160 likes | 301 Views
Metabolické a anatomické odpovede rastlín na nedostatok vody v koreňovom prostredí. Projekt VEGA 2/4036/04 2004-2006 Vedúci projektu: M. Luxová. Hlavné ciele projektu.
E N D
Metabolické a anatomické odpovede rastlín na nedostatok vody v koreňovom prostredí Projekt VEGA 2/4036/04 2004-2006 Vedúci projektu: M. Luxová
Hlavné ciele projektu • zistiť vplyv použitého osmotického stresu na rastové parametre nadzemnej i podzemnej časti pri 13 dňových kultivaroch kukurice rôzne citlivých na sucho • určiť stanovením vytekania elektrolytov a peroxidáciou lipidov v rôznych orgánoch pokusných rastlín (koreň, mezokotyl, 1. a 2. list) stupeň poškodenia bunkových membrán • pozorovať indukciu syntézy osmoticky aktívnych látok a vybraných antioxidantov v jednotlivých orgánoch kukurice (prolín a askorbát) v kontrolných a stresovaných rastlinách
zaznamenať vzťah medzi rastom, obsahom cukrov a celkovou rýchlosťou respirácie a účasť cytochrómovej a alternatívnej cesty na celkovej respirácii u klíčencov kukurice počas stresu • izolovať mitochondrie z koreňov kontrolných a ovplyvnených klíčencov a stanoviť podiel jednotlivých metabolických ciest dýchania • zistiť vplyv stresu na obsah rozpustných a iónovo viazaných bielkovín vo všetkých študovaných orgánoch • stanoviť aktivitu a izozýmové zloženie vybraných antioxidačných enzýmov v kontrolných a stresovaných rastlinách ako obranný mechanizmus proti stresom tvoreným kyslíkovým radikálom
pretože vplyv osmotického stresu u starších rastlín na aktivitu antioxidačných enzýmov nebol jednoznačný - študovať časovú dynamiku zmien aktivity antioxidačných enzýmov (4-48h) pri 3 dňových klíčencoch sledovaných kultivarov • stanoviť aktivity enzýmov dusíkového metabolizmu- nitrátreduktázy, glutamátdehydrogenázy a glutamínsyntetázy na zistenie osmotického prispôsobenia sa stresu zo sucha
Materiál a metódy • ako pokusný materiál sa použili 3 dňové klíčence alebo 13 dňové rastliny kultivarovkukurice rôzne citlivých na sucho - citlivejší kultivar Ankora a Alpha a odolnejšie kultivary Nova , Tina a Thermo • stres suchom sa aplikoval formou osmotického stresu, ktorý sme navodili 0,3 a 0,4 M sorbitolom (- 1,4MPa stredný a -2,06 MPa silný stres) a jeho aplikácia trvala 4-24 h a pri niektorých experimentoch až 48 h • analýzy sa robili u klíčencov v primárnom seminálnom koreni a u mladých rastlín v 2cm apikálnych častiach seminálnych koreňov,v mezokotyle a v 1. a 2. plne vyvinutom liste
Výsledky • Pri štúdiu respiračných procesov klíčencov kukurice sa u všetkých sledovaných kultivarov počas sucha v koreňoch zaznamenal pokles celkovej rýchlosti respirácie, ktorý bol výsledkom poklesu obidvoch sledovaných respiračných dráh - cytochrómovej a alternatívnej.Porovnanie respiračných parametrov u jednotlivých kultivarov ukázalo, že neexistuje žiadna pozitívna alebo negatívna korelácia medzi odolnosťou a citlivosťou na sucho s aktivitami jednotlivých metabolických ciest dýchania.
PEROXIDÁCIA LIPIDOV • Peroxidácia lipidov ako indikátor poškodenia membrán radikálmi kyslíka ukázala, že pri suchu došlo k výraznému zvýšeniu peroxidácie v mezokotyle a listoch oboch kultivarov. V koreni sa preukazné rozdiely u odolnejšieho kultivaru nezaznamenali
OBSAH PROLÍNU • Obsah osmoticky aktívnej látky prolínu vzrástol vplyvom sucha vo všetkých sledovaných orgánoch, ale najvyšší nárast sa pozoroval v koreni citlivejších kultivarov Ankora a Alpha
Obsah vody v 2. plne vyvinutom liste sa po 24 h osmotickom strese preukazne znížil u oboch kultivaroch, ale rozdiel medzi nimi bol nepreukazný Strata vody v 2. plne vyvinutom liste bola v citlivejšom kultivare Ankora preukazne vyššia v kontrolnych i v stresových podmienkach
Pri sledovaní časovej dynamiky zmien aktivít antioxidačných enzýmov sa sledovali enzýmy SOD, APX, CAT a POX. Aktivita superoxiddismutázy vzrástla už v prvých hodinách pôsobenia osmotického stresu pričom tento nárast bol výraznejší a pretrvával dlhšiu dobu pri odolnejšom kultivare Nova.
Aktivita APX sa po pôsobení sucha v klíčencoch citlivejšieho kultivaru Ankora výraznejšie nezmenila. U odolnejšieho kultivaru Nova však aktivita tohto enzýmu vzrástla už po 4 h pôsobenia stresu.
Aktivita katalázy sa v klíčencoch citlivejšieho kultivaru Ankora zvýšila až po 24 h pôsobenia sucha.Odolnejší kultivar Nova reagoval zvýšením aktivity tohto enzýmu už po 4 h.
Zpredchádzajúcich zistení vyplýva, že na detoxifikácii H2O2 v klíčencoch cv. Nova sa podieľajú najmä enzýmy APX a KAT, preto sa aktivita POX výraznejšie nemenila. Pri citlivejšom kultivare Ankora spolupracovala peroxidáza s katalázou, ktorá odstraňovala H2O2 hlavne v neskorších hodinách pôsobenia stresu.
Publikačná činnosť • 4 SCI publikácie v zahraničnom časopise • 3 SCI publikácie v domácom časopise • 1 práca v zahraničnom nekarentovanom časopise • 3 príspevky zo zahraničných konferencií • 7 príspevkov z domácich konferencií s medzinárodnou účasťou
Riešiteľský kolektív • RNDr. K. Dekánková, CSc. - zástupca 2005 • RNDr. O. Gašparíková, CSc. – zástupca 2006 • Ing. J. Huttová • RNDr. P. Valentovič • RNDr. L. Kolarovič • RNDr. S. Vávrová - 2006 • p. I. Mravíková • p. M. Priehradný