200 likes | 565 Views
Homologi Urutan Nukleotida DNA Mitokondria pada Fragmen D-Loop dari Lapisan Endoderm. Adritia Suci Wijayanti 10506103. Pembimbing : Achmad Saifuddin Noer , Ph.D. 1/20. Agenda Presentasi. More Free PowerPoint Templates at SmileTemplates.com. 26/05/10 Seminar Tugas Akhir. 2/20.
E N D
HomologiUrutanNukleotida DNA MitokondriapadaFragmen D-Loop dariLapisan Endoderm AdritiaSuciWijayanti 10506103 Pembimbing: AchmadSaifuddinNoer, Ph.D 1/20
Agenda Presentasi More Free PowerPoint Templates at SmileTemplates.com 26/05/10 SeminarTugasAkhir 2/20
Pendahuluan • Pengungkapankasuskriminal forensik DNA • BelumdilaporkanadatidaknyaperbedaanurutannukleotidamtDNApadaberbagaijaringan. 3/20 26/05/10 Seminar TugasAkhir
Tujuan Menganalisishomologiurutannukleotida DNA mitokondriapadafragmen D-Loop darilapisan endoderm pada 2 jaringan, yaituusushalusdanpankreas yang berasaldarisatuindividu. 26/05/10 Seminar TugasAkhir 4/20
Embriogenesis 5/20 26/05/10 Seminar TugasAkhir
DNA Mitokondria 26/05/10 Seminar TugasAkhir 6/20
Heteroplasmi • Heteroplasmidisebabkanlajumutasitinggi. • Padadaerahpengodedandaerah yang tidakmengode. • Heteroplasmiberupavariasipanjang: HVSI T16189C poli-C [Bendallet al.,1995] HVSII padaposisi 66 dan 246 poli-G [Cavalier et al., 2000]. • Dapatmenguntungkandanmerugikandibidangforensik. 26/05/10 Seminar TugasAkhir 7/20
Metode Sampel Lisis Templat DNA PCR Fragmenhasil PCR Elektroforesis Sequencing Elektroforegram Analisisin silico Perbandinganurutannukleotida 26/05/10 Seminar TugasAkhir 8/20
Kondisi PCR 94°C 94°C 72°C 72°C 5:00 1:00 1:00 4:00 50°C 4°C 1:00 ̴̴ denaturasi elongasi annealing 26/05/10 Seminar TugasAkhir 9/20
Sequencing • Terminasi DNA polimerasemelaluipenambahanddNTP yang kehilangangugushidroksipadakarbon 3’ darigularibosa. • DNA polimerasetidakdapatmembentukikatanfosfodiesterantaradNTPsebelumnyadenganddNTP. [Sanger et al., 1977]. 26/05/10 Seminar TugasAkhir 10/20
TahapSequencing • Denaturasi templatDNA • Penempelan primer (annealing) • Polimerisasi • Terminasi oleh ddNTP yang telah diberi senyawa fluororesent • Elektroforesis 26/05/10 Seminar TugasAkhir 11/20
Hasilelektroforesis 1419 pb ± 0,9 kb 517 pb 397 pb 214 pb marker - + pankreas Usushalus 26/05/10 Seminar TugasAkhir 13/20
Elektroforegram 26/05/10 Seminar TugasAkhir 14/20
Analisishasilsequencing 26/05/10 Seminar TugasAkhir 15/20
Perbandinganantarjaringan • Tidakadaperbedaanurutannukleotidaantarausushalusdenganpankreas. 26/05/10 Seminar TugasAkhir 16/20
PerbandinganSampeldenganrCRS 26/05/10 Seminar TugasAkhir 17/20
Pembahasan • Sampelusushalusdanpankreasindividu A: tidakadaperbedaanurutannukleotida. • Individu A: tidakadaperbedaanurutannukleotidaantarjaringanpadalapisan mesoderm [Unwakoly,2010]. • Individu B: perbedaanurutannukleotidapadalapisan mesoderm dan endoderm [Yuniarti, 2009] danpadalapisanektoderm [Masykura, 2009]. • Tidakadamutasisaatpembentukanlapisanembrionikpadaindividutertentu. 26/05/10 Seminar TugasAkhir 18/20
Pembahasan • rCRS 9 C dan 1 T padaposisi 16184-16193 • Perubahanurutannukleotida T16189C poli-C 10 basa [Faika, 2006] • Perubahanurutannukleotida A16183C, T16189C, dan A16194C poli-C 12 basa. • Adanya sub populasi (heteroplasmi) menyebabkantidakterbacanyaurutannukleotidasetelahpoli-C. 19/20 26/05/10 Seminar TugasAkhir
Kesimpulan • Diperolehhomologi 100% urutannukleotidaantarasampelusushalusdanpankreaspadaindividu A. • Terdapat 12 perbedaanurutannukleotidaantarasampeldenganrCRS. • Keduasampeltermasukheteroplasmi 26/05/10 Seminar TugasAkhir 20/20