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ASPECTOS MOLECULARES, CELULARES E TECIDUAIS EM MODELOS DE DOENÇAS METABÓLICAS EM FÊMEAS

ASPECTOS MOLECULARES, CELULARES E TECIDUAIS EM MODELOS DE DOENÇAS METABÓLICAS EM FÊMEAS Eliana Hiromi Akamine Departamento de Fisiologia e Biofísica – ICB – USP setembro/2006.

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ASPECTOS MOLECULARES, CELULARES E TECIDUAIS EM MODELOS DE DOENÇAS METABÓLICAS EM FÊMEAS

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  1. ASPECTOS MOLECULARES, CELULARES E TECIDUAIS EM MODELOS DE DOENÇAS METABÓLICAS EM FÊMEAS Eliana Hiromi Akamine Departamento de Fisiologia e Biofísica – ICB – USP setembro/2006

  2. ÓXIDO NÍTRICO, ESPÉCIES REATIVAS DO OXIGÊNIO E PROSTANÓIDES NA VASODILATAÇÃO DEPENDENTE DO ENDOTÉLIO DE RATAS DIABÉTICAS

  3. AGONISTA R R - Célula Endotelial EDRF EDCF - TXA2 AA O2- PGI2 EDHF NO + PGF2 PGH2 - - PGI2 EDHF NO Diabetes Diabetes + Diabetes RT Adenilato Ciclase Guanilato Ciclase - K+ K+ GTP ATP GMPc AMPc Ca2+ Célula do Músculo Liso Vascular Relaxamento Contração De Vriese. Br J Pharmacol, 130:963-974, 2000

  4. DIFERENÇAS SEXUAIS NO DIABETES MELLITUS As alterações vasculares do diabetes mellitus são mais acentuadas em fêmeas: - BARRETT-CONNER et al., 1991; BELL, 1994; PINNA et al., 2001; MAYHAN et al., 2002; MARRA et al., 2002; CHAN et al., 2003; DABELEA et al., 2003; THE DECODE STUDY GROUP, 2003; TOLEDO et al., 2003.

  5. OBJETIVOS Avaliar o envolvimento do sistema do óxido nítrico, espécies reativas do oxigênio e da via da ciclooxigenase na disfunção vascular de ratas diabéticas. Verificar o efeito do tratamento crônico com insulina na disfunção vascular nesse modelo.

  6. INDUÇÃO DO DIABETES Animais: ratas Wistar, 8-10 semanas Indução do diabetes: aloxana, 40 mg/kg, i.v. Foram utilizadas ratas diabéticas com níveis glicêmicos acima de 200 mg/dl Tratamento com insulina: 2 UI/animal/dia, durante 12 dias, via subcutânea

  7. RESULTADOS

  8. Características gerais

  9. Microscopia intravital 20.2

  10. acetilcolina 10 8 * 6 11 10 10 4 Controle Diabética Diabética + insulina 2 0 bradicinina * 10 09 09 09 8 6 Controle Diabética Diabética + insulina 4 2 histamina 0 8 6 ** 4 2 09 07 09 0 Controle Diabética Diabética + insulina % aumento diâmetro inicial Akamine et al. J Vasc Res, 43:309-320, 2006

  11. INSULINA DIABETES ? ? NOS

  12. ** ** pmol/min/mg proteína 80 60 Controle Diabética Diabética + insulina 40 20 0 eNOS/GADPH 04 04 04 GADPH Controle Diabética Diabética + insulina eNOS 1,5 1 0,5 0 Atividade NOS Expressão eNOS

  13. DIABETES Atividade - NOS BH4 ? Expressão - NOS

  14. ** 10 8 11 09 09 6 Diabética após BH4 Controle Diabética 4 2 bradicinina 0 *** 09 09 09 8 Controle Diabética Diabética após BH4 6 4 2 *** 0 09 08 08 Controle Diabética Diabética após BH4 8 6 4 2 0 acetilcolina % aumento diâmetro inicial histamina

  15. BH4 L-arginina + O2 BH4 O2- NOS ? L-citrulina + NO ? ? DIABETES INSULINA

  16. Basal Estimulada BH4 - Diabética + insulina Diabética + insulina Controle Diabética Controle Diabética BH4 + Basal Bradicinina Histamina Acetilcolina Controle Diabética Diabética + insulina † † † índice de fluorescência ‡ ‡ ‡ * * 14 12 10 - + - + - + - + BH4 8 6 4 2 0

  17. INSULINA ? DIABETES L-arginina + O2 BH4 ? ? O2- NOS ? L-citrulina + NO BH4

  18. * % núcleos marcados 08 08 15 06 08 C D D + insulina D + BH4 D + L-NAME 70 60 50 40 30 20 10 0 Controle Diabética Diabética + insulina Diabética + BH4 Diabética + L-NAME

  19. L-arginina + O2 BH4 ? O2- vasodilatação NOS L-citrulina + NO

  20. * 8 09 09 09 6 4 Controle Diabética Diabética após MnTMPyP 2 0 * 09 09 09 8 Controle Diabética Diabética após MnTMPyP 6 4 2 * 0 11 11 11 Controle Diabética Diabética após MnTMPyP 8 6 4 2 0 acetilcolina bradicinina % aumento diâmetro inicial histamina

  21. L-arginina + O2 BH4 ? SOD O2- H2O2 NOS L-citrulina + NO

  22. * 0,6 0,4 U/ml 0,2 07 08 07 0 Controle Diabética Diabética + insulina GADPH Cu/Zn SOD 1,6 1,2 Cu/Zn SOD/GADPH 0,8 0,4 04 04 04 0 Controle Diabética Diabética + insulina Atividade Cu/Zn SOD Expressão Cu/Zn SOD

  23. DIABETES ? COX ? Vasodilatação

  24. * 8 12 12 12 12 6 C C + diclofenaco D D + diclofenaco 4 2 0 * 10 10 11 12 C C + diclofenaco D D + diclofenaco 10 8 6 4 2 ** 0 09 09 09 09 C C + diclofenaco D D + diclofenaco 8 6 4 2 0 acetilcolina bradicinina % aumento diâmetro inicial histamina Akamine et al. J Vasc Res, 43:401- 410, 2006

  25. DIABETES ? Prostanóides ? Vasodilatação

  26. 100 mmHg 50 0 1:43:20 1:45:00 1:46:40 1:48:20 1:50:00 1:51:40 1:53:20 60 l de acetilcolina 10-5 M Registro típico da reatividade do leito arteriolar perfundido Noradrenalina – 10-5 M

  27. Reatividade - acetilcolina

  28. PGF2 Basal Acetilcolina †††* 350 280 210 PGF2 (pg/ml) 140 70 05 07 05 05 0 C D C D

  29. TXA2 Basal Acetilcolina 120 90 TXA2 (pg/ml) 60 * * 30 06 06 05 06 0 C D C D

  30. Prostaciclina Basal Acetilcolina 2000 1600 †* 1200 Prostaciclina (pg/ml) 800 400 05 06 06 06 0 C D C D

  31. DIABETES ? O2- COX PGF2 / TXA2 / prostaciclina

  32. * 70 60 50 40 % núcleos marcados 30 20 10 08 08 12 0 C D D + diclofenaco Controle Diabética Diabética + diclofenaco

  33. DIABETES ? ONOO- NO + O2- COX PGF2 / TXA2 / prostaciclina

  34. * Densidade óptica 04 04 180 Diabética Controle 160 140 120 100 80 60 40 20 0 Expressão de proteínas contendo nitrotirosina Controle Diabética 50kDa 30kDa 20kDa

  35. BH2 BH4 Diabetes L-arginina + O2 H2O2 BH4 SOD O2- NOS + ONOO- L-citrulina + NO + SOD O2- H2O2 COX PGF2 / TXA2 / prostaciclina Vasodilatação

  36. AGRADECIMENTOS Zuleica B. Fortes Dorothy Nigro Maria Helena C. Carvalho Rita de Cássia A. Tostes Maria Aparecida de Oliveira Anna Elisa Tiyeko Urakawa Sônia Maria R. Leite Carla Roberta O. Carvalho Luciene Maria Ribeiro Anderson Carlos Marçal Silvana Bordin Luciana Chagas Caperuto Luciana Rossoni Camila Venceslau Ana Paula Davel Renata Koba Cristóforo Scavone Elisa M. Kawamoto Luiz Roberto G. Britto

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