Enfermedad de Chagas

1. Enfermedad de Chagas Diagnóstico de Laboratorio Dr. Guillermo G. Nuñez Inmunoserología y Autoinmunidad

2. amastigote trypomastigote ESTADIOS EVOLUTIVOS T. cruzi epimastigote

5. Curso clínico ETAPA AGUDA Período de incubación: ~7 días Generalmente asintomática Primoinfección en niños de zonas endémicas Signo de Romaña Fiebre Hepato/esplenomegalia Encefalitis Forma sintomática *Altaparasitemia

6. ETAPA LATENTE *Período de 30-40 años *Equilibrio entre la patología parasitaria y la respuesta inmune *Asintomático *Bajaparasitemia *Alta producción de Anticuerpos

7. DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

8. Infección Crónica Infección Aguda clínica clínica Intensidad de respuesta Anti-T.cruziIgM Período incubación Anti-T.cruziIgG parasitemia Infección 1-2 semanas 9-10 semanas

9. Infección Aguda Infección Crónica clínica TRATAMIENTO ETIOLOGICO Anti-T.cruziIgG parasitemia Intensidad de respuesta Transmisión vectorial Transmisión congénita Período incubación Infección 1-2 semanas 8-10 semanas >1 año 3-5 años

10. METODOS PARASITÓLOGICOS

11. Tripomastigote sanguíneo –(May-Grünwald-Giemsa)

12. METODOS SEROLÓGICOS Etapas latente y crónica – Screening bancos de sangre

13. Hemaglutinación Indirecta (HAI) IgGAM Económico Sensibilidad analítica NO automatizable

14. Enzimoinmunoensayo (ELISA) IgG IgM Económico Sensibilidad analítica Automatizable Reproducible

15. Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) IgG IgM Requiere microscopía de fluorescencia Sensibilidad analítica Reproducible

17. Inmunoensayoquimioluminiscente (CMIA)

18. conjugado muestra TcF-FP3 FP6-FP10 h. H2O2 Micropartículas-Ags

19. Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) Es la amplificación enzimática de un fragmento de ADN flanqueado por dos secuencias de oligonucleótidos que hibridan en la cadena complementaria de la molécula molde que se va a amplificar (cebadores o “primer”) y que son utilizados por una DNA polimerasa termoresistente para copiar la secuencia de la misma. kDNA o sDNA costosa Requiere tecnología y experiencia Sensible y específica No dependiente de Estado Inmunitario extensión desnaturalización hibridización

20. extracción ADN total nucleótidos dATP, dGTP, dCTP, dTTP Taq DNA-polimerasa F primers R PCR convencional PCR En Tiempo Real

21. 96°C Desnaturalización Ciclado (Amplificación) 56°C Alineamiento 72°C Elongación

22. Schijman et al. PLoSNeglTropDis. 2011 Enero; 5(1): 931

24. Algoritmo diagnóstico ANTECEDENTE EPIDEMIOLOGICO -Transmisión vectorial -Transfusión sanguínea -Transmisión congénita -Trasplante de órganos INFECCION POCO PROBABLE no si SINTOMÁTICO ASINTOMÁTICO FORMA AGUDA Búsqueda de tripanosomas en sangre --------------------------------------------------- Métodos parasitológicos: Xenodiagnóstico-Strout-Microhematocrito Hemocultivo -PCR FORMA CRONICA Búsqueda de Anticuerpos --------------------------------------------------- Métodos Serológicos: HAI-ELISA-IFI Acs totales-IgG-IgM (-) (-) DIAGNOSTICO IMPROBABLE (+) dos tests (-) Xenodiagnóstico PCR Seguimiento clínico (+) DIAGNÓSTICO CONFIRMADO

25. GESTANTE CHAGÁSICA RECIEN NACIDO BUSQUEDA DEL PARÁSITO -Microconcentración -PCR BUSQUEDA DE ANTICUERPOS (IgG) -ELISA -IFI (titulación del suero) CONTROL SEROLÓGICO A LOS 3, 6 y 9 meses -ELISA -IFI (titulación del suero) IgG >basal IgG ≤basal NO CONFIRMA CASO CONFIRMA CASO (tratamiento)

26. El problema de Inmunorreactividad Cruzada…

27. Enfermedad de Chagas Leishmaniosis

28. Trypanosoma cruzi (tripomastigotes) Leishmaniaspp (promastigotes) Familia Trypanosomatidae ANTÍGENOS COMPARTIDOS

30. Muchas gracias