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HIV… = Human Immunodeficiency virus et le sida

HIV… = Human Immunodeficiency virus et le sida. La pandémie du sida. La pandémie du sida. 1. Le virus. 1.1. Les découvreurs. 1.2. Le virus au MET. 1.3. Analyse biochimique du virus. Après marquage des acides aminés. Marqueurs de masse molaire. Après marquage de la glucosamine.

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HIV… = Human Immunodeficiency virus et le sida

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Presentation Transcript

  1. HIV… = Human Immunodeficiencyviruset le sida HIV sida 2006

  2. La pandémie du sida HIV sida 2006

  3. La pandémie du sida HIV sida 2006

  4. 1. Le virus HIV sida 2006

  5. 1.1. Les découvreurs HIV sida 2006

  6. 1.2. Le virus au MET HIV sida 2006

  7. 1.3. Analyse biochimique du virus Après marquagedes acides aminés Marqueurs de masse molaire Après marquagede la glucosamine électrophorèse sur gel de polyacrylamide à 12 % HIV sida 2006

  8. 1.4. Représentation du virus gp120 gp41 enveloppe nucléocapside p24 2 RNA monocaténaires identiques Transcriptase réverse HIV sida 2006

  9. 1.5. Les protéines de surface HIV sida 2006

  10. 1.6. Le génome du HIV Transcriptase réverseProtéase HIV sida 2006

  11. V.1.1. Arbre phylogénétique Cette figure illustre le fait que les virus VIH-1 et VIH-2 ont des origines mèlées à celles des SIV simiens et forment plusieurs groupes. Cela indique qu’ils sont issus de plusieurs transmissions du singe à l’homme. Le groupe le plus important du VIH-1, responsable de la pandémie actuelle, est le groupe M. Celui-ci s’est divisé en de multiples types au cours de l’évolution chez l’homme. Le type dominant aux EU et en Europe est le type B, bien qu’en Belgique de nombreux types soient présents. Les différents types ont donné naissance à des formes recombinantes appelées CRF (circulating recombinant forms). Le VIH-2 est issu de deux transmissions indépendantes à partir d’un foyer simien, donnant les groupes A (le plus commun) et B. http://www.afd-ld.org/~fdp_viro/content.php?page=sida HIV sida 2006

  12. 2. Cycle de multiplication HIV sida 2006

  13. Le cycle en movie HIV sida 2006

  14. La replication du HIV RNA DNA RNA HIV sida 2006

  15. 3. La maladie HIV sida 2006

  16. 3.1. Transmission, symptômes, formes de la maladie • La maladie est clairement liée à une IMMUNODÉPRESSION SÉVÈRE qui se traduit par des infections à : • champignons ( • parasites ( • bactéries ( • virus • Et des cancers (sarcome de Kaposi) HIV sida 2006

  17. 3.1. Transmission, symptômes, formes de la maladie • Transmission : • sexuelle • mère enfant • parentérale • drogue • produits sanguins HIV sida 2006

  18. 3.2. Paramètres HIV sida 2006

  19. Le sida : autres évolutions possibles Évolution classique Évolution explosive Évolution lentissime HIV sida 2006

  20. 4. Diagnostic • Le diagnostic du sida concerne deux virus HIV1 et 2. • Les techniques sont : • la recherche des anticorps • la recherche des antigènes : • protéines virales comme p24 • RNA viral HIV sida 2006

  21. 4.1. Isolement du virus HIV sida 2006

  22. 4.2. Recherche d’anticorps savonnette HIV sida 2006

  23. immunoenzymologie HIV sida 2006

  24. immunochromatographie HIV sida 2006

  25. Western-blot HIV sida 2006

  26. 4.3. Recherche d’antigène Ex : p24/Vidas, recherche combinée HIV sida 2006

  27. Charge virale Détecter le virus ne suffit pas pour adapter le traitement; La biologie moléculaire permet d’aller plus loin avec la mesure de la charge virale (nombre de copies de l’acide nucléique viral par mL de plasma) HIV sida 2006

  28. Technique NASBA (Nucleic acid sequence based amplification ) exemple pour HIV avec QR System(Organon Teknika) Échantillon + 3 contrôles internes Extraction des RNA RNA Rétrotranscription avec des amorces spécifiques du virus (gag pol) RNA et DNAc Les trois contrôles internes sont des RNA qui diffèrent de l'ARN du HIV par 20 nucléotides. Addition de RNAse DNAc du HIV Addition de T7 RNA polymérase Environ 100 copies RNA du DNAc • Limite de détection de : • 400 copies en partant de 1 mL de sérum, et • 4000 en partant de 100 µL. Nouveaux cycles à température constante Environ 109 copies RNA du DNAc Addition de sondes spécifiques(pour les contrôles et le RNA viral) Mesures de luminescence pour les contrôles et le virus HIV sida 2006

  29. Technique PCR quantitative (dite en temps réel ) exemple pour HIV avec Amplicor HIV-1 monitor (Roche Diagnostic Systems) Échantillon + contrôle interne Extraction des RNA RNA Rétrotranscription avec des amorces biotinylées spécifiques du virus (gag) RNA et DNAc Le contrôle interne est de concentration connue en RNA. Addition de RNAse ???? DNAc du HIV Cycles de PCR(avec la même polymérase Nombreuses copies du DNAc • Limite de détection de : • 400 copies en partant de 100 µL. Dépôt, dans des microplaques, de l’échantillonou de ses dilutions.Les puits comportent des sondes spécifiques biotinyléessoit du virus HIV soit du contrôle interne. Détection des amplicons par addition de PAL liée à l’avidine HIV sida 2006

  30. Technique capture-amplification du signalexemple pour Quantiplex HIV RNA (Chiron) Échantillon Extraction des RNA RNA Dépôt dans les puits d’une microplaque contenant des sondes fixées (gène pol) RNA viral fixé dans les puits Addition de sondes de DNA branchées marquées à la PAL Sondes DNA-Pal fixées sur le RNA viral retenu dans le puits Addition de subtrats • Limite de détection de : • 10 000 copies en partant de 1 mL. Mesure par chimiluminescence (amplification obtenue de 1800 fois par RNA viral) Conclusion avec la courbe d’étalonnage réalisée dans les mêmes conditions sur des RNA de concentration connue HIV sida 2006

  31. 5. Prévention et traitement HIV sida 2006

  32. 5.1. Prévention • Elle est fondée sur : • la détection des séropositifs pour limiter la transmission • le traitement des séropositifs pour réduire le « stock » de virus • il n’y a malheureusement pas de vaccin possible actuellement Le péril sexuel HIV sida 2006

  33. HIV sida 2006

  34. 5.2. Traitement • inhibiteurs de • inhibiteurs de • Les multithérapies AZT HIV sida 2006

  35. 6. Autres rétrovirus Les HTLV1 et HTLV2 (Human T Cell Leukemia Virus) identifiés chez l'homme comme responsables de leucémies des lymphocytes T appartiennent à cette famille. Ce sont des oncovirus à RNA. (voir Virus et cancers) Pr GALLO HIV sida 2006

  36. Fin HIV sida 2006

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