Mikrobiologické poškodenie negatívov a možnosti ich odstránenia Ing. Alena Maková

1. Mikrobiologické poškodenienegatívov a možnosti ich odstráneniaIng. Alena Maková Spracovanie a ochrana negatívnych fotografických materiálov Workshop Slovenský národný archív Bratislava, 21.11.2012

2. Biologické poškodenie dokumentov je dôsledkom nedostatočnej preventívnej starostlivosti a zlých podmienok uloženia

3. Odkiaľ sa mikroorganizmy do skladov dostanú? Zosamotného kontaminovaného materiálu privezeného do inštitúcie – najčastejší neúmyselný kontaminat - od darcov, z depov vlhkých kláštorov, kaštieľov, kostolov, pivníc, povál ... Sprievodnými znakmi sú výkaly živočíchov, vtáčí trus, zbytky rastlinných a živočíšnych tiel, blato, potečenie vodou a pod. Prach je najčastejším a zdrojom nevegetatívnych foriem mikroorganizmov a roztočov. Prichádza priamo s dokumentom alebo vzduchom pri častom vetraní, najmä ak je depozit v blízkosti cesty, kotolne alebo iných prašných lokalít. Vzduchom sa mikroorganizmy prenášajú i na veľké vzdialenosti. Takto sa môžu prenášať vírusy, baktérie a predovšetkým spóry húb. ( Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Rhisopus nigricans, Mucor species ... ) ! Klimatizácia býva častým zdrojom na šírenie mikroorganizmov, najmä neudržiavaná !

4. Človek – najmä ako prenášač mikroorganizmov, či už vedome alebo nevedome, vlastnou chorobou (menej často) alebo znečisteným kontaminovaným pracovným odevom, rukami ale i nesprávnymi rozhodnutiami Zlý alebo neexistujúci hygienický režim - prekročenie RV nad 60% - nedostatočné prúdenie vzduchu, - neexistujúca kontrola depozitných podmienok (neexistujúce minitorovacie zariadenia – vlhkomer, teplomer) - nefunkčná alebo neexistujúca klimatizácia ... - nepravidelné monitorovanie podmienok Nedostatočné upratovanie a celkový zlý hygienický režim pomáha reálnej kontaminácii celého depozitu.

5. Baktérie ( Bacteria ) Sú prokaryotické, jednobunkové MO veľkosť: 0,1 - 5 mikrometrov aeróbne - pre svoj rast potrebujú kyslík i anaeróbne - môžu rásť ibez prítomnosti kyslíka rýchlo sa rozmnožujú za nepriaznivých podmienok vytvoria spóry, veľmi odolné voči negatívnym vplyvom, vo vhodých podmienkach sú opäť schopné vytvotiť vegetatívnu formu dodepozitov sa dostanú hlavne prenosom

6. Morfológiabaktérií sarcína streptokoky tetrakoky diplokoky stafylokoky Paličkové baktérie BACILLUS ANTHRACIS Salmonella typhi Bičíkové formy Borellia Špirálovité formy

7. Huby (Fungi, Eumycetes, Mycetes, Mycota) tvoria samostarnú skupinu nižších rastlín, bez prítomnosti chlorofylu, nemôžu využívať CO2 ako jediný zdroj uhlíka chemoheterotrofné - nemôžu rásť bez prítomnosti organických zdrojov uhlíka saprofytické - živia sa neživou organickou hmotou rôzneho pôvodu nachádzajú sa najmä na vlhkých miestach, niektoré ale znesú i suchšie podmienky (Aspergillus, Penicillium )

8. Životný cyklus zygomycét spóry Zygospóra a jej klíčenie sporangium Vetvička sporangionosiča zygospóra mycélium gametangium progametangium Stielka komplementárneho pohlavia

9. Alternaria tenuissima

10. Rhizopus nigricans Sporangiofór so zrelým sporangiom a vylietavajúcimi spórami Morfológia fruktifikačných orgánov

11. Aspergillus fumigatus Mikroskopický snímok fruktifikačných orgánov

12. Penicillium cyclopium

13. Optimálne podmienky pre rast mikroorganizmov Plesne Baktérie Relatívna vlhkosť vzduchu (%)65 % a viac 70-80 % Teplota18 - 22 °C 24 - 37 °C ale i 12 - 35 °C pH prostrediamierne kyslé - neutrálne mierne alkalické pH 5,6 - 6,0 pH 7,0 - 7,6 Doba potrebná na vytvorenie kolónií 4 - 12 dní 24 - 48 hodín

14. MO produkujú enzýmy – látky bielkovinovej povahy, ktoré pôsobia ako katalyzátory a štartujú rozkladné degradačné procesy na substráte. Pre celulózové podložky sú nebezpečné tie MO, ktoré produkujú enzýmy hydrolázy, ktoré rozkladajú celulózu – štiepia glukozidické väzby základnej štruktúry papiera , čím sa menia pevnostné vlastnosti celulózového reťazca, vznikajú škvrny rôznej farby (ružové, žlté, čierne, hnedé, zelené a pod.). Celulózová podložka máva plesňový pach a po dlhodobejšom pôsobení MO sa v dôsledku hydrolytických reakcií úplne rozpadá.

15. Nebezpečné hydrolázy. amylázyprodukujú napr. Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Bacillussubtilis - α -amyláza – (1,4- α-D-glukan-glukanhydroláza) spôsobuje štiepenie 1,4 alfa – D- glukozidickej väzby, je označovaná ako endoenzým a štiepi veľkú molekulu amylózy škrobu, u papierov glejených škrobom spôsobuje úplný rozklad škrobu a oslabenie štruktúry papiera, ale možno ju využiť na odstránenie starých škrobových prelepov alebo zlepených papierov škrobom - β - amyláza -(1,4- α-D-glukan-maltohydroláza) je enzým štiepiaci 1,4-alfa–D- glukozidickú väzbu, je označovaný ako exoenzým, pretože spôsobuje hydrolýzu koncových reťazcov . celuláza - enzýmový komplex C1,Cx a β-glukozidázy, produkujú napr. Stachybotrys, Chaetomium, Cladosporium, Alternara, Torula, Botrytis, Fusarium, Aspergillus niger a Penicillium, ktoré spôsobujú až úplný rozpad papiera.

16. Mikrobiologická degradácia želatíny • Základnú štruktúru tvoria aminokyseliny ako produkty termálnej denaturácie kolagénu, ktoré sa vplyvom degradačných zmien štiepi na polypeptidy až aminokyseliny, čo sa prejavuje zhoršením mechanických vlastností, prichádza ku odlupovaniu vrstvy, jej postupnému rozkladu. • Na rozklade želatínovej vrstvy sa podieľajú proteolytické enzýmy • proteinázy (štiepiace bielkoviny) • peptidázy ( štiepiace AK) • . • Bakteriálne enzýmy skvapalňujú želatínu (najmä rodu Bacillus). • Najčastejšie popisované prejavy poškození sú drobné škvrnky na • povrchu, ale u sklenených negatívou môžu baktérie pôsobiť i na • rozhraní medzi sklom a citlivou vrstvou.

18. Kultivácia MO na substrátoch • negatívnych foriem: • náznaky po 8. dňoch • 10. deň rozšírené viditeľné mycéliá • 12. deň kontaminácia na všetkých • negatívoch • Podmienky: 100% Rv, 22 – 25°C

19. Sklenený želatínový negatív

20. Acetátový negatív

21. Acetátový negatív

22. Polyetylénteraftalátový negatív Polyesterový negatív Acetátový negatív

23. Rýchlosť kontaminácie • Farebné negatívy sú viac a rýchlejšie kontaminovateľné než ČB negatívy • Vyššia kontaminácia bola dokázaná na bledších miestach, kde je menší výskyt redukovaného striebra, tmavšie miesta s vyšším obsahom redukovaného striebra sú menej kontaminovateľné • Rýchlejšie je kontaminovateľná strana s nánosom svetlocitlivej vrstvy Poradie kontaminovateľnosti: • 1. sklenené želatínové platne • 2. filmy na nitrocelulózovej podložke • 3. polyesterové negatívy • 4. acetátové negatívy ( biodegradácia je tým rýchlejšia, čím je menší stupeň substitúcie 1 mono>2 di >3 triacetáty)

24. Rozdelenie húb Skupina Pododdelenie: Nižšie huby : Mastigomycotina - akvatické huby Zygomycotina- terestrické, netvoria samčie a samičie pohlavné orgány rody: Mucor, Rhizopus Vyššie huby : Ascomycotina - najpočetnejšia skupina Basidiomycotina Deuteromycotina (Fungi imperfecti)- sú tu zaradené huby, u ktorých sa nepozná sexuálna forma rozmnožovania, rody Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Alternaria, Fusarium

25. Rozmnožovanie húb Spórami - jednobunková al. viacbunková vzniká pohlavnou al. nepohlavnou cestou Nižšie huby - endospórami ( spóry sú v špeciálnych mechúrikoch , spórangiách) zoospórami pri nepohlavnom rozmnož. Pohlavne sa rozmnožujú splynutím gamét al gamétangií, vytvorí sa zygospóra Vyššie huby Najčastejšie sa nepohlavne sa rozmnožujú konídiami Pohlavne sa rozmnožujú : askospórami ( Ascomycotina)- endospórami vytvárajúcimi sa v askoch bazídiospórami ( Basidiomycotina)- exospórami na špeciálnych bunkách ( bazídiách ) Pohlavné rozmnožovanie nemajú Deuteromycotina

26. Najčastejšie sa vyskytujúce druhy húb Nižšie huby: Rhizopus nigricans Mucor species Vyššie huby: Rody Penicillium - nigricans, cyclopium, species, chrysogenum, roquefortii Aspergillius - versicolor, niger, fumigatus flavus Cladosporium herbarum - pôvodca vnútorného plesnenia Fusarium roseum Alternaria tenuis, alternata Trichoderma viridae - špeciálne na celulózu

27. Doporučný postup na odstránenie MO 1. Zabránenie rozmnožovaniu MO ( zníženie rel. vlhkosti, vetranie, sušenie - záleží od konkrétnych podmienok ) 2. Dezinfekcia dokumentov a priestoru dokumenty - etylénoxid,formaldehyd, n-butanol priestor - UV žiarenie, dezinfekčné prostriedky 3. Mechanická očista dokumentov - zbavenie sa odumretých MO za použitia dez. prostriedkov 4. Uloženie do vhodných podmienok a dodržiavanie hygienického režimu !!! Prísne bezpečnostné opatrenia !!!

28. Základné spôsoby ničenia mikroorganizmov Základné pojmy dezinfekcia- proces, pri ktorom sa ničia MO pôsobením chemických alebo fyzikálnych látok, prípadne ich kombináciou, pričom sa odstraňuje rozhodujúci počet MO a preruší sa prenos infekcie od prameňa nákazy sterilizácia - proces úplného usmrtenia všetkých mikroorganizmov dekontaminácia - súbor opatrení na odstránenie mikroorganizmov, epidemiologicky dôležitých článkonožcov, hmyzu a škodlivých hlodavcov mechanická očista -súbor sanitárnych opatrení na odstraňovanie nečistôt a podstatné zníženie počtu MO, zaraďuje sa pred dezinfekciou

29. Chemické spôsoby dezinfekcie Chemické dezinfekčné látky pôsobia na mikroorganizmy tak,že: - denaturujú bielkoviny - blokujú funkcie bunkových membrán - blokujú a oxidujú amino- a sulfoskupiny • priamo zasahujú do metabolizmu MO - ovplyvňujú syntézu bielkovín, nukleových kyselín Rýchlosť účinku dezinfekcie závisí od koncentrácie dezinfekčného prostriedku a doby pôsobenia neplatí: čím vyššia koncentrácia, tým je lepšia účinnosť ! Treba sa riadiť podľa návodu na použitie na obale !

30. Etylénoxidová sterilizácia Etylénoxidová sterilizácia 138 x 274 x 180 cm, 6,6 m3 15 – 17 m archívneho materiálu 14 cyklov / rok Obsluha 1 pracovník

31. Butanolová dezinfekcia Podmienky dezinfekcie: dezinfekciu treba vykonávať v sterilizátore z nehrdzavejúceho materiálu, ktorý sa dá dobre hermeticky uzavrieť. dezinfekčnou látkou je n-butanol ( butylalkohol, alkohol butylnatý), CH3-CH2-CH2-OH dezinfekčné médium Pre komoru v objeme 1 m3 sa použije: 1 liter butanolu a 40 ml destilovanej vody Dĺžka dezinfekcie: Čas: 24 až 48 hodín atmosféra n-butanol _________________________________ (A.Orlita - výber z príspevku na 8. Seminári reštaurátorov a historikov v máji 1991, Železná Ruda-Špičák)

32. Možnosti dezinfekcie pracovného prostredia

33. Germicídna lampa na dezinfekciu priestoru ! Nie na dokumenty ! • UVC vlnová dĺžka 253,7 nm • spôsobuje hynutie mikroorganizmov a to tak, že dôjde k narušeniu ich DNA a teda k ich deštrukcii • modré svetlo, ktoré produkujú germicídne žiariče je iba vedľajším produktom. Táto časť spektra nie je dezinfekčná. • Germicídne žiarenie neprechádza matnými nepriehľadnými materiálmi, ale ani obyčajným sklom. Toto žiarenie prechádza iba čírim kremenným sklom a špeciálnymi teflonovými fóliami. Ultrafialové žiarenie s vlnovou dĺžkou od 100 nm do 400 nm sa rozdeľuje na: UVA 315 nm až 400 nmUVB 280 nm až 315 nmUVC 100 nm až 280 nm

34. Ako postupovať pri rozsiahlejších kontamináciách depozitov? • Vytvorenie komisie na riešenie situácie - vedenie inštitúcie, bezpečnostný technik, konzervátor ( ochranár), vedúci príslušného oddelenia, zástupca ekonomického a technického oddelenia • Okamžité riešenie zamedzenia ďalšej kontaminácie - opatrenia na zníženie relatívnej vlhkosti, vetranie, zabezpečenie prúdenia vzduchu • Identifikovanie zdroja a príčiny kontaminácie - krížikové značenie • príprava dokumnetov na transport - balenie do PET vriec !!! len ak je zabezpečený okamžitý odvoz na sterilizáciu, uzavretých transportných preperaviek ( ! Na šírenie spór ovzduším!) • Uplatnenie štandardných konzervačnýchzásahov po sterilizácii - mechanická a chemická očista, evidencia • Dekontaminácia depozitu - najrýchlejšie germicídnym žiarením, následne dezinfekčnými prípravkami, pokiaľ nie je potrebné odstránenie omietky. • Pri všetkých dekontaminačných prácach je nevyhnutný pracovný odev a dodržiavanie hygienických a bezpečnostných opatrení. • Dezinfekcia pokožky dezinfekčnými prípravkami - pokožka celého tela vrátane vlasov!!!

35. Zásady bezpečnosti práce s mikroorganizmami Nevyhnutnsťou je pracovný odev - plášť, pokrývka hlavy, prac. topánky Gumenné rukavice, náhubky ( rúško - plátené, mikrobiolog. filter) Nejesť, nepiť v kontaminovanom priestore Pobyt v prítomnosti MO len nevyhnutný čas Nevyhnutnosť dezinfekcie pokožky celého tela dezinfekčnými prípravkami

36. Už na mne nič neuvidíš !!!!!! MV SR Ďakujem za pozornosť