Bioquímica Vegetal Avanzada

1. Bioquímica Vegetal Avanzada Seminario No. 3 Integrantes: Yunier Cabrera Vázquez Marcia Beatriz Moya Alianna Machín Suárez

2. Título del artículo: Respuesta de múltiples biomarcadores en maíz ( Zea mays L.) durante la exposición a cobre. Autores: QI Xue mei, LI Pei- jun, LIU Wan, XIE Li- jing Escuelas encargadas: Instituto de Ecología aplicada, Academia de Ciencias de China; Shanghai University of Electric Power; North East Agriculture University; etc.

3. OBJETIVOS: • Evaluar la aplicación de AFLPs como un biomarcador molecular para detectar daños en el ADN en maíz, causado por la contaminación ambiental. • Investigar los indicadores adecuados para el suelo contaminado.

4. 1. Plant materials, growth and total soluble protein contents test of plantlets. Material empleado fue: Maíz (Zheng dan No. 958 de la Universidad de Agricultura de Shenyang, China). HgCl (0.1 %) H2O dest. Semillas (Antes del experimento) Esterilizadas Lavadas 10 min 220C H2O dest. Seleccionadas 20 semillas germinadas uniformemente Puestas a germinar en placas Petri en la oscuridad 2 días de incubación MATERIALES Y MÉTODOS

5. Semillas germinadas uniformemente Transferidas Placa Petri (2 Kg de suelo)* • Las pruebas de inhibición del crecimiento fueron llevadas a cabo con las plántulas expuestas a 0, 200, 400 y 600 mg/Kg de Cu (en forma de CuSO4.5H2O, 99.5 % de pureza) por 21 días respectivamente. Luego de 21 días de incubación se midieron: la longitud de la raíz, el tamaño de la brotación, el contenido de proteínas solubles totales y el contenido de clorofilas de las plántulas. * El suelo de pradera, suelo típico ampliamente distribuido en el noreste de China, colectado de 0-20 cm.

6. Se calculó la taza inhibitoria (%) por la ecuación: (1-x/y) * 100 • Cada tratamiento contó con 3 réplicas y los experimentos fueron duplicados para la comparación. • Las diferencias de los valores medios entre las muestras tratadas y el control fueron estadísticamente analizadas mediante un análisis de varianza ANOVA.

7. 2. DNA extraction and AFLP procedures a. El ADN fue extraído y purificado usando las pruebas CTAB (Rogers y Bendich, 1985). b. El ADN precipitado fue recolectado por centrifugación (Thermo IEC, MA 0249, USA),. c. La calidad y cantidad total de ADN genómico en cada muestra fueron estimados fluorométricamente por biofotómetro (AG2233 1, Hambury, Germany) y electroforesis agarosa. d. AFLP fue llevado a cabo como se describe en Vos et al. (1995), excepto que 300 ng de ADN genómico fue incubado por 4 h a 370c con la restricción de la enzima EcoRI (4U) y MseL (3U) en 20 microlitros de volumen.

8. 3.Estimation of genomic template stability El % de estabilidad de la plantilla genómica fue calculado como 100 – (100a/n ) donde a fue los perfiles AFLP polimórficos detectados en cada muestra tratada y n fue el número de bandas totales en el control. El polimorfismo observado en los perfiles de AFLP incluyeron desapariciones en las bandas normales y apariciones de nuevas bandas en comparación a los perfiles de AFLP en el control y el promedio fue calculado por cada grupo experimental expuestos a los diferentes tratamientos con Cu.

9. RESULTADOS:

14. CONCLUSIONES: • El uso combinado de parámetros fisiológicos con las técnicas AFLP nos permite detectar alteraciones en el ADN originados por múltiples mecanismos con un alto grado de sensibilidad. • Las alteraciones son detectadas en una forma inespecífica por la pérdida y/o ganancia de bandas y variaciones en la intensidad de amplificación. • La presencia de nuevas bandas en el ADN genómico extraído de las plántulas de maíz tratadas con un producto químico pueden ser consideradas como un apropiado biomarcador genotóxico de exposición crónica. • Los resultados sugieren que la estabilidad de la plantilla del ADN genómico puede ser más sensible que la longitud de la raíz y el contenido de proteínas totales. • Los cambios en los perfiles AFLP y el nivel de proteínas solubles totales son todos marcadores sensibles para detectar la toxicidad inducida por cobre en el Maíz.

15. MUCHAS GRACIAS