK = cca 2000 prípadov • Zvyšuje sa prežívanie vďaka : • mammografický skríning • skorá a správna diagnóza • adekvátna operačná liečba • efektívnejšia adjuvantná liečba • Incidencia ochorenia však stále stúpa a bude stúpať !!

4. Čo je našim dnešným cieľom? • Selekcia rizikových jedincov • Skorá diagnostika ochorenia (T1mic-1 a N0) • Adekvátna operácia s minimálnym „overtreatmentom“ • Cielená, efektívna a dostupná adjuvuvantná liečba • Bezproblémový následný osobný a profesný život pacienta

5. Karcinóm prsníka • Optimálny manažment pacientok si vyžaduje podrobnú analýzu prognostických a prediktívnych faktorov • Nevyhnutnou podmienkou Neo/Adjuvantnej liečby aoperačného výkonu, čo v sumárnom výsledku podmieňuje OSR a DFI

6. V súčasnosti i napriek správam o molekulových charakteristikách karcinómu prsníka na úrovniach genomiky a proteomiky je stále určenie prognózy ochorenia určované pomocou: - veľkosti nádoru - rozsahu postihnutia regionálnych lymfatických uzlín, - prítomnosťou, či neprítomnosťou vzdialených metastáz • Následné histologické a biochemické vyšetrenie sérových markerov je dôležitou zložkou v identifikácii biologických vlastností karcinómu s určením podskupín s prognosticky a prediktívne diverzifikovanými vlastnosťami ochorenia: (typ,grade, stav receptorov, proliferačnej aktivity, membránových markerov pre cielenú monoklónovú liečbu)

7. Karcinóm prsníka • Je zrejmé, že karcinóm prsníka je komplexné ochorenie prejavujúce sa svojím klinickým a histopatologickým obrazom • Pričom jeho vlastnosti a klinická manifestáciaje podloženáspektrom genetických aberácií, charakterizovaných akumuláciou mnohopočetných alterácií • Z rozvojom metód molekulovej biológie máme možnosť sledovať množstvo génov zahrnutých do celkovej karcinogenézy a prejavu ochorenia

8. Karcinóm prsníka • V súčasnosti len malé množstvo takto determinovaných molekulových faktorov sa klinicky využíva • Avšak pravdepodobne len korelácia klinických, histopatologických a genomických dát dáva jednoznačný prísľub vo vytvorení špecifického individuálneho terapeutického protokolu s jednoznačne prognostickým zameraním

9. Molekulárno – biologické aspekty nádorov prsníka • Oblasť determinácie biologického profilu ochorenia • Cieľ: zefektívniť liečbu, stanoviť prognózu • Oblasť selekcie rizikových jedincov • Cieľ: zabrániť vzniku ochorenia

10. Molekulová patológia a funkčná genomika • Na GPK vytvárame projekt s pracovným názvom „Molekulová patológia a funkčná genomika karcinómu prsníka„ orientovaný na translačný onkologický výskum, t.j. prenos súčasných poznatkov molekulovej biológie a bunkovej patológie nádorov do kliniky • Mimo štandardnej operatívy využívame analýzy vychádzajúce z molekulového „profilingu“, RT-PCR, RLFP-PCR, FISH, CISH, DNA metylácia a sekvenácia DNA potrebné pre podrobnejšiu klasifikáciu nádorového typu, jeho korelácie s prognózou či liečbou a selekciou rizikových jedincov

11. Predkladané výsledky • Obdobie: 2004 – 2009 • Miesto: G-P klinika, ÚPA, ÚMB, ÚLB JLF UK • Materiál: Pacientky s léziou prsníka (benígna / malígna forma) • Metódy analýzy: - RFLP-PCR - DS, DNA - metylácia - IHC, CISH, FISH, génová expresia • Forma: Prospektívny, kontrolou-podložený, prierezový výskum (EBM:level IIb) • Ciele: - stanovenie rizika vzniku ochorenia - určenie biologickej agresivity - predikcia expresie biologických determinantov - návrh odporúčaní v klinickom manažmente

12. Použité metódy molekulovej analýzy

13. Oblasť selekcie rizikových jedincov • BRCA • SNPs, Priama sekvenácia • Polygénový SNPs profil • Gailov model • Manažment • Prekurzory histopatológie

14. Stanovenie rizika vzniku ochorenia prsníka • HER-2 Ile655Val nCaP = 47 / 60 nFA = 70 / 172 • p53 BstUI Arg72Pro n = 91 / 156 • p53 MspI intron 4 n = 91 / 156 • BRCA-1 5382insC n = 111 / 0 • BRCA-2 6174delT n = 80 / 0 • MDR-1 C3435T n = 92 / 0 Spolu: 353 vzoriek 1126 vyšetrení

15. SNPs a alelová distribúcia % • Graf tu dat treba Forma

16. Výsledky - HER-2 Ile655Val Fibroadenóm prsníka Karcinóm prsníka Zubor a spol., Neoplasma 2006 Zubor a spol., Eur. J. Cancer Prevention 2008

17. Výsledky - HER-2 Ile655Val Vplyv estrogénového pôsobenia Vplyv reprodukčných faktorov Zubor a spol., Neoplasma 2006 Zubor a spol., Neoplasma 2006

18. Výsledky – p53 BstUI Arg72Pro Franekova, Zubor a spol., Neoplasma 2007

19. Výsledky – p53 MspI intron 4 Franekova, Zubor a spol., Neoplasma 2007

20. Výsledky – p53 MspI + BstUI Arg72Pro Franekova, Zubor a spol., Neoplasma 2007

21. Výsledky – BRCA 1,2 4.76 % 7.5 % Zubor a spol., Arch Gynecol Obstet, 2007

22. Výsledky – MDR-1 C3435T Zubor a spol., Oncology Reports 2007

23. Oblasť determinácie biologického profilu ochorenia • Génové signatúry a profil • MS PCR, CGH • LOH, DNA ploidita • Oncotype, Mammostrat • HERSI • CISTROMs ?

24. Predikcia expresie biologických determinantov • HERSI skórovací systém n = 660

25. HERSI skórovací systém • HERSI = HG (0-2) + ER (0-2) + PR (0-2) • HG1 = 2 body • HG2 = 1 bod • HG3 = 0 bodov • ER, PR negat = 0 bodov • ER, PR < 50% = 1 bod • ER, PR > 50% = 2 body • Skupina 0 – 6 ( 0 = prognosticky najlepšia, 6 = najhoršia) Význam najmä v adjuvantnej liečbe

26. Výsledky – HERSI Kajo, Zubor a spol., Experimental Oncology 2007

27. Hypermetylácia promótoruTumor supresorových génov • Jednotlivých úsekoch DNA (npr. CpG oblasť) umožňuje predikovať prítomnosť karcinómu ešte predtým ako sa klinicky prejaví, alebo začnú stúpať klasické TUM v sére • Gény ako p53, GSTP-1, RAR-2, RASSF1a, DAP-kináza, p16INKA4 • Vyšetrovať sa dá z krvného séra, sekrétu bradaviek, parafinových bločkov • Hodnotíme nielen vznik, ale i asociáciu k PP faktorom Význam najmä v diagnostike a terapii

28. Výsledky

29. Výsledky • V 24.4%prípadov ochorenia vykazovalo prítomnosť metylácie • promótorovej oblasti GSTP1 génu • Vzájomnou koreláciou s histopatologickými parametrami sme odhalili • signifikantnú negatívnu koreláciu medzi hypermetyláciou GSTP1 a : • Gradingom tumoru (p<0.01), • Nottinghamským prognostickým indexom (p<0.01) • Metastatickým postihnutím regionálnych axilárnych LU (p<0.05)

30. Výsledky • Signifikantnúpozitívnu koreláciu (r = 0.390, p<0.05) medzi metyláciou GSTP1 vo vzťahu k expresii hormónových receptorov s približne 50% metylačnou pozitivitou u ER a 70% u PR • Nezistili sme ŠS asociáciu vo vzťahu k: • Typu karcinómu (p=0.09), • Veľkosti nádoru (p=0.29), • Her-2 expresii (p=0.99)

31. Lasabová a spol., Neoplasma 2008

32. Návrh systémových zmien v klinickom manažmente - Implementácia doma - cestou odbornej sekcie • Efektívna skríningová politika • Detailná rodinná anamnéza • Adekvátnneskríningové odporúčania • Zhodnotenie rizika vzniku ochorenia • Budovanie stratégií redukcie rizika • Štandardizácia spôsobu manažmentu • Kontrola kvality zdravotnej starostlivosti • Zapojenie sa do multicentrických projektov a výskumu • Aplikácia molekulovo-biologických vyšetrení • Budovanie centier mamárnej patológie Zubor a spol.,Slov. Gynekol. Porod, 2008

33. Návrh panelu otázok pred aplikáciou SNPs do klinického manažmentu Celosvetová implementácia cestou odbornej diskusie Zubor a spol., The Lancet Oncology 2008

34. Závery • Svetový trendv Senológii už zahŕňa výsledky genomikya proteomiky do klinického manažmentu tumorov prsníka SLOVENSKO ?? • Projekt „Molekulová patológia a funkčná genomika ochorení prsníka„ JLF UK Klinické vyšetrenie senológom + MMG/USG  CB/FNAB + Molekulová biológia = Záver  postup podľa guidelines

35. Trend-line operačných výkonov • Graf tu dat treba

36. Záver • Problematika senologickej starostlivosti je komplexná • Dnes si vyžaduje súčinnosť gynekológa, molekulového biológa, genetika, mamárneho patológa, rádiológa a klinického onkológa • „Osobná“ medicína sprostredkovaná starostlivosťou a operatívou 1–2 ľudí už dnes nemá miesto v modernej senológii Koncepcia budovania Centier mamárnej patológie sa stáva nevyhnutnosťou doby a profesie EUSOMA: Pre Slovensko 1 centrum na 300 000 populáciu (cca 15 centier)

37. Ďakujem za pozornosť