Avaliação das aulas TP

1. Avaliação das aulas TP Microbiologia 2012-2013

2. Questões -TC • Quais as moléculas salivares identificadas como responsáveis pela adesão de streptococci à saliva? Prps, aglutininas e alfa amilase. No caso da alfa amilase parece estar ligada à actividade catalitica da enzima

3. Questões -TC 2 – Quais as espécies de streptococci que têm estruturas de adesão? Que estruturas são essas? S. pyogenes, S.agalactiae e S.pneumoniae. Sobretudo pili filamentosos com subunidades ligadas convalentemente à superfície da célula.

4. Questões -TC 3 – Qual a importância dos pili na formação do biofilme nesta espécie? Que dados o demonstram? É essencial na figura 1 os poços sem com o mutante sem saliva não tinham filme. Os poços com mutante e saliva tinham um filme defeituoso tal como os poços com saliva e bactéria normal Só nos poços com wt e saliva houve biofilme eficaz.

5. Questões -TC 4 – Das proteínas estudadas quais tinham maior capacidade de se ligar às proteinas salivares? liga-se a todas mas mais a pilC e pilB. A pilA não liga muito eficientemente. Figura 3b

6. Questões -TC 5 – Quais os controlos usados na experiência anterior? Foram usadas a FNBP e a BSA. Estas proteínas não ligaram à saliva.

7. Questões -TC 6 – Que técnica foi usada para estudar a estrutura dos pili? criaram-se anticorpos contra as recombinantes pilA, pilB e pilC. Estes anticorpos foram testados contra os pili das bactérias nativas e mutantes. Nas culturas bacterianas os pili foram libertados para a solução pondo as bacterias em contacto com mutalisina

8. Questões -TC 7 – Quais os resultados? Estão na figura 4 B. e mostram que pilA é o maior constituinte dos pili de S.sanguinis. Na figura 4 C vê-se a localização do pilA

9. Questões -TC 8 – Qual é especificamente a molécula salivar à qual se liga pilC? Liga-se especificamente à alfa amilase um proteína de 50 kD na saliva. Figura 5

10. Questões TA • A ligação Às moléculas dos pilipilB e pilC é a única que existe? Como se sabe? Figura 6. A.

11. Questões TA 2 – Na literatura aparece descrita a ligação da alfa amilase a proteínas bacterianas dependentes da sua atividade catalítica. Este estudo confirma isso? Como sabe? Não confirma pois mesmo com a alfa amilase desnaturada se dá a ligação. Fig 7

12. Questões TA 3 – Qual é especificamente a zona de pil C à qual se liga a alfa amilase? Como se sabe? Analisou-se a ligação a 3 fragmentos de pilC e verificou-se que havia mais ligação à zona do terminal C. Figura 7

13. Questões TA 4– A zona de pilC com mais afinidade para a amilase alfa partilha sequencia com outra proteína. Qual? Que importância tem isto? Foi testado? Collagenbindingprotein B domain. Há domínios de ligação conservados.

14. Questões TA 5–Qual a importância, no geral da adesão a moléculas da saliva? Permite a colonização inicial e persistência no biofilme oral.

15. Questões TA 6 – Que proteínas ligadoras da saliva são encontradas noutros streptococci? SsP5 da SspA/B de S.gordonii Pac/AgI/II/Spac de Strepmutans Fim A de S.parasanguinis AbpA e AbpB de Strep. gordoni

16. Questões TA 7 – O que se sabe sobre a sequência de aminoácidos destas outras proteínas ligadoras de amilase? Isso é importante? Porquê? Nalguns casos não se sabe a sequência. Se se soubesse poderia procurar-se no genoma de novas espécies sequenciadas por exemplo em projectos como o do HMP.

17. Questões TA 8 – Quais as conclusões principais do estudo? Que há estruturas de adesão à saliva em Strepsanguinis. Que essas estruturas estão nos pili Que são 3 proteínas diferentes A,B,eC Que não são as únicas responsáveis pelo biofilme Que têm preponderâncias e funções diferentes no processo de adesão.

18. Questões TB 1 –Quais as moléculas salivares identificadas como responsáveis pela adesão de streptococci à saliva? A que estruturas se ligam? Prps, aglutininas e alfa amilase. S. pyogenes, S.agalactiae e S.pneumoniae. Sobretudo pili filamentosos com subunidades ligadas convalentemente à superfície da célula.

19. Questões TB 2 – Faça a análise das figuras 1 e 2. O que demostram?

20. Questões TB 3 – Explique a figura 3 B.

21. Questões TB 4 – O que mostra a figura 4?

22. Questões TB 5 – Que resultados são apresentados na figura 5?

23. Questões TB 6 – Que conclusões se tiram da figura 6?

24. Questões TB 7 – O que mostra a figura 7?

25. Questões TB 8 – Que proteínas ligadoras da saliva são encontradas noutros streptococci? SsP5 da SspA/B de S.gordonii Pac/AgI/II/Spac de Strepmutans Fim A de S.parasanguinis AbpA e AbpB de Strep. gordoni

26. Questões TB 9 – O que se sabe sobre a sequência de aminoácidos destas outras proteínas ligadoras de amilase? Isso é importante? Porquê? Nalguns casos não se sabe a sequência. Se se soubesse poderia procurar-se no genoma de novas espécies sequenciadas por exemplo em projectos como o do HMP.

27. Questões TB 10 – Quais as conclusões principais do estudo? Que há estruturas de adesão à saliva em Strepsanguinis. Que essas estruturas estão nos pili Que são 3 proteínas diferentes A,B,eC Que não são as únicas responsáveis pelo biofilme Que têm preponderâncias e funções diferentes no processo de adesão.