Cultura de tecido subcapsular da GSR

1. Cultura de tecido subcapsular da GSR Preparação para Microscopia Eletrónica (ME) e Resultados

2. Objectivos • A não adição de soro aos meios de cultura limita a viabilidade celular • Questão: Qual é o efeito da privação de soro acrescentado na ultra-estrutura da zona glomerulosa das GSR em cultura?

3. Material e Métodos • Colheita das GSR • Descapsulação • Fragmentação da cápsula e tecido subcapsular (zona glomerulosa) • Cultura em DMEM/F12 com antibiótico e soro bovino fetal durante 24 horas; colheita de alguns fragmentos para ME (ACP) • Mudança de meio e divisão dos fragmentos em meio com soro (B1CP) e sem soro (B2CP)

4. Material e Métodos • Processamento para ME • Fixação em glutaraldeído e tetróxido de ósmio • Desidatração em etanol de concentração crescente (30º, 50º, 70º, 90º e absoluto) • Diafanização em óxido de propileno • Inclusão em EPON

5. Material e Métodos • Processamento para ME • Realização de cortes ultra-finos (~100 nm) em ultramicrótomo • Contrastação com acetato de uranilo e citrato de chumbo • Observação num ME Jeol.

6. Resultados • ACP – cultura de 24 horas • B1CP – cultura de 48 horas no mesmo meio:

7. Resultados • B2CP – cultura de 48 horas com privação de soro nas últimas 24 horas

8. Conclusões • Condições de cultura requerem a presença de soro para preservação da integridade estrutural das células • A experiência não estabelece quais são os factores séricos que permitem esta preservação • Não é de excluir a presença de contaminantes às 48 horas em B2CP; outros estudos seriam necessários para a certificar

9. Autores • João Nascimento • João Silva