1 / 15

Universitatea de Medicina si Farmacie “Iuliu Hatieganu” Cluj Napoca Catedra Dermatovenerologie

Universitatea de Medicina si Farmacie “Iuliu Hatieganu” Cluj Napoca Catedra Dermatovenerologie. Laboratorul de cercetare in domeniul diagnosticului si tratamentului genodermatozelor. Diagnosticul Molecular. Izolarea ADN Recoltarea de sange pe EDTA

kagami
Download Presentation

Universitatea de Medicina si Farmacie “Iuliu Hatieganu” Cluj Napoca Catedra Dermatovenerologie

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Universitatea de Medicina si Farmacie “Iuliu Hatieganu” Cluj Napoca Catedra Dermatovenerologie Laboratorul de cercetare in domeniul diagnosticului si tratamentului genodermatozelor

  2. Diagnosticul Molecular

  3. Izolarea ADN • Recoltarea de sange pe EDTA • Folosirea Kit-ului Promega si a protocolului atasat

  4. Verificarea concentratiei ADN • Se foloseste spectrofotometria • Verificare a procesului de izolare

  5. Amplificarea PCR • Se genereaza o replicare a fragmentelor dorite a fi analizate • Selectia fragmentului se face in functie de amorsele folosite • Folosirea dispozitivului ThermoCycler

  6. Electroforeza • Verificarea rezultatului PCR • O apreciere a cantitatii de ADN prin masurarea distantei de migratie in camp electric • Folosirea markerilor standardizati

  7. Fotodocumentarea • Vizualizarea rezultatului electroforezei in lumina ultravioleta • Fotografierea rezultatului

  8. Purificarea PCR • Centrifugari repetate folosind diferite substante de spalare • Incubari repetate

  9. Pregatirea pentru secventiere • Reactie similara PCR • Amplificare unidirectionala sens sau antisens • Folosire de terminatori marcati fluorescent

  10. Secventierea • Electroforeza capilara • Citirea cu laser a markerilor • Vizualizarea sub forma de curbe corespunzand fiecarei nucleotide

  11. Analiza secventei • Comparatia cu ADN-ul normal • Identificarea diferentelor • Filtrarea polimorfismelor • Verificare pe secventa complementara • Decizia finala de diagnostic

  12. Culturi de Celule

  13. Cultura de celule • Celulele umane cultivate pot fi utilizate in terapie, ca substitut de piele pentru inlocuirea defectului cutanat

  14. Cultura de celule • Celulele se cultiva intr-un mediu steril, conform unor protocoale specializate • In decursul unei luni celulele ocupa 80% din suprafata mediului

  15. Multumiri Activitate finantata de grantul CEEX DEGEB “Diagnostic molecular al epidermolizelor buloase. Tehnici moderne de cercetare, diagnosticare, tratament si prevenire a epidermolizelor buloase. Realizarea unui registru national al genodermatozelor-DEGEB” Nr. grant 126/2006 Director de proiect: Prof. Dr. Rodica Cosgarea www.degeb.org

More Related