Modalità di prelievo dei campioni microbiologici ed ematici

1. Azienda Ospedaliera di Cosenza UOC Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare Direttore: dr.CristinaGiraldi CORSO TEORICO/PRATICO DI AGGIORNAMENTO Ottimizzazione della fase preanalitica: qualità del campione biologico 15 NOVEMBRE 2010 Modalità di prelievo dei campioni microbiologici ed ematici Elisabetta Stomeo

2. Perché richiedere ed eseguire un esame microbiologico? DIAGNOSI EZIOLOGICA PROCESSI INFETTIVI DIRETTA INDIRETTA BATTERI MICETI PARASSITI VIRUS RICERCA ANTICORPI UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

3. DIAGNOSTICA DI LABORATORIO IN MICROBIOLOGIA E VIROLOGIA punti critici • richiesta del clinico • scelta degli esami • preparazione del paziente • raccolta del campione primario • trasporto del campione UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

4. UOC Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare Direttore dr. Cristina Giraldi Modulo dirichiesta • Datianagrafici del paziente • (sesso e data dinascita) • Tipodicampione • (sitoanatomico del prelievo) • Data e oradellaraccolta del campione • Esamidaeseguiresulcampione • Nome del medico richiedente Informazioniclinicherilevanti • sospettodiagnostico • motivodell’esame • terapiaantibiotica UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

5. DIAGNOSTICA DI LABORATORIO IN MICROBIOLOGIA E VIROLOGIA punti critici • richiesta del clinico • scelta degli esami • preparazione del paziente • raccolta del campione • trasporto del campione UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

6. La raccolta del campione • prima della terapia antibiotica (campione biologico) • durante e nella sede dell’infezione • utilizzo di presidi sterili e tecniche asettiche per evitarele contaminazione • in quantità sufficiente UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

7. Il prelievo • Identificazione del campione (nome del pz, data e ora del prelievo, materiale prelevato) • Consegna al laboratorio • Adozione di idonee modalità di conservazione alternative alla consegna immediata • Segnalazione di notizie cliniche al laboratorio UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

8. Terreno di Stuart Terreno di Amies Terreno Cary-Blair TERRENO DI TRASPORTO (FUNZIONI) 1. Conservazione e mantenimento della vitalità dei microorganismi contenuti nei campioni • Essiccazione • Acidi grassi tossici • Condizioni sfavorevoli di pH • Effetti letali dell’ossigeno atmosferico 2. Proteggere i microrganismi da: UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

9. Copan FlockedSWABS • DESIGN ERGONOMICO E ANATOMICOPer migliorare il comfort del paziente e l'efficienza nella raccolta di campioni • RAPID ELUIZIONE AUTOMATICOrilascio immediato e spontaneo, in mezzi liquidi • MIGLIORE RACCOLTA DEI CAMPIONIVelvet pennello texture di tipo rapido ed efficiente UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

10. Contenitori sterili : UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

11. Manuale Prelievo, conservazione ed invio dei campioni per indagini di: • microbiologia • virologia • sieroimmunologia • citofluorimetria • allergologia UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

12. Il laboratorio nella diagnosi delle sepsi EMOCOLTURA isolamento colturale di microrganismi nel sangue UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

13. EMOCOLTURA Ottimizzazione della procedura • Personale che effettua il prelievo • Sede del prelievo • Sterilizzazione della cute • Numero dei prelievi • Momento del prelievo • Volume del sangue • Mezzo di coltura XXXVII Congresso Nazionale AMCLI 2008 P.D. INFEZIONI DEL TORRENTE CIRCOLATORIO UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

14. EMOCOLTURA DA VENA PERIFERICA PER GERMI COMUNI • Set emocoltura (anaerobi e aerobi) • Set prelievo a circuito chiuso (vacutainer)  • Garza sterile  • Antisettico   (clorexidina alcolica 0,5% o soluzione alcolica 70% o soluzione iodata) • Guanti UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

15. Emocoltura: team per il prelievo Affidare il prelievo a personale competente ed informato • Weinbaum, J Clin Microbiol, 2001 • Shifman, Arch Pathol Lab Med, 1996 Revisione pratiche assistenziali UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

16. Antisepticskinpreparation Emocoltura: il prelievo • Lavare le mani prima e dopo il prelievo • Indossare guanti nei passaggi di raccolta e trasporto • Ricerca del sito di prelievo mediante palpazione • Disinfezione della cute: • sgrassare con Alcool 70% (o Clorexidina) • disinfettare con Iodoforo (Iodiopovidone) • applicare con movimento circolare verso • l’esterno, l'azione disinfettante è tempo-dipendente • Eseguire il prelievo quando la cute è asciutta • Mai pungere prima di 1-3 minuti UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

17. Emocoltura: sede del prelievo Effettuare il prelievo da vena periferica UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

18. BATTERIEMIE CATETERE - RELATE • Emocoltura quantitativa : • da catetere centrale • da vena periferica • Prelievo contemporaneo • Volume uguale • Incubazione contemporanea UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

19. Tempo del prelievo • Prima di iniziare la terapia antibiotica • Prima della somministrazione dell’antibiotico • Prelievi in rapida successione, a distanza di 5-10 minuti • Nell’endocardite subacute, 2 o 3 set a distanza di 30-60”, se negativi dopo 24h ripetere la campionatura UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

20. Numero di emocolture Prelevare 2 - 3 set (anaerobi + aerobi): • per aumentare la possibilità di isolare il microrganismo in causa • differenzia la vera batteriemia dalle contaminazioni UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

21. Quanto sangue prelevare ed immettere in ogni flacone ? “The volume ofbloodis the single mostimportantfactorforsuccessfulrecoveryofmicroorganismsfrom the bloodstreamofpatients” TownsML, InfectDisClin N Am, 2002 UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

22. Whatis the optimal volume ofbloodfor culture ? Bloodfrompatientswith IE contains 1 to 10 bacteria per mL Thereisapproximatelylinearrelationshipbetween the yieldofbacteriafromblood and the volume ofblood. “The volume ofblood sample drawnshouldbe 40-60 ml” TownsML, InfectDisClin N Am, 2002 UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

23. EMOCOLTURA • estrarre ago e gettarlo nel porta aghi • agitare gentilmente per evitare la • formazione di coaguli. • Invio tempestivo in M & V e conservato a temperatura ambiente UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

24. MATERIALI RESPIRATORI UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

25. MATERIALE RACCOLTO DA VIE RESPIRATORIE ALTE • ESSUDATO FARINGEO • TAMPONE NASALE • TAMPONE ORALE UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

26. TAMPONE FARINGEO Ricerca di Streptococchi beta emolitici A,C e G • rivolgere il pz verso sorgente luminosa • utilzzare abbassalingua • strofinare vigorosamente il tampone sia sulle tonsille/aree tonsillari sia sul retro-faringe, evitando di toccare le mucose delle guance, la lingua, l’ugola, le labbra • riporre il tampone nel terreno di trasporto (Stuart) • Invio entro max 12 ore a temperatura ambiente UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

27. TAMPONE NASALE inserire nella narice un tampone sottile per circa 2 cm stimolazione della tosse eseguire il tampone faringeo strisciare su un vetrino sia il tampone nasale che il faringeo UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

28. TAMPONE ORALEIndicato nelle lesioni micotiche del cavo orale • Risciacquare la bocca con soluzione fisiologica • Tamponare la lesione con una garza sterile e asciutta • Strofinare vigorosamente il tampone sterile sulla lesione per raccogliere il materiale essudativo o ulcerativo UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

29. Secrezione congiuntivale UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

30. TAMPONE OCULARE Ricerca di batteri, virus e miceti • Inumidire il tampone con fisiologica o acqua sterile • Allontanare la palpebra dal bulbo oculare • Raccogliere secrezioni con tampone • Inserire tampone nel contenitore contenente terreno di coltura Invio tempestivo UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

31. SECREZIONE AURICOLARE UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

32. TAMPONE AURICOLARE Ricerca di batteri e miceti UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

33. MATERIALE RACCOLTO DA VIE RESPIRATORIE PROFONDE (escreato, lavaggio bronco-alveolare, broncoaspirato) UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

34. Escreato Risciacquare la bocca con fisiologica sterile per limitare contaminazioni da cibo, colluttori, farmaci Raccogliere il materiale con un colpo di tosse direttamente nel contenitore sterile Invio tempestivo in M&V UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

35. Espettorato indotto • Risciacquare la bocca con fisiologica sterile per limitare le contaminazioni • Far precedere la raccolta da aerosol con soluzione salina • Raccogliere il materiale con un colpo di tosse direttamente nel contenitore sterile UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

36. Espettorato indotto Per la diagnosi di M.tuberculosis inviare almeno n°3 campioni in giorni diversi UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

37. CAMPIONI DESTINATI ALLA RICERCA DI MICOBATTERI Broncoaspirato BAL Sangue Liquor Pus Tessuti Linfonodi Feci EscreatoUrine UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

38. RICERCA MICOBATTERI urine La prima urina del mattino (almeno 50-100 ml) raccolta in più contenitori sterili Eseguire il prelievo per TRE giorni consecutivi UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

39. RICERCA MICOBATTERI sangue Eseguire il prelievo con le stesse modalità del prelievo per germi comuni Utilizzare flaconi dedicati specificamente alla ricerca di micobatteri (Myco/F) UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

40. INFEZIONI VIE URINARIE raccolta del campione MITTO INTERMEDIO CATETERE VESCICALE SACCHETTO DI PLASTICA ADESIVO

41. Raccolta delle urine mediante "mitto intermedio" MATERIALE PER LA RACCOLTA • MODALITA’ DI PRELIEVO • prima urina del mattino • lavare accuratamente le mani con acqua e sapone • pulire accuratamente e ripetutamente i genitali esterni con acqua e sapone • risciacquare con acqua corrente • urinare scartando il primo getto (circa 20 ml) e, senza interrompere la minzione, raccogliere direttamente nel contenitore il mitto intermedio • riempire non oltre la metà avendo l’accortezza di non contaminare, con le mani o con i genitali, i bordi o l’interno del contenitore • richiudere il contenitore

42. Raccolta delle urine mediante catetere MATERIALE PER LA RACCOLTA • CATETERE A PERMANENZA • chiudere il catetere con una pinza, al di sotto del raccordo con la sacca, per almeno un’ora • disinfettare un tratto di catetere al di sopra della giunzione col tubo di raccordo • aspirare con una siringa sterile circa 10 ml di urina ed immetterli nell’apposito contenitore

43. Raccolta delle urine mediante sacchetto di plastica adesivo • MODALITA’ DI PRELIEVO • detergere accuratamente la regione sovrapubica, perianale e i genitali esterni con soluzione saponosa • risciacquare a lungo e asciugare • applicare il sacchetto, facendolo aderire al perineo ed alla regione sovrapubica • appena avvenuta la minzione rimuovere il sacchetto e versare l’urina nell’apposito contenitore sterile o inviarlo in Laboratorio dopo averlo accuratamente chiuso • non lasciare “in situ” per più di 45-60 minutii 1 2 4 3

44. Tratto urogenitale femminile (vaginale, uretrale) Ricerca di Gardnerella vaginalis, Trichomonas vaginalis, Streptococcus agalactiae, Candida spp. su richiesta specifica Micoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

45. Ricerca Micoplasma hominis Ureaplasma urealyticum Terreno liquido pronto all’uso contiene beta-lattamici e sulfamide (per inibire la crescita batterica) Conservazione (dopo inoculo) a T.A per 8 ore o a 2-8°C per 36 ore Terreni di trasporto per ricerche particolari Ricerca di Chlamydia trachomatis Neisseria gonorrhoeae Conservazione (dopo inoculo) a T.A per 8 ore o a 2-8°C per 36 ore UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare

47. PRELIEVI CERVICO VAGINALI RICERCA HPV Campionamento effettuato con spatola Ayre e con Cytobrush a livello di esocollo, endocollo e fornici. Stemperare il materiale nell’apposita provetta contenente soluzione fisiologica sterile. Il prelievo può rimanere a temperatura ambiente per alcune ore o a 4°C per tempi più lunghi. prelievo ottimale : 500.000-600.000 cells totali=10.000 cells/ml

48. RICERCA HPV Preparazione della paziente. • Il test va effettuato 5 giorni prima o 5 giorni dopo  le mestruazioni • Astensione del rapporto sessuale per 2 giorni • Dopo 5 giorni da visita ginecologica o uso di lavande, ovuli o creme vaginali 

49. Ricerca e tipizzazione del Papillomavirus Umano (HPV) mediante PolimeraseChainReaction cognome nome provenienza medico curante data di nascita cod. fiscale indirizzo n.tessera sanitaria notizie cliniche esami citologici o istologici : topografia cervicale, vaginale, vulvare IL MEDICO ESECUTORE ( firma leggibile)

50. Tratto urogenitale maschile (TAMPONE URETRALE O URINE PRIMO MITTO) Ricerca di batteri aerobi, Neisseria meningitidis, Candida spp. Chlamydia trachomatis, Micoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum UOC di Microbiologia e Virologia Clinica e Molecolare