Fungi: taxonómia Kmeň Mykophyta Phycomycetes, pravé pliesne, nepriehradkované mycelium

1. Fungi: • taxonómia • KmeňMykophyta • Phycomycetes, pravé pliesne, nepriehradkované mycelium • trieda Zygomycetes • rad Mucorales • Eumycetes, pravé huby, delené mycelium • trieda: Ascomycetes -vreckaté • Basidiomycetes -stopkovýtrusé • Deuteromycetes –huby nedokonalé

2. Huby • Bežne prítomné v prírode ako saprofyty, prechodne kolonizujú človeka, často prítomné v klinickývc vzorkách, určiť ich úlohu v patogenéze môže byť ťažké Účinky: 1. Mykózy – pravé infekčné ochorenia, vyvolané mikromycétami 2. Mykotoxikózy – chorobné stavy vyvolané metabolickými produktami húb ( ergotamínové alkaloidy, psychotropné látky, aflatoxíny) delia sa na a.) hubové intoxikácie b.) vlastné mykotoxikózy (aflatoxikóza)

3. 3. Mykoalergózy- vzdušné spóry, alergická pneumónia (rinitída, bronchiálna astma, aleveolitída atopie) 4. Mycetizmy – mechanické, prítomnosť mycetických elementov kolonizácia a ochorenia - vrodené imunitné mechanizmy, ochorenia krátkodobé, samolimitujúce. U imunonekompromitovaných : povrchové, kožné, podkožné, systémové mykózy U imunokompromitovaných a AIDS: huby s nízkym patogénnym potenciálom - oportunistické mykózy

4. Eukaryontné bunky, • jadro, jadrová membrána, delia sa mitoticky • Cytoplazma – mitochondrie, organely • Plazmatická membrána - lipidy, glykoproteíny, steroly • Bunková stena - mnohovrstevná rigídna, chitín., glukany, manany - neobsahuje peptidoglykán Podobnosť so živočíšnymi bb. a odlišnosť od bakteriálnych bb = problémy při terapii • Heterotrofny metabolizmus - saprofyty, symbionty, komenzály alebo parazity Náhodné patogény, schopné adaptácie, • dimorfizmus - niektoré ( H. capsulatum, B. dermatitis, P. brasiliensis) existujú vo forme kvasinky alebo plesne (často prítomné súčasne). C. albicans len jako kvasinka. • Niektoré vytvárajú pseudohyfy - filamentózne, plesňam podobné - psuedohyfy, predĺžené bunky, pospájané - ako safalátky

5. Plesne – vláknité, mycéliové huby, zložené z vetvených vláken(hyfy) - predlžujú sa na koncoch a môžu byť mnohojadrové cénocytické alebo septované. • Hýfy – septované,neseptované • Sústava hýf sa nazýva mycelium. M. vnorené do kultivačného média - vegetatívne, M. vyčnievajúce nad povrch - vzdušné - uvoľňujúce špecializované štruktúry konídiá - asexuálne rozmnožovanie, diseminácia, identifikácia • Rozmnožovanie plesní - spóry

6. Kvasinky - jednobunkové, reprodukujú sa asexuálne tvorbou blastokonídií (pučanie) alebo prepolením. pseudomycélium – retiazky predĺžených buniek Dg. kvasiniek – podľa schopnosti fermentácie cukrov a asimilácie zlúčenín uhlíka a dusíka Dimorfné huby – rastú v mycéliovej alebo v kvasinkovej forme, väčšina ľudských patogénov

7. Zvýšený výskyt mykóz v 20. St. • Lepšia diagnostika • Cestovanie- endemické mikromycéty • Iatrogénne faktory- ATB, kortikoidy, cytostatiká, imunosupresíva, hormonálna antikoncepcia, diabetes, AIDS • Ekologické faktory- narušenie DCD

8. Patogénny potenciál húb • Obvykle exogénne infekcie - s výnimkou kandidózy • Neustála expozícia ľudí hubám, • ochorenie vzniká pri porušení ochranných bariér kože, slizníc a pri imunodeficite (aj prechodnom) (Mastné kyseliny, pH, epiteliálny povrch, fyziologická mikroflóry kože, transferín)

9. Rozvoj infekcie vyžaduje • 1. Adherenciu na sliznice • 2. Penetrácia do tkanív, niekedy spojená so zmenou huby (dimorfizmus), metabolizmu • 3.množenie v tkanive, prekonanie obranných mech. host. • 4. Poškodenie tkaniva ( mechanické) • Imunita – základ. obranný mech. = fagocytóza

10. Laboratórna diagnostika mykóz • Primárne patogény - mikroskopia tkanivovej vzorky, kultivácia • Oportunistické patogény - často len kontaminant, opakovaná izolácia a prítomnosť dokázaná mikroskopicky vo vzorke * Metódy odberu - sterilne, pred odberom dezinfekcia miesta (koža, nechty, vlasy) 70% etanolom + vysušiť, zoškrab. * Spracovanie - časť materiálu +10% KOH (deštrukcia tkaniva, huby obsahujú chitin odolávajúci alklickým činidlám) - mikroskopicky-hyfy. Farbenie podľa Gomoriho, Schiffovo farbenie - kultivácia na selektívnych médiách (zábrana rastu kontaminujúcich baktérií) pri 25 a 30 st.C

11. Kultivačné médiá • Selektívne • Sabouraudova agar - dextroza, pepton, menej agaru a pH 5,5 - kyslé prostredia a vysoká koncentrácia cukru • Saprofytické huby môžu prerásť patogénne - pridáva sa chloramphenicol (proti baktériám) a cycloheximid (proti saprofytickým hubám). • C. neoformans tam nerastie • Odporúča sa kultivácia na pôde s aj bez ATB při 25 aj 37*C( niektoré - H. capsulatum - nerastú pri 37*) • Identifikácia: všetky G+, kvasinky rastú rýchlo, plesne pomaly - mikroskopicky - morfológia

12. Rozdelenie mykóz • Povrchové, kožné - povrchová vrstva kože a vlasy, epidermis, žľazy, Podpovrchové - dermis, podkožné tkanivá, svaly a fascie, neporušená koža a slizničné povrchy slúžia ako bariéry a ohraničujú pôsobenie plesní lokálne • Systémové - spôsobené hubami, ktoré sú primárnymi patogénmi pre zdravých jedincov. Majú mechanizmy na preniknutie obranných bariér • Oportúnne

13. Povrchové • Kozmetické poškodenie, stratum corneum a kutikula vlasov, nevyvolávajú bunkovú im. odpoveď, nespôsobujú reakciu pacienta • Vyvolané hubami, ktoré sa množia v koži ale neprenikajú hlbšie • Špecifický Ag – trichofytin, prenosné z človeka a zvierat • Th:odstránenie húb z kože a vlasov, keratolytické lokálne prípravky (salicylové prípravky), mikonazol - bráni syntéze ergosterolu. hygiena, recidíva

14. Mykózy kožné • Koža, vlasy, nechty - obmedzené na keratinizované časti kože a adnex. Vyvolávajú bunkovú im. reakciu, patologické zmeny • Klinická manifestácia - tinea - červ - hadovitý alebo prstencovitý vzhľad na koži • Špecifický Ag – trichofytin, prenosné z človeka a zvierat • Viac ako 100 species - dermatofyty. • Rody Trichophyton, Epidermophyton, Microsporum- anthropofilné (chronické úporné infekcie), zoofilné a geofilné dermatofyty (zápalové lézie, dobre odpovedajú na liečbu, spontánne vyhojenie) • Niektoré sú endemické, vekovo ohraničené (tinea capitis), zvyklosti v obliekaní • Vlasové - Piedraia hortoe (čierna piedra) - priama mikroskopia vlasu - Trichosporon beigelii (biela piedra) - priama mikroskopia vlasu, dimorfizmus

15. Malassezia furfur • bežne na koži, endogénne inf. • Lipofilná • Oválne fľaškovité kvasinky • Pri infekcii –guľaté bb.a krátke hýfy • G+ • Dg-priama mikroskopia • Th-lokálna- 1% sírnik seleničitý, azoly v kréme

16. Kožné - Malassezia furfur(pityriasis versicolor) - mikroskopicky „spagetovitý vzhľad)

17. Cladosporium (Exophiala) werneckii -Tinea nigra - pigmentované škvrny rôznej veľkosti - po kontakte z pôdou Dg.- mikroskop- tmavé hýfy kultivácia- šedé kvasinkovité kolónie na SA, neskôr tmavnú, menia sa na mycéliové Th.- keratolytické masti

18. Exophiala wernecki ( tinea nigra) – pigmentované lézie ,dimorfizmus - hnedé kolónie aj hyfy • Zoškraby kože, nechtov, vlasy

19. Postihnutie vlasov • Biela piedra – Trichosporon beigelii -mäkké biele uzlíky na vlasovej pošve, v axile • Čierna piedra-Piedraia hortae -tuhé čierne uzlíky Th.- oholiť

20. Odber materiálu – miesto odberu očistiť alkoholom • Koža- zoškraby od okrajov lézií • Vlasy- pahýle vlasov, vytrhnúť, nie strihané • Nechty- dystrofické časti • Woodova lampa –fluorescencia postihnutých vlasov • Mikroskopia- materiál do KOH, pozorujeme hýfy • Kultivácia- Sabouraudov agar, 27-30st.C, 21 dní, vzhľad a farba kolónií Biochemická identifikácia

21. Laboratórna diagnostika dermatofytov • Nález pliesní v klinickom materiále + • - konfirmácia kultiváciou Odber a spracovanie s KOH • Mikroskopia - vetviace sa septované hyfy z kože a nechtov, • - spóry vo vnútri alebo obkolesujúce vlasovú pošvu - Trichophyton schoenleinii - voskovitá hmota hýf obkolesujúca bázu vlasového folikulu na hranici skalpu - mikroskopia - degenerovné hyfy, stanoví len plesňovú etiológiu, na identifikáciu je potrebná kultivácia. • Selektívne medium s ATB a cyclohexamidom při 25* - až 4 týždne. Vyrastené mycélia nie sú diagnostické - nutnosť mikroskopie a identifikácia konídií(makrokonídiá - veľké a mnohobunkové, mikrokonídiá - malé a jednobunkové

22. Podpovrchové • Široké spektrum infekcií obvykle po traumatickej inokulácii(tŕň, žihadlo, cudzie teleso) - hlbšie vrstvy, • chronický priebeh, šíriaci sa do epidermis. • Lokalizácia na nohy, predkolenie, ruky, ramená , zadok. • Dif. dg. s aktinomykózami, mycetomom, atypickými mykobakteriózami. • Liečba je dprimujúca, chirurgická, radikálna - excízie, amputácie. • Vzácne, exotické • Sporothrix schencki - lymfokutánna sporotrichóza - aj systémová diseminácia , postihnutie LU –profesionálny charakter

23. Sporothrix schencki - lymfokutánna sporotrichóza - aj systémová diseminácia , postihnutie LU –profesionálny charakter

24. Chromoblastomykóza – Cladosporium carrionii • karfiolovitý vzhľad, rýchlo sa šíriaca. • Dg. histologicky • Th: kauterizácia, excízia, 5 fluorocytosin p.o.

25. Mycetom - klinická jednotka - spôsobená baktériami (Actinomyces izraelí, Nocardia asteroides, Streptomyces, Actinomadura) alebo pliesňami(Madurella grisea, ), • Dg: vyšetrenie hnisavej tekutiny zo sínusov - makroskopické granuly, histologicky, mikroskopicky • Th: dôležité stanoviť etiológiu - bakteriálna (ATB) alebo hubovitá, totálna excízia, pri rozsiahlych - amputácia, antimykotiká sú obvykle neúčinné • Ostatné subkutánne mykózy - zygomykóza, lobomykóza, rhinosporidióza

26. Eumykotický mycetom - deformujúce napuchnuté lézie s drénujúcimi sínusmi.

27. Dg. - z tkaniva • kultivácia pri 37*C pučiace bunky, • při 25*C po 3-5 dňoch hviezdicovité kolónie - mikroskopicky vetviace sa hyfy na konci konídiofórov sú konídiá ukladajúce sa do ružíc. • Potvrdenie - kultiváciou subkultúry mycélií, pri 37*C vyrastie vo forme kvasinky • Th lymfokutánna : KJ p.o., systémová - amphotericin B

28. Sytémové mykózy • Primárne patogénne: • dimorfné huby - pri 37*C a z tkaniva ako kvasinky - Histoplasma capsulatum, Blastomyces detmatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis a monomofrný Cryptococcus neoformans - schopné napadnúť organizmus a preniknúť cez obranné bariéry • C. neoformans - jediný monomorfný - pri 25 aj 37* tvorí kvasinky, tvoriaci mukopolysacharidové púzdro

29. Primárne miesto infekcie - pľúca - väčšinou asymptomatická infekcia. • V prípade sekundárneho šírenia - diseminácia, systémové orgánové postihnutie • Obvykle geograficky viazané • Odber vzoriek z krvi, CSM a chirurgickej biopsie - rýchlo mikroskopovať a spracovať - vyschnutie, autoytické enzýmy a bakteriálna kontaminácia ich znehodnocuje

30. Sytémové mykózy Histoplazmóza – Histoplasma capsulatum • asymptomatické alebo chrípkovité ochorenie, • pri veľkej expozícii akútne pulmonálne ochorenie • vzácne s komplikáciami - perikarditída, mediastinálna fibróza. • Diseminovaná forma u imunokompromitovaných.

31. Dg.histoplazmózy- • sérologicky KFR, • imunodifúzia (ako antigén sa použije histoplazmín - bezbunkový filtrát z myceliálnej fázy rastu alebo inaktivovaná bunky kvasnicových kolónií), • Použitie exoantigénu - antigény sú extrahované z rastového média a reagujú s protilátkami v imunodifúzii • histologicky, • kultivácia z postihnutých tkanív (sputum, 1-2 týždne, • Mikroskopia- premena mycélií na kvasinky v subkultúre - zdĺhavé).. • kožný test s histoplazmínom po 2 týždňoch-sporný význam. - • dôkaz Ag z krvi a moču. • Th: amfotericin B

32. Blastomykóza –Blastomyces dermatitidis • pľúcne ochorenie často inaparentné, • ulcerózne lézie na koži a lytické lézie kostí. • Dg. - sérologicky imunodifúziou, • kožný test, • kultivácia tkaniva a mikroskopické vyšetrenie - pučiace kvasinkovité bunky. • Identifikácia premenou myceliálnej fázy na kvasinkovitú. • Th - amphotericin B, • u nekomplikovaných pľúcnych - ketokonazol

33. Paracoccidioidomykóza –Paracoccidioides brasiliensis • pľúcne ochorenie, vzniká po inhalácii - často asymptomatické, ulcerózna forma v ústach alebo nose, progresívne pľúcne alebo systémové ochorenie. • Klinicky zjavné ochorenia viac u mužov. • Dimorfná huba - ako plieseň v prírode ako kvasinka v tkanivách. • Zmena z plesne na kvasinku in vitro - zmenou teploty z 25-37*C • Dg.- sérologicky imunodifúziou, histologicky, • kultivačne (10-14 dní pri 25*C - mycelium - premena na kvasinky prenosom do 37*C) a • mikroskopicky („lodné kormidlo“ - centrálna veľká bunky a z nej pučia dookola malé guľaté bunky).

34. Coccidioidomykóza – Coccidioides immitis • inhalačné ochorenie asymptomatické až život ohrozujúce, meningitída. • Dimorfná huba - vláknitá plieseň v prírode (cylindrické konídiá). • V tkanivách mnohojadrové štruktúry sa menia na jednojadrové endospóry, z ktorých rastú nové sferuly. • Endemické oblasti. • Dg.-serologicky imunodifúziou, precipitáciou ( skoré štádiá) alebo KFR (neskoré štádiá), kožný test • Kultivácia –nebezpečná, len v boxoch!!! • Th.- Amfotericin B i.v. (zle preniká do CSM-i.t.). Ketokonazol - zastaví infekciu - relapsy po prerušení liečby.

35. Kryptokokóza-Cryptococcus neoformanstorulóza,európska blastomykóza. - Neexistuje dimorfizmus. - 4 sérotypy A,D a C,B - virulencia - púzdro - asymptomatické pľúcne ochorenie - solitárny pľúcny nodul - imitujúci Ca, - symptomatická pneumónia - difúzne infiltráty, - hematogénna diseminácia - meningitída (bolesť hlavy, protrahovaná niekoľkotýždňová teplota) alebo intracerebrálna hmota, - kožné lézie, lytické lézie kostí.

36. Kryptokokóza Dg.: - detekcia antigénu – polysacharid.púzdra latex aglutinácia (falošne pozit pri reumatoidnom faktore) - Burriho metóda. - Kultivácia - púzdro, ureázová aktivita. Odlíšenie patogénnych a nepatogénnych : - rast pri 41*C - patogénne nerastú Th.- amfotericin B, 5 fluorocytozín pri infekcii CNS - 10 tý, kombinácia oboch 6 tý

37. Oportúnne mykózy • Obvykle tolerované bez následkov s výnimkou alergickej hypersenzitivity. Vysoký stupeň vrodenej rezistencie proti kolonizácii hubami, nízky stupeň virulencie húb. Pri imunodeficite - život ohrozujúce (AIDS, drogy, ožarovanie, cytotoxické lieky) • Najčastejšie - Candida albigans, Aspergillus fumigatus, Rhizopus - bez taxonomickej súvislosti. Patogénne účinky rôzne a rôzneho stupňa.

38. Aspergilóza –Aspergillus fumigatus, A.niger,… • ochorenie z exogénneho zdroja, • nie sú súčasťou FMF • dôkaz vo vzorke z tkaniva. • A. flavus, A. fumigatus- len oportunistické infekcie. • Alergická aspergilóza, sekundárna kolonizácia, systémová aspergilóza • Lab.dg.: pravidelne septované hyfy orientované rovnakým smerom vo vzorke. • Kultivácie často negatívne. • Invázne ochorenie - potvrdenie při opakovanom náleze

39. Zygomykóza (mukormykóza, phycomykóza) Mucor, Absidia, Rhizopus - bežné v okolí, podobné ochorenia ako aspergilóza. - Tvoria cénocytické hyfy. - Ochorenia majú pôvod v paranazálnych sínusoch a postupujú do orbity so šírením do mozgu. - Terminálne štádium acidotických pacientov s metabolickými problémami (D.M.), - pľúcne, GIT, subkutánne u imunosuprimovaných. - invázne po kolnizácii popálených plôch. - pri diseminácii predilekcia k veľkým cievam - ich embolizácia, ischémia a nekróza priľahlých tkanív. Dg.: filamentózne, cénocytické

40. Kandidóza - Candida sp. • súčasť normálnej fyziologickej flóry(sliznica úst, vagíny, GIT, recta), • kolonizácia bez príznakov ochorenia. • Zriedkavo prítomné na koži, niekedy v intertrigu. • Hemataogénny prístup z orofaryngu alebo GIT pri poškodení sliznice po chemoterapii alebo kontaminovanými katetrami, (obvykle endogénna infekcia) • Postihnutie pľúc, sleziny, ľadviny, pečeň, srdce, mozog, oko. • Kožné lézie pri diseminácii. HK obvykle negatívne.

41. Lokalizované infekcie kože a nechtov, (dif.dg. od dermatofytózy) ochorenia slizníc úst, vagíny, oezofagu, brochiálneho stromu Chronická mukokutánna kandidóza Diseminovaná kandidóza Imunita - humorálna a hlavne bunková B bb. Th: lokálne pre kožné a mukokutánne, systémové a nechty -amfotericín B a 5 fluorocytozín, ketokonazol a flukonazol - fungistatické. !Korekcia imunosupresie! Pri intubácii - kontrola a výmena

42. Diagnóza kandidózy • Tvoria obvykle blastospóry, pseudohyfy a septované hyfy. C.glabrata - len kvasinky. • Kolónie - veľké kolónie, smotanovej farby • Kvasinky izolované z HK, CSM a chirurgických materiálov - identifikovať po druh (morfológia, fyziológia, biochémia) z moču, spúta a iných nesterilných oblastí - môžu byť súčasťou FMF alebo prechodnej kolonizácie • Rýchly test - C. albicans - germ tubes test - hyfálne výrastky pri inkubácii kvasinky suspendovanej v ľudskom sére pri 37*C 2 hod.

43. Candida albicans • Candida albicans - mikroskopický preparát podľa Grama - G+ elipsoidné útvary - rast na ryžovom agare a mikroskopia - blastospóry, pseudohyfy, septované hyfy - rast na Sabouraudovom agare - smotanové kolónie - dôkaz protilátok imunodifúziou - antigén + protilátky v agare - dôkaz pučania v ľudskom sére - germ test

44. Biochemická diferenciácia kandíd • Auxanogram- dif.dg.na základe asimilácie cukrov a dusíkatých látok. Rast kmeňa je stimulovaný okolo disku s príslušným substrátom. • Zymogram-dôkaz štiepenia cukrov s tvorbou kyseliny a plynu gl l ga r m s

45. Antimykotiká • Polyény –lokálne, toxicita - amfotericin B, nystatin • Azolové deriváty - interferencia s enzýmami záviacimi na cytochromoch a pôsobiacimi pri demetylácii lanosterolu na ergosterol - miconazol,ketoconazol, flukonazol, Nukleotidy - inhibícia DNA a RNA syntézy - 5 fluorocytozín

46. Antimykotiká • Grisány - inhibícia funkcie mikrotubulov - grizeofulvin • KJ - pravdepodobne aktivácia lyzozomálnych enzýmov • Dlhodobé podávanie a monitorovanie pacienta • Testovanie citlivosti na antimykotiká - málo štandardizované, nie vždy sú prediktívne pre klinický úspech (predovšetkým pre azoly a 5 fluorocytozín)