Cours de Bactériologie Faculté de Médecine de Fès

1. Cours de BactériologieFaculté de Médecine de Fès Dr. Sylvestre Tigaud Laboratoire de Bactériologie Centre de Biologie Nord Hôpital de la Croix-Rousse CHU de LYON

2. Méthode d’étude des Antibiotiques Dr. Sylvestre Tigaud sylvestre.tigaud@chu-lyon.fr Tel : +33 4 72 07 18 44 Fax : +33 4 72 07 18 42 Hôpital de la Croix-Rousse

3. Etude de la sensibilité aux antibiotiques-1 (rappel) • Base théorique : • Détermination de la CMI : Concentration Minima Inhibitrice ; c'est la plus faible concentration capable d'inhiber toute culture visible de la souche. • La CMI est comparée aux deux « concentrations critiques c et C » qui correspondent aux concentrations obtenues chez l’homme. • Les limites c et C sont fixées par le Comité Français de l'Antibiogramme ou le NCCLS

4. Etude de la sensibilité aux antibiotiques- • Bactérie résistante  CMI > CCMI plus élevée que les concentrations d'antibiotiques obtenues in vivo ; le traitement ne sera pas efficace • Bactérie sensible CMI < cCMI nettement inférieure aux concentrations obtenues in vivo ; le traitement peut être efficace • Bactérie intermédiaire c<CMI<Czone d'incertitude ; la bactérie peut être atteinte en augmentant la posologie • Quotient inhibiteur : rapport entre concentration in vivo et CMI ; plus il est élevé, plus le traitement sera efficace (QI > 8)

5. Etude de la sensibilité aux antibiotiques-3 • Antibiogramme (en pratique la mesure des CMI est réservée à des cas particuliers) • Diffusion en milieu solide : méthode des disques (la mesure du diamètre d'inhibition reflète la valeur de la CMI)lecture automatisée désormais possible • Dilution en milieu liquide : systèmes automatisés ; la lecture est automatisée et informatisée

6. Exemple d’un antibiogramme surAcinetobacter

7. Diagnostic bactériologique direct6 – Sensibilité aux antibiotiques Bactériostase et CMI • La bactériostase est l'arrêt de la multiplication du germe, qui reste vivant, et donc susceptible de re-prendre sa multiplication si les conditions se modifient. • La CMI, concentration minimale bactériostatique, est la plus faible concentration d'un antibiotique donné qui inhibe toute croissance visible en 24 heures.

8. Diagnostic bactériologique direct6 – Sensibilité aux antibiotiques Bactéricidie et CMB • La bactéricidie est la mort du germe, définitivement incapable de reprendre sa multiplication. • La CMB, concentration minimale bactéricide, est la plus faible concentration d'un antibiotique donné qui ne laisse survivre que 1/10000 après 24 heures de contact.

9. Diagnostic bactériologique direct6 – Sensibilité aux antibiotiques Bacteriostase et Bactéricidie Pas d’AB Bacteriostase Bactericidie

10. Méthode d’étude de l’activitédes antibiotiques • Détermination de la CMI • Concentration Minimale Inhibitrice en milieu liquide ou solide • Détermination de la CMB • Concentration Minimale Bactéricide • Antibiogramme • par diffusion en milieu gélosé • en milieu liquide (méthode automatisée) • Avenir : Recherche de gène de résistance (sondes) ?

11. Ensemencement des tubes 0.25 µg/ml 0.5 µg/ml 1 µg/ml 2 µg/ml 4 µg/ml 8 µg/ml Témoin Méthode ATB 24 h à 37°C CMI Le premier tube sans culture visible donne la CMI Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO. S.J.R.T. H.C.R. 10/20/2014

12. 0.25 µg/ml 0.5 µg/ml 1 µg/ml 2 µg/ml 4 µg/ml 8 µg/ml Témoin Méthode ATB CMI 24 h à 37°C La première boîte sans culture visible donne la CMB CMB Diaporama du Dr. Jacqueline GRANDO. S.J.R.T. H.C.R. 10/20/2014

13. 0.25 µg/ml 0.5 µg/ml 1 µg/ml 2 µg/ml 4 µg/ml 8 µg/ml Témoin CMI par dilution en gélose La première boîte sans culture visible donne la CMI

14. Antibiogramme par diffusion Zones d’inhibition Antagonisme C A D B

15. Concordance Diamètres-CMI mm D d mg/l c C

16. Intermédiaire c C Sensible Résistant c C c C Méthode automatisée à 2 points de mesure

17. A A Addition Indifférence B B A A Synergie Antagonisme B B Etude des associations d’Antibiotiques