1 / 12

Efteruddannelse i Bioteknologi

Efteruddannelse i Bioteknologi. Kursus A Genomisk DNA. Kursus indhold. Isolering af genomisk DNA. Dyrk eller indsaml celler/væv Riv væv og lyser celler med kemiske, enzymatiske eller fysiske metoder Fjern cellerester Fjern resterende proteiner Isoler gDNA Koncentrer DNA

buck
Download Presentation

Efteruddannelse i Bioteknologi

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Efteruddannelse i Bioteknologi Kursus A Genomisk DNA

  2. Kursus indhold

  3. Isolering af genomisk DNA • Dyrk eller indsaml celler/væv • Riv væv og lyser celler med kemiske, enzymatiske eller fysiske metoder • Fjern cellerester • Fjern resterende proteiner • Isoler gDNA • Koncentrer DNA • Analyser for koncentration og renhed

  4. Åbning af væv og celler

  5. Lysis af celler • Lysisbuffer: • Buffer (puffer) • EDTA • Detergent • SDS • Sarcocyl • Triton X-100 • CTAB (cetyl trimethyl ammonium bromid) • PVP (polyvinylpyrrolidon) • Protease • RNAse

  6. Isolering af DNA Silica-baseret isolering Silica Diatomert jord Glas Glasfiberfilter Chaotropisk salt Guanidinium hydrochlorid Guanidinium thiocyanat Natriumiodid Natriumperchlorat Ammoniumsulfat Vaskeopløsning KPO4 pH 8.0 + 80% EtOH

  7. Isolering af DNA • Ionbytning på minikolonne • Ekstraktion med organisk opløsningsmidler • Phenol • Phenol/chloroform • Chloroform • Diethylether

  8. Koncentrering af DNA opl. • Fældning • pH 4 • Høj [salt] • NaCl • KAc • NaAc • Ethanol eller isopropanol • -20°C

  9. Koncentration og renhed • Koncentration • Absorbans ved 260nm (OD260 ≈ A260) • A260 = 1 => [DNA]= 50µg/mL • Renhed • A260:A280 = 1,8 => rent DNA • A260:A280 < 1,8 => DNA forurenet med protein • A260:A280 > 1,8 => DNA forurenet med RNA

  10. Agarosegelelektroforese

  11. Gennemgang af forsøgsvejledning Se i mappen

More Related