Approche « théragnostique »

1. APPLICATION DES TECHNIQUES « IN SITU » (IMMUNO-HISTO-CHIMIE ET HIS) DANS LA PRISE EN CHARGE D’UNE TUMEUR DU SEINDr Olivier RENAUDService d’anatomie-pathologiqueCHU POITIERS

2. Intérêt pronostique Décision thérapeutique Immuno-histo-chimie Approche « théragnostique »

3. Immunohistochimie Hybridation in situ FISH CISH RT PCR et Elisa Méthodes de détection :

5. semi-quantitative % de cellules intensité du marquage récepteurs oestro et progestéroniques marquage nucléaire Récepteurs hormonaux :

6. réc. œstrogène x 400

7. Récepteur d'un facteur de croissance Human Epidermal growth factor Receptor-2 Glyco-protéine transmembranaire HER2 Famille des erbB tyrosine kinase Proto-oncogène c-erbB2 ou HER2-neu code pour le gène 185Her2 Chromosome 17q21 HER2 : définition

8. Intervient dans la régulation de la croissance, de la division et de la différenciation cellulaire Surexpression induit le maintien de son activation et la persistance des signaux vers le noyau pouvant entraîner dans certains cas une transformation maligne

9. Surexpression dans 20 à 30 % des cancers du sein Facteur de risque Traitement par trastuzumab (Herceptin)

11. chaque récepteur HER existe sous forme de monomère en équilibre avec des dimères qui sont stabilisés par un ligand. • HER2 peut former des complexes soit avec lui-même (homodimères HER2/HER2), soit avec d'autres membres de la famille HER (hétérodimères en général HER2/HER3).

13. La protéine HER2 possède 3 domaines :1) un site extracellulaire de fixation du ligand qui reçoit les signaux de l'extérieur2) un petit segment lipophile transmembranaire qui transmet les informations à travers la membrane 3) une partie intracellulaire à activité tyrosine kinase qui active le signal de transduction du cytoplasme vers le noyau.

14. Application aux cancers du sein

15. Application aux cancers du sein

16. Application aux cancers du sein Les cellules normales possèdent 2 copies du gène HER2 et expriment un taux normalement bas de récepteur HER2 à leur surface. La surexpression de HER2 peut se faire par plusieurs mécanismes

17. Application aux cancers du sein Étude in vitro : Transfection de gène sur culture cellulaire

18. Application aux cancers du sein

19. Application aux cancers du sein

20. 0 : Absence de marquage ou marquage membranaire < 10% 1+ : Marquage faible et partiel > 10% des cellules

21. 2+ : Marquage membranaire faible ou modéré mais complet > 10% des cellules 3+ : Marquage membranaire fort et complet > 10% des cellules

26. Nécessité de savoir s'il y a amplification génique ou pas Traitement uniquement des cas amplifiés 2 gènes par cellule, amplification à partir de 6 Méthode FISH ou CISH Possibilité de faire une recherche sur blocs paraffinés même anciens (sauf fixation par le Bouin) Détection du centromère 17 dans le même temps par FISH Problème des scores 2+ :

27. 2+

28. Approches sans contrôle morphologique PCR Taux circulant d’ECD HER2 : Méthodes actuelles Approches morphologiques FISH CISH IHC visualisation des cellules portant le signal

29. FISH • Coupe fixée (pas Bouin !) • Différents kits • Pathvysion (2 sondes) • Dako  (2 sondes) • Inform® (1 sonde) • Microscope à fluorescence • Signal  avec le temps Pré-traitement Hybridation Interprétation

30. Les amplifications Augmentation du nombre de copies d’un gène sur le chromosome

31. ≠ ANEUPLOÏDIE

32. Cas N°1 : Amplification HER2

33. Cas N°2 : Polysomie

34. Technique CISH • Peut remplacer la FISH (concordante) • Plateau technique plus simple • Microscope optique • Conservation des lames • Kits commerciaux • Zytovision-Clinisciences • Zymed (Invitrogen) • Accord européen en octobre 2005 HER2 gene

35. Amplification Absence d’amplification Exemples de CISH Repérage au x20 Lecture au x40 >50% cellules tumorales (Zymed) Utiliser un contrôle positif à chaque manip+++

36. Sous-type luminal Sous-type HER2+ Sous-type basal-like Sous-type normal breast like Corrélation/biologie moléculaire Perou CM, Sorlie T, Eisen MB et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature 2000 ; 406 (6797) : 747-52

37. A et B Réceptivité hormonale forte CK8/18/19 et GATA RE alpha – exprimé dans le sous-type B A = monothérapie antihormonale B = + chimio Sous-type luminal

38. Associé à Ki 67 élevé Traitement par Herceptin Sous-type HER2+

39. RE/RP/HER2 négatifs Positivité de CK5/6 et EGFR Souvent mutation de BRCA1 Englobe carcinomes médullaires et carcinomes métaplasiques Traitement = taxanes ? Sous-type basal-like

40. Reste des tumeurs inclassables (basal-like CK5/6 et EGFR -) Médullaire : bon pronostic alors que basal-like Sous-type luminal ne distingue pas les RP (RP- : anti-aromatase) Limites de cette classification

41. Cellules cancéreuses circulantes sang moëlle osseuse Urokinase type activateur du plasminogène (uPA) et son inhibiteur (PAI1) Nouvelles recherches

42. Outils « omics » génomique protéomique Nanotechnologies Nouvelles méthodes

43. Méthodes d’intérêt pronostique et thérapeutique. En pratique courante : Rec Horm et HER2 HER2 surexpression facteur de mauvais pronostic permet traitement par Herceptin toxicité d'Herceptin et coût très élevé du traitement imposent une méthode fiable de détection devant un score 2+, nécessité de rechercher une amplification génique (FISH ou CISH) sont traités les scores 3+ et 2+ amplifiés Conclusion :