1 / 30

Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi

Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi. B. Öz, Ş. Batur, T. Öztürk, Ö. Aydın, K. Kaynak, A.Turna , A. Demirkaya, S. Erdamar Çetin, N. Mandel İÜ Cerrahpaşa T F PatolojiAD İÜ Cerrahpaşa T F Göğüs Cerrahisi AD VKV Amerikan Has., Medikal Onkoloji.

haamid
Download Presentation

Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR Mutasyon ve EML4-ALK translokasyon Analizi B. Öz, Ş. Batur, T. Öztürk, Ö. Aydın, K. Kaynak, A.Turna, A. Demirkaya, S. Erdamar Çetin, N. Mandel İÜ Cerrahpaşa T F PatolojiAD İÜ Cerrahpaşa T F Göğüs Cerrahisi AD VKV Amerikan Has., Medikal Onkoloji

  2. Akciğer kanserlerinde kişiye özgü tedavi seçimi • Bir çok kanser türlerinde «Tek tip tedavi » dönemi geride kaldı. • Akciğer kanseri , özellikle de adenokarsinom, «kişiye özgü tedavi» için bir model oluşturmuştur. • Bugünkü uygulamalar yanı sıra yakın gelecek için de büyük umutlar vardır.

  3. Akciğer Adenokarsinomlarında yönlendirici mutasyonlar TranstzumabNeratinib BIBV 2992 BKM 120 Erlotinip gefitinip HER2%3 PI3KCA EGFR%10-15 Neratinib Afatinib, Tivantinip ?%45-49?? MET%1 ??? PDGFR BRAF% 3 ALK%4 K-Ras%30 Gleevec PLX4032 GSK2118436 Docetaksel +/+_AZD6244 BEZ235 + crizotinib

  4. Akciğer Adenokarsinomlarında hedefe yönelik tedavi Klinik uygulama Yakın gelecekte uygulamaya girecekler

  5. Epitelyal farklılaşma ve fonksiyonunda rol oynayan transmembrantirozinkinaz reseptörlerinden EGF ya da diğer ligandların bağlanması TK aktivasyonu ile PI3K/Akt yolağı Ras/Raf/MAPK yolağı aktiflenir. EGFR Sinyal Yolağı

  6. EGFR Gen Mutasyonu: TK bölgesinde aktivasyon -2004

  7. AkcAdenokarsinomlarındaEGFR-TKI duyarlığı ile ilişkili EGFR Mutasyonları Nat Rev Cancer. 2007; 7: 169-81.

  8. Akciğer Adenokarsinomlarında EGFR araştırılması EGFR protein ekspresyonu EGFR gene copy sayısı EGFR mutasyonu İmmunohistokimya(IHK) Flöresanin-situhibridizasyon(FISH) DNA ekstraksiyonu, RT-PCR sequencing pyrosequencing

  9. ALK mutasyonu • =Anaplastiklargecelllenfomakinaz • ALK somatik hücrelerde • (nöral hücre hariç) • %3-7 Adeno/KHDAK • Genç, hasta  • sigara içmemiş • EGFR «-» hastalar • Solid büyüme paterni, taşlı yüzük hücreli ve müsinözADenoKa

  10. ALK mutasyonu • ALK 2p23’da , EML4 2p21’ da • İnsersiyonyada translokasyon Insersiyon yada Translokasyon Nature 448:561, 2007

  11. EML-4/ALK mutasyonu Yöntem; • İHK • FİSH • RT-PCR

  12. AkcAdenokarsinomlarındaprediktif belirleyicilerin saptanmasında önerilen algoritma Adenokarsinom, KHDAK, AC fenotipi ( IHK) İleri evre/ Tüm evrelerde EGFR mutasyonanalizi, KRAS (isteğe bağlı) mutasyonanalizi Negatif ALK IHK (???) ALK FISH pozitif

  13. Amaç: • Akciğer adenokarsinomlarında moleküler belirteçlerin Türk hastalardaki fenotipik özelliklerini belirlemek ve dünya literatür bilgileri ile karşılaştırmak, • Moleküler çalışmanın materyal tiplerinin uygulanabilirliklerini araştırmak, • Adenokarsinomhistopatolojik alt tipleri ile EGFR mutasyonu ilişkisini incelemek, • ALK mutasyonu araştırma yöntemini belirlemek • FİSH • İmmunhistokimya

  14. Materyal-Metod 1 • Aralık 2010- Ocak 2012 • İ.Ü. CTF Patoloji AD’ ndaveyadışmerkezdetanıalmış primer ya da metastatikakciğeradenokarsinomluolgulardanEGFR mutasyonanaliziistenen 100 olgu • EML4-ALK translokasyonufloresan in situ hibridizasyon (FISH) analiziistenen 29 olgu • K-ras istenen 24 olgu

  15. Materyal-Metod 2 • H+Eosin boyalı lamlardan % 50-75 tümör alanı içeren doku seçilerek mevcut parafin bloklardan ependonf tüpe 8-10 m kalınlığında 5-6 kesit alınmıştır. • EGFR ve K- ras mutasyon analizi için: Kesitlerden elde edilen total genomik DNA, EGFR geninin exon18 exon19 exon20 ve exon21 bölgelerini içeren kısmının ve K-ras için ex12,13 ve 61 bölgelerini içeren kısmının PCR ile amplifikasyonunda kullanılmıştır. • Amplifikasyon ürünleri konvansiyonel (dNTP) dizi analizi incelemesine alınmıştır. (Direkt sekanslama ve kapalı sistem mikro array)

  16. Materyal-Metod 3 • H+Eosin boyalılamlardan% 50-75 tümöralanıiçerendokuseçilerekmevcutparafinbloklardanependonftüpe 8-10 mikronmetrekalınlığında 5-6 kesit • EML4-ALK değerlendirilmesindemevcutparafinbloklardan • İmmunhistokimyasalinceleme (Abcam 5A4) primer antikoru • FISH analizi • WYSIS-ABBOTT break apart probu

  17. AkcAdenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi Aralık 2010-ocak 2012 • EGFR mutasyonu:100 Adenokarsinom • %40/ %60 • yaş 22-88 • (24-88/ 22-78) • median59,6 • (58,9/60,1)

  18. AkcAdenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Moleküler Patoloji deneyimi Aralık 2010- ocak 2012 • %32 metastatik odaktan • %68 Primer odaktan • Materyalin çoğunluğu rezeksiyon materyali (lobektomi,pnömonektomi) • Tüm materyal tiplerinden (sitoloji-küçük bx) yeterli DNA elde edilebildi !

  19. AkcAdenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi Aralık 2010-Ocak 2012 • 11/100 pozitif %11 • 10 / 1 • 9 Ex 19 ve 2 Ex 21’de • 8 (%72,8) sigara öyküsü yok

  20. AkcAdenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi Aralık 2010- Ocak 2012

  21. AkcadenokarsinomlarındaEGFR-TKI duyarlığı ile ilişkili EGFR Mutasyonları 2 olgu 9 olgu Nat Rev Cancer. 2007; 7: 169-81.

  22. Mutasyon analizi yapılan olgularda histopatolojikpaternler • Asiner ve lepidikpaternde yüksek oranda EGFR pozitifliği • %37 Asiner ve lepidikpatern; • Pozitiflerin %63,6sı asiner ve lepidikpattende • Lepidik tek başına bakıldığında %30,7

  23. AkcAdenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi Aralık 2010- Ocak 2012 • Krasmutasyonu: • 24 olguda araştırıldı.(EGFR ile eş zamanlı veya ardından) • 5olgu pozitif (% 20,83) • bu olgular EGFR ve ALK negatif • 3’ü Müsinöz, 1’ i asiner

  24. AkcAdenokarsinomlarında genetik araştırma: CTF Patoloji deneyimi Mart 2011- ocak 2012 ALK rearajmanı: • 29 KHDAK olgusu %96Adenokarsinom • FİSH yöntemi (Break-apart –WysisAbbott moleküler) • 26 olgu IHK • ALK reaarangementi %100 negatif, • 1 olguda amp : polizomi • ALK+ kabul edilemez

  25. ALK mutasyonu (FİSH) • yaş aralığı: 22-78, ort :58 • %62.1  %37.9  • 29 olgudan %86.2’ sinde değerlendirilen hücrelerde 2p23 (ALK) bölgesinde ilişkin translokasyon gözlenmemiştir. • %13.8’ hücre yetersizliği nedeniyle sonuç -

  26. Sonuçlar: 1 • Çalışmamız ülkemizde akciğer adenokarsinomlarındahedefe yönelik tedavi için genetik analiz sonuçlarını veren ilk geniş seridir. • %11 oranında EGFR mutasyon pozitifliği Batı kökenli toplumlarla uyumlu; • Tüm dünyadaki gibi  ve sigara içmeyenlerde (%90) • EGFR (+) hastalarla araştırılan grupla yaş farkı yok. • Hem rezeksiyon hem de metastatik odaktan çalışılabildi, sitolojik materyal ve hücre bloklarında da sonuç alınabildi.

  27. Sonuçlar: 2 • Tüm EGFR pozitiflikleri TKI’ne duyarlılığı + etkileyen mutasyondu (% 81 Ex 19) • En sık Lepidik patendeki olgularda EGFR mutasyonu + (%30.7) • ALK mutasyon değerlendirmesinde FİSH yöntemi  • ALK «+» olgu saptanmadı. • Kras + olguların hiç biri (EGFR ve ALK pozitif değil • Kras + olguların %60’ı sigara içici

  28. Sonuçlar: 3 • Her türlü rezeksiyon yada hücre bloğu olan materyal çalışılabildi. • Dokunun büyüklüğü, tümör miktarı, tümörün özellikleri yanı sıra, uygun DNA elde edebilmek yada FİSH yöntemini uygulayabilmek için uygun fiksasyon ve doku takibiçok önemlidir.

  29. Cerrahpaşa Tıp Fakültesi – Patoloji Anabilim Dalı-Moleküler Patoloji

  30. Teşekkür ederim.

More Related