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Concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II 11 Juillet 2006 Stéphanie COCHAUD

Concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II 11 Juillet 2006 Stéphanie COCHAUD. Curriculum Vitae. 2005-2006 : Master 2 Recherche Biologie, Santé et Agronomie. Mention B 2004-2005 : Master 1 Biologie, Santé et Agronomie.

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Concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II 11 Juillet 2006 Stéphanie COCHAUD

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Presentation Transcript

  1. Concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II 11 Juillet 2006 Stéphanie COCHAUD

  2. Curriculum Vitae 2005-2006 : Master 2 Recherche Biologie, Santé et Agronomie. Mention B 2004-2005 : Master 1 Biologie, Santé et Agronomie. Parcours : Biologie Moléculaire et Génétique. Mention B 2003-2004 : Licence Physiologie, Biologie Cellulaire et Moléculaire. Mention B 2001-2003 : DEUG Sciences de la Vie. Mention B Stages réalisés : Master 1: Laboratoire des Biomembranes et signalisation (CNRS-UMR 6187) Pôle Biologie Santé, POITIERS Master 2 : Laboratoire Interactions et communications cellulaires (CNRS-UMR 6187) Pôle Biologie Santé, POITIERS

  3. Stages Master 1et Master 2 Régulation de l’expression de gènes de facteurs transcriptionnels lors de la différenciation des cellules de neuroblastomes SH-SY5Y induite par le VIP. Sujet de Master 1 : Sujet de Master 2 : Modification de l’expression génique dans la lignée cellulaire tumorale pulmonaire NCI-H157 après réexpression de la sémaphorine SEMA3F Formation :-Culture cellulaire - RT-PCR classique et quantitative - Séquençage - Immunofluorescence - Dosage ELISA - Western blot

  4. Projet de recherche Fonction anti-métastasique de KAI1/ CD82, une protéine de la famille des tétraspanines

  5. Les tétraspanines Forment une superfamille de protéines Impliquées dans de nombreuses fonctions Levy et Shoham, Physiology (2005).

  6. La tétraspanine KAI1/CD82 • Identifiée au cours de l’étude de l’activation des cellules T • Protéine ubiquitaire • Impliquée dans la cancérogénèse

  7. Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82 KAI1/CD82 Intégrines β1 FAK CAS Baisse de l’adhérence cellulaire Baisse de la dégradation de la matrice extracellulaire MMP9 Jee et al., BBRC (2006) Intégrine α6β1 P Src P P Inhibition de la migration cellulaire Sridhar et Miranti, Oncogene (2006) He et al., J. Biol. Chem. (2005)

  8. Problématique Quels sont les mécanismes intervenant dans l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ?

  9. Les objectifs 1. Etudier in vivo l’activité anti-métastasique de KAI1/CD82. 2. Déterminer les mécanismes moléculaires mis en jeu

  10. Approche in vivo

  11. Réexpression de KAI1/CD82 Clones réexprimant KAI1 Clones contrôle pCDNA3.1-KAI1 • Sélection des clones par G418 • Expression de KAI1 par Western blot et par FACS Cellules parentales : PC3 pCDNA3.1-KAI1 (vecteur vide)

  12. Etude in vivo de la réexpreesion de KAI1 Clones réexprimant KAI1 Clones contrôle • Etude de la formation des métastases • Etude du volume de la tumeur • Etude de la vascularisation de la tumeur Injection sous cutanée Souris nude BALB/c

  13. Résultats attendus • Absence de métastases après réexpression de KAI1/CD82 • Volume tumoral inchangé après réexpression de KAI1/CD82 • Vascularisation tumorale inchangée après réexpression de KAI1/CD82 • L’activité anti-métastasique de KAI1/CD82 ne serait pas du : • - à une activité anti-proliférative • - à une activité anti-angiogénique • Mais, en empêchant la migration et l’invasion cellulaire.

  14. Approche in vitro

  15. Etude de la migration cellulaire Perte de l’adhérence : (- test d’adhérence) (- test de migration) Intégrines β1 P CAS DOCK180 Crk Anticorps 8A2 Anticorps P5D2 KAI1/CD82 ? ? Src P P CAS (Immunoprécipitation) FAK P Rac-GDP Réorganisation de l’actine (migration cellulaire) Rac-GTP (Pull-Down) (Immunofluorescence)

  16. Résultats attendus • Perte d’adhérence et perte de la migration cellulaire • Inhibition de la voie Src/FAK/CAS/Dock 180 • Diminution de l’activité des petites protéines G • Modifications de la morphologie cellulaire • Mise en évidence de KAI1 dans l’inactivation d’une voie de signalisation impliquée dans la migration cellulaire.

  17. Conclusion Utilisation de 2 approches (in vivo et in vitro) Activité anti-métastasique de KAI1 Meilleure compréhension de KAI1 Perspectives : Quelles sont les parties structurales nécessaires à la fonction de KAI1? Quels sont les facteurs entraînant la perte d’expression de KAI1?

  18. KAI1/CD82 : un supresseur de métastases Merci de votre attention

  19. Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82 Liu et Zhang,Cancer Letters(2006)

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