1 / 14

Mr. S ci. Amina Valjevac

Analiza distrofina Western blot metodom u diferencijalnoj dijagnozi Duchenen-ove i Becker-ove mišićne distrofije. Mr. S ci. Amina Valjevac. Distrofin. C itoskeletni protein velike mol mase - 427kDa unutrašnja strana sarkoleme P ovezuje aktin sa ekstracelularnim matriksom

blanca
Download Presentation

Mr. S ci. Amina Valjevac

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Analiza distrofina Western blot metodom u diferencijalnoj dijagnozi Duchenen-ove i Becker-ove mišićne distrofije Mr. Sci. Amina Valjevac

  2. Distrofin • Citoskeletni protein velike mol mase - 427kDa • unutrašnja strana sarkoleme • Povezuje aktin sa ekstracelularnim matriksom • Skeletni i srčani mišić • Glatka mišićna vlakna • Mrežnica • CNS

  3. Distrofin • Dio proteinskog kompleksa stanične membrane (DAGC) • DAGC transmembranski protein koji povezuje citoskelet (F- aktin) i ekstracelularni matriks (merozin)

  4. Distrofin • Neophodan u održavanju citoarhitekture miofibrila • Oštećenje distrofina • destabilizacija stanične membrane • intracelularno nakupljanje Ca2++ • Propadanje miofibrila • Urastanje vezivnog tkiva

  5. Distrofin • N-terminalni kraj • Štapićasti dio sa ponavljajućim sekvencama (24 jedinice) • Cistein-bogat kraj • C-terminalni kraj

  6. Mišićne distrofije • Mutacije gena za distrofin • DMD – distrofin se najčešće ne stvara ili - u vrlo malim količinama • BMD – distrofin prisutan u manjoj količini - veličinom prevelik - smanjene molekularne mase

  7. Greške u sintezi distrofina DMD BMD DMD

  8. Analiza ekspresije distrofina • Genetička analiza –spektar mutacija širok zbog veličine gena koji kodira distrofin • Imunološke metode za detekciju distrofina u bioptičkom materijalu mišića • Imunohistohemija (prisustvo/nedostatak distrofina, lokalizacija, relativno jednostavna metoda) • Western blot

  9. Western blot • Detektabilan distrofina prisutan i u manjoj količini • različite molekularne mase proteina • Istovremena detekcija više proteina za mišićnu distrofiju • veća senzitivnost • tehnički zahtjevan • Biopsija mišića (obično m. Gastroknemius)(od 20 - 80 mg) • Pohrana bioptičkog materijala u tečnom azotu

  10. Antitijela za distrofin • više vrste antitjela za različite domene proteina • Antitjela za COOH-domenu proteina , • Antitjela za NH2-domenu proteina • Antitjela za štapićastu domenu

  11. Ekspresija distrofina kod DMD i BDM • Pacijenti sa BMD –detekcija različitih izoformi distrofina ili smanjena ekspresija moguća koriseći 3 antitijela • Kod 26,6% pacijenata sa BMD smanjena ekspresija distrofina • Kod većine BMD pacijenata distrofin manje molekularne mase • Kod 73,3% pacijenata sa DMD potpuni nedostatak ovog proteina

  12. DMD Tri različita AT za različite domene distrofina. Potpuni nedostatak distrofina od pacijenata sa DMD

  13. A- AT za štapićastu domenu C-kontrola jažica 1-BMD, smanjena ekspresija distrofina; jažica 2 - DMD; Jažica 3– teški oblik BMD, ekspresija distrofina nedetektabilna Jažica 4- BMD; različite izoforme distrofina; Jažica 5 -DMD B. AT za COOH kraj distrofina

  14. Hvala na pažnji

More Related