Incidence of Clostridium botulinum spores in honey in Turkey

1. Incidence of Clostridium botulinumspores in honey in Turkey Leopoldo García Baeza

2. Introducción • El botulismo alimentario es una de intoxicación alimentaria grave causada por la ingestión de alimentos que contienen la potente neurotóxinaformada durante el crecimiento de Clostridiumbotullinum. • Clostridiumbotulinumy sus esporas están ampliamente distribuidos en la naturaleza (Solomon y Lilly,2001 ) . • El botulismo infantil es la forma común de botulismo y la miel se ha identificado como una fuente potencial de infección ( Midura , 1996 ) .

3. La flora intestinal infantil inmadura permite que esporas ingeridas germinen , se multiplican y produzcan neurotóxinasdel botulismo en el lumen intestinal . • Los niños de entre 2 semanas y 1 año son los más susceptibles ( Arnón, Damus , y Chin , 1981 ) . • La miel se ha identificado tanto como la dieta factor de riesgo de botulismo infantil y como un reservorio natural de C. botulinum y esporas de tipo B ( Solomon y Lilly , 2001 ) .

4. La incidencia de las esporas de C. botulinum en la miel tiene , se ha estimado en varios estudios . • Sugiyama, Mills, y C athyKuo ( 1978 ) , usando un método de diálisis , informó que 18 de 241 muestras de miel contienen las esporas, • Midura, Snowden , Wood y Arnón ( 1979 ) , utilizando un método de dilución de centrifugación , encontraron 9 de 90 muestras de miel positivos. • Rall, Bombo , Lopes, Carvalho, y Silva ( 2003 ) aisló esporas de C. botulinum 3 de 100 muestras de miel .

5. Solomon y Lilly ( 2001 ) reportó 13 % de las muestras fueron C. botulinumpositivo. • Por esta razón, la FDA y los CDC recomiendan que los niños menores de 1 año no consumir miel. • El propósito de este estudio fue determinar la incidencia de C. botulinumen mieles comerciales obtenidos en Ankara y para alertar a los pediatras.

6. Materiales y metodos • 48 muestras de miel: • 6 panal de miel. • 34 flor de miel. • 8 de mielada. • Se obtuvo en los mercados de Ankara.

7. Se utilizaron: • Carne Cocida Medio (CMM, Merck) y Tripticasa Peptona Glucosa Yeastbroth (TPGY, Merck) (Solomon, Johnson, Bernard, Arnón, y Ferreira, 2001). • Método de DA (adición directa) • 10 g de miel se añade directamente a 90 ml de CMM y TPGY y se incubaron en un agua baño a 65 ° C durante 30 minutos para inactivar los no formadores de esporas.

8. En el método DC (dilución centrifugación). • 25 g de miel se diluyeron en 100 ml de agua destilada estéril con 1% de Tween 80 (Merck, Darmstadt, Alemania) y se agitó hasta que la solución se volvió homogénea.

9. La solución se mantuvo a 65 °C agua baño durante 30 minutos de centrifugado durante 30 minutos a 9 000 g • Los precipitados se transfirieron a 9mL de CMM y9 mLTPGY.

10. Método SF (sobrenadante filtración). • La filtración por membrana se combinó con la centrifugación. • Las esporas fueron capturados a partir del sobrenadante por filtración a través de un filtro de 0.45 μm. • El filtrado se inoculó en 9 ml de TPGY y 9 ml de CMM.

11. Cada muestras se ensayaron dos veces. • Todos los medios fueron cubiertos con aceite de parafina estéril. • CMM se incubó a 35 ° C y TPGY a 26 ° C durante 7-10 dias(Solomon et al., 2001).

12. Después de 7 días de incubación, se examinó cada cultivo para la producción de la turbidez y de gas. • Los cultivos que mostraron ningún crecimiento significativo con en 7 días se volvieron a incubar durante 3 días para la tarde germinación de las esporas. • Después de 10 días de incubación, los cultivos sin signos de crecimiento se consideran negativos.

13. Células clostridiales típicos tienen un aspecto similar a una raqueta de tenis con la tinción de Gram. • Las muestras positivas se sembraron en medio anaeróbico Agar Yema de Huevo (AEY, Oxoid). • Las placas se incubaron anaeróbicamente a 35 °C durante 48 h.

14. Al final del tiempo de incubación fueron resembradas por duplicado en AEY agar. • Uno se incubó aeróbicamente y el otro anaeróbicamente a 35 ° C durante 48h. • Se consideraron colonias que crecieron sólo en condiciones anaerobias como cultivos puros.

15. Las toxinas se detectaron utilizando el bioensayo en ratones. presencia de C. botulinum. • Se inocularon vía intraperitoneal (IP) 0.5 mL de centrifugado en dos ratones blancos. • La muerte de los ratones sin signo clínico en las primeras 24 h fue considerada por la falsa manipulación (Salomón et al., 2001).

16. Resultados • Se aislaron 6 esporas de C. botulinum(4 de flor miel, 1 de miel de mielada, 1 de peine de la miel de la flor) a partir de 48 muestras.

18. La miel se vende en los mercados de venta al por menor en Ankara esta significativamente (12,5%) contaminada con C. botulinum. • Siendo comúnmente consumida por todas las edades.