ANATOMIE ET CYTOLOGIE PATHOLOGIQUES EN CANCEROLOGIE

1. ANATOMIE ET CYTOLOGIE PATHOLOGIQUES EN CANCEROLOGIE • Introduction • Technique « standard » (différentes étapes) • Examen extemporané • Technique immunohistochimique

2. PATHOLOGISTE • Rôle diagnostique et pronostique • Pathologie tumorale: Bénin/Malin • Tumeur maligne: • DIAGNOSTIC POSITIF • classification histopronostique (TNM) • BILAN PRETHERAPEUTIQUE

3. PATHOLOGISTE • Biopsie • Pièces d’exérèse chirurgicale • Examen extemporané • Examen histologique standard • Prélèvement cytologique • Nécropsie

4. EXAMEN HISTO-PATHOLOGIQUE « STANDARD » Différentes étapes • Fixation/Congélation en banque • Enregistrement du prélèvement • Inclusion en paraffine • Coupe du bloc inclus en paraffine • Coloration (Hématoxyline-phloxine-safran, HPS) • Examen microscopique • Rédaction du compte-rendu • Archivage des lames, des blocs d’inclusion et du double du compte-rendu

5. CONGÉLATION • Pratiquée de plus en plus souvent • Fragment tissulaire choisi par le pathologiste sur une pièce opératoire • Congélation dès que possible (minuté) • Vise à conserver intacts les acides nucléiques, les protéines, les germes,… • Stockage en azote liquide (-196°C) ou en congélateur (-80°C) • Utile pour les soins et la recherche

6. FIXATION • La pièce opératoire ou la biopsie fraîches seront adressées immédiatement à la structure d’anatomie pathologique où elle sera prise en charge. • Si la pièce doit être fixée sur place, l’ouvrir pour bien la fixer et la plonger dans 15 fois son volume de fixateur (protocole à établir avec le pathologiste). Les fixateurs sont des produits très toxiques. • Ne pas mettre les pièces dans du sérum physiologique ou de l’eau, de l’alcool...

7. MACROSCOPIE • Après fixation de 12 à 24H (parfois délai supplémentaire de décalcification), des prélèvements systématiques et dans les zones pathologiques sont réalisés sur la pièce opératoire (2,5 cm de côté, 3 mm d’épaisseur): • Limites de résection • Tumeur ou autre lésion • Ganglions du curage • Parenchyme à distance

8. Curage Mammectomie

9. Couper la pièce en tranches fines Cancer Encrer les limites d’exérèse Cancer

10. Dissection du curage

11. Tumeur Mamelon Prélèvements systématiques au niveau des différents quadrants Zone de mastopathie Curage

12. TECHNIQUE STANDARD • Inclusion en paraffine • Déshydratation dans bains d’alcool • Eclaircissement en bains de toluène • Imprégnation en paraffine à 56°C 1 2 3

13. TECHNIQUE STANDARD • Inclusion en paraffine • Bloc refroidi, confère rigidité au prélèvement permettant de le couper au microtome

14. TECHNIQUE STANDARD • Coupe de 4m étalée sur lame • Passage dans bains de toluène, d’alcool et d’eau (déparaffinage, réhydratation) • Coloration par l’HPS

15. TECHNIQUE STANDARD • Examen microscopique • Elaboration du compte-rendu • Frappe du compte-rendu • Envoi du compte-rendu • Archivage

16. COMPTE-RENDU (PATHOLOGIE TUMORALE) • Identification du patient, N° propre au Service • Description macroscopique • (Description des prélèvements) • Description histologique • Conclusion • Type histologique de la tumeur • Taille • Limites de résection chirurgicales • Métastases ganglionnaires • Grading histopronostique (pTNM,…)

17. DELAIS DE REPONSE 0 à 72H • Acheminement du prélèvement • Fixation • Techniques standard • Examen microscopique • Rédaction, frappe du compte-rendu • Acheminement du compte-rendu • En pratique : Réponse en 24H minimum pour les biopsies et 48H pour les pièces opératoires 6 à 48 H 4 à 16H 1 à 48H 0 à ?H

18. EXAMEN EXTEMPORANE • Diagnostic histopathologique rapide • En cours d’intervention chirurgicale • Dans le but de modifier le geste chirurgical • Technique « grossière » • Réponse « grossière » • Bénin/Malin (Douteux…) • Taille de la tumeur (macroscopique) • Limites

19. EXAMEN EXTEMPORANE 1. Prélèvement sur la pièce fraîche 2. Collée sur un plot 3. Congélation rapide à -30°C 1 3 2

20. EXAMEN EXTEMPORANE 4. Coupe au cryostat (20 m) 5. Etalement sur la lame 6. Coloration express au bleu de toluidine 7. Lecture au microscope 8. Communication du résultat (en 5’) 4 6

22. CYTOLOGIE • Techniquement plus simple: • Fixation instantanée • Pas d’inclusion en paraffine, mais dépôt sur lame • Coloration • Examen • Inconvénients : • Pas d’architecture tissulaire • Peu de techniques complémentaires possibles • Applications : • Dépistage (frottis du col utérin) • Trépied diagnostique : clinique, imagerie, cytologie (sein) • Ponction diagnostique à l’aiguille fine (FNAB) • Liquides organiques : extension de cancers

23. IMMUNOHISTOCHIMIE • Mises en évidence d’antigènes sur les préparations à l’aide d’anticorps spécifiques, révélés par une technique d’immunoperoxydase indirecte.

24. IMMUNOHISTOCHIMIE • Incubation de l’Ac primaire (Ac souris) (30’ dans tampon PBS/BSA) • Incubation de l’Ac secondaire (Ac lapin anti-souris) biotinylé (8’ dans tampon PBS/BSA) Ac secondaire biotinylé Ac primaire Ag Prélèvement Lame

25. IMMUNOHISTOCHIMIE • Application des complexes Streptavidine-Peroxydase (forte affinité avec la biotine) Ac secondaire biotinylé Complexe streptavidine peroxydase Ac primaire Ag Prélèvement Lame

26. Complexe streptavidine peroxydase IMMUNOHISTOCHIMIE • Révélation avec la Diaminobenzidine (chromogène qui réagit avec la peroxydase en présence d’eau oxygénée pour donner un produit coloré visible en MO) • Contre-coloration à l’hématoxyline de Meyer) Ac secondaire biotinylé DAB DAB DAB Ac primaire Ag Prélèvement Lame

27. Anticorps anti-cytokératine

28. IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt • Tumeur indifférenciée • Carcinome(marqueurs épithéliaux: Cytokératine, EMA) • Mélanome(marqueurs mélanocytaires: PS100, HMB-45, Melan-A) • Sarcome (marqueurs musculaires: actine, desmine, marqueurs vasculaires: CD31, CD34, marqueurs nerveux: PS100) • Lymphome (marqueurs lymphoïdes: CD3 (marqueur T), CD20 (marqueur B).

29. Tumeur thyroïdienne indifférenciée CD45 - (marqueur lymphoïde) PS100 - (marqueur mélanocytaire) Cytokératine + (marqueur épithélial)

30. IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt • Différenciation particulière • Carcinome: différenciation endocrine (Ac antichromogranine, Ac anti-synaptophysine) • Lymphome: Typage (lymphome B, T, anaplasique, maladie de Hodgkin) • Recherche de micrométastases d’un carcinome

31. CD20 - CD3 - CD30 + CD15 + MALADIE DE HOGKIN

32. IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt • Différenciation particulière • Carcinome: différenciation endocrine • Lymphome: Typage (lymphome B, T, anaplasique, maladie de Hodgkin) • Recherche de micrométastases d’un carcinome

33. Ganglion axillaire (curage d’un carcinome lobulaire du sein) Métastase ganglionnaire CK

34. IMMUNOHISTOCHIMIE Intérêt • Signes d’infection virale • CMV, EBV • Recherche de facteurs pronostiques • Récepteurs hormonaux (RO, RP) • Marqueurs thérapeutiques (CD20 pour les lymphomes B, C-erbB-2 pour les cancers du sein, c-kit pour les tumeurs stromales)

35. Carcinome lobulaire du sein RO+ C-erbB-2 - RP+

36. C-erbB-2

37. AUTRES TECHNIQUES • Hybridation in situ • Applique sur lame de sondes d’ADN ou d’ARN monocaténaire marquées, complémentaires de séquences d’ADN ou d’ARN que l’on recherche sur la coupe • Révélation par autoradiographie • Révélation histoenzymologique (sonde EBER pour le virus EBV)

38. G C T G G A G A C G A A G T A G G Sonde marquée C C A A G A A G T A G

39. Au total • Diagnostic • Classification histopronostique • Bilan pré-thérapeutique