Metode microbiologice de detectie a alimentelor iradiate

1. Metode microbiologice de detectie a alimentelor iradiate Mioara Alexandru, Eva-Ruxandra Almajan, Laura Trandafir, Mihai Constantin

2. Laboratorul de microbiologie IRASM • Laborator de control al calitatii independent autorizat de Agentia Nationala a Medicamentului pentru efectuarea testelor de: - incarcatura microbiana - teste de sterilitate pentru produse farmaceutice: comprimate, capsule, unguente / creme, perfuzabile, injectabile, siropuri, supozitoare, suplimente alimentare etc.

3. Laboratorul de microbiologie IRASM • Sistem de management al calitatii certificat conform cu standardul ISO 9001:2000 • Acreditare conform cu standardul ISO 17025:2005 de catre RENAR – in curs

4. Detectia alimentelor iradiate • Legislatia romana vs. legislatia europeana • Sanatatea publica – problema de interes general – controlul calitatii alimentelor • Proiectul LDAI – implementarea pentru prima data in Romania a metodelor standardizate de detectie a alimentelor iradiate, din care 3 sunt metode microbiologice

5. Detectia alimentelor iradiate • Aplicarea unui tratament cu radiatii ionizante – modificari la nivel celular si molecular. • Pot fi detectate si prin 3 metode microbiologice: - DNA Comet Assay - DEFT / APC - Direct Epifluorescence Filter Technique / Aerobic Plate Count - LAL / GNB - Limulus Amoebocyte Lysate / Gram Negative Bacteria

6. Detectia alimentelor iradiate • Principiile metodelor: - DNA Comet assay – migrarea in camp electric a fragmentelor de ADN din celulele produsului iradiat - DEFT / APC – diferenta dintre numarul total de microorganisme (DEFT) si numarul de microorganisme viabile (APC) - LAL / GNB - compararea numarului de bacterii gram negative cu concentratia de endotoxine de la suprafata probei

7. PROBA DE TESTAT Obtinere celule izolate Fixarea celulelor pe lama in agaroza Electroforeza – Migrarea fragmentelor de ADN Colorare cu AO Vizualizare la microscop cu epifluorescenta DNA Comet Assay – EN 13784: 2002(carne, seminte, fructe uscate, condimente)

8. Suspensia din proba DEFT APC Inoculare directa in placi cu agar Filtrare Colorare cu AO Numarare UFC Vizualizare la microscop cu epifluorescenta Calculare Nr. DEFT DEFT / APC – EN 13783:2002 (ierburi si condimente)

9. Suspensia din proba LAL GNB Inocularea la suprafata pe mediu neselectiv Prepararea dilutiilor in eprubete de titrare LAL Incubare 90 min la t ˚ camerei Incubare 1 ora, 37 ˚ C Adaugarea unui strat de mediu selectiv Calcularea concentratiei de endotoxine in functie de aglutinare Numarare GNB LAL / GNB – EN 14569: 2005 (carne pasare)

10. Echipamente si infrastructura • Laboratorul de Microbiologie IRASM detine spatii si materiale necesare pentru aplicarea celor 3 metode specifice fiecarei etape (preparare medii de cultura, pregatire sticlarie, camere cu hote cu flux laminar, camera de incubare, camera pentru electroforeza) • Echipamente achizitionate in cadrul proiectului: • Autoclav • Etuva • Microscop cu Epifluorescenta • Dispozitiv filtrare • Electroforeza

11. Recomandari • DEFT / APC, LAL / GNB – se recomanda estimarea prealabila a incarcaturii microbiene pentru produsul de testat pentru stabilirea dilutiilor de lucru (din literatura sau din istoricul probelor testate, de exemplu condimentele au aproximativ 108 UFC/g) • DNA Comet Assay – se recomanda ca suspensia din proba sa fie suficient de diluata pentru a evita suprapunerea celulelor in urma inglobarii in gelul de agaroza

12. Concluzii • Cele 3 metode nu sunt specifice pentru detectia tratamentului cu radiatii, rezultate pozitive putand fi obtinute si in urma altor tratamente de conservare, fiind metode de screening • Diagnosticul se poate pune doar dupa confirmarea rezultatului pozitiv folosind metode standardizate specifice pentru tratamentul cu radiatii ionizante • Datorita costurilor reduse cele 3 metode pot fi aplicate unui numar mare de probe, doar probele cu rezultate pozitive fiind supuse unor teste suplimentare specifice.

13. Va multumim pentru atentie !