190 likes | 462 Views
Nové metody zkoušení a zátěžové testy kosmetických prostředků. RNDr. Vladim í r Š pelina , C Sc. St á tn í zdravotn í ú stav e-mail: v.spelina @szu.cz. Obsah přednášky. Významné mikrobiální kontaminanty Nové metody zkoušení Faktory pro hodnocení mikrobiologického rizika
E N D
Nové metody zkoušení a zátěžové testy kosmetických prostředků RNDr. Vladimír Špelina, CSc. Státní zdravotníústav e-mail: v.spelina@szu.cz
Obsah přednášky • Významné mikrobiální kontaminanty • Nové metody zkoušení • Faktory pro hodnocení mikrobiologického rizika • Požadavky na konzervační prostředky • Testy účinnosti konzervace • Zátěžové testy a PAO
Významné bakteriální kontaminanty • Patogenní: - Pseudomonas aeruginosa - Staphylococcus aureus - Candida albicans • Indikátorové - mesofilní aerobní bakterie (CPM) -výjimečně Escherichia coli, Enterobacteriaceae - kvasinky - plísně
Mikrobiologické zkoušení KP • Metody podle ISO TC 217: • ISO 21148 Všeobecné pokyny pro mikrobiologické zkoušení • ISO 21149 Průkaz a stanovení počtu mesofilních bakterií • ISO 21150 Průkaz Escherichia coli • ISO 22718 Průkaz Staphylococcus aureus • ISO 22717 Průkaz Pseudomonas aeruginosa • ISO 18416 Selektivní průkaz Candida albicans (FDIS) • ISO 16212 Průkaz kvasinek a plísní (CD) • Normy také pro GMP, balení a značení
Mikrobiologické zkoušení KP (2) ISO 21148 Všeobecné pokyny pro mikrobiologické zkoušení • Požadavky na laboratoře a jejich vybavení • Příprava kultivačních medií • Zacházení se vzorky • Hygienická opatření při zkoušení • Neutralizace antimikrobiálních vlastností produktu
Mikrobiologické zkoušení KP (3) ISO 21149 Stanovení počtu a průkaz aerobních mesofilních bakterií • Stanovení počtu přelivem nebo roztěrem • Průkaz (detekce) po pomnožení v půdě s lecitinem, polysorbátem 80 a octoxynolem (Eugon LT 100 broth) • Kultivační teplota 32,5 ± 2,5 °C • Validace účinnosti neutralizace se S.aureus a P.aeruginosa (E.coli) • Výběr látek a roztoků k neutralizaci antimikrobiálních vlastností produktu
Mikrobiologické zkoušení KP (4) ISO 22717 Průkaz Pseudomonas aeruginosa • Pomnožení v půdě s lecitinem a polysorbátem • Inokulace na Cetrimid agar • Identifikace (Gram, oxidáza, pyocyanin) • Kultivační teplota vždy 32,5 ± 2,5 °C • Validace účinnosti neutralizace
Mikrobiologické zkoušení KP (5) ISO 22718 Průkaz Stapylococcus aureus • Pomnožení v půdě s lecitinem a polysorbátem • Inokulace na Baird-Parker agar • Identifikace (Gram, kataláza, plasmakoaguláza) • Kultivační teplota 32,5 ± 2,5 °C, koaguláza 37°C • Validace účinnosti neutralizace
Mikrobiologické zkoušení KP (6) ISO 18416 Průkaz Candida albicans(návrh) • Pomnožení v půdě s lecitinem a polysorbátem • Inokulace na Sabourad agar s chloramfenikolem • Identifikace podle mikroskopické morfologie hyf a chlamydospor • Kultivační teplota 32,5 ± 2,5 °C, pro klíčení spor 37 ± 1°C • Validace účinnosti neutralizace
Mikrobiologické zkoušení KP (7) ISO/CD 29621 Směrné faktory pro hodnocení rizika a identifikaci mikrobiologicky málo rizikových výrobků • Výrobky s určitými fyzikálně-chemickými vlastnostmi vytvoří „nepřátelské“ prostředí - neumožní růst škodlivých mikroorganismů (nemusí zahynout!) • Parametr aktivita vody (aw): nízké hodnoty (<0,90) např. výrobky na bázi vosku, oleje a masti, rtěnky, pomády aj. • Hodnota pH <3,0 >10,0 (11,0) (někt. přípravky k péči o vlasy, tekutá mýdla?) • Obsah alkoholu: 10-20% mikrobistatické, nad 25% úplná zábrana (např. vody po holení, deodoranty, spreje na vlasy, parfémy, p. k péči o nehty apod.) • Neposuzovat isolovaně, ale v kombinaci, zvažovat podmínky při plnění do obalů, zvl. teplotu, aseptické podmínky) • Suroviny (látky) „nepřátelské“ vůči m.: peroxid vodíku, thioglykoláty, rozpouštědla (aceton, glykoly), okysličovadla, antiperspirační soli
Požadavky na konzervační prostředky • Účinnost vůči širokému spektru mikroorganismů • Mikrobicidní (ne pouze mikrobistatický) účinek • Kompatibilita se složkami výrobku • Rozpustnost (většinou ve vodné fázi) • Nízká toxicita a alergenicita • Optimální dávka (tj. rovnováha mezi účinkem a potenciální zátěží organismu)
Testy účinnosti konzervace (1) • Nejsou mezinárodně jednotné metody • Přežívací testy (survival tests), zátěžové testy (challenge tests, load tests) jednorázové, opakované (SM Koko tests) • Inokulace standardních mikroorg. do výrobku jednotlivě nebo ve směsi • Sledování životaschopnosti kvantitativně, semikvantitativně, kvalitativně • Doba trvání 4-6 týdnů • Hodnocení nejednotné, nejčastěji lékopis
Testy účinnosti konzervace (2) • Nejčastěji používané mikroorganismy (definované sbírkové kmeny): • Staphylococcus aureus (CCM 4516) • Pseudomonas aeruginosa (CCM 1691) • Escherichia coli (CCM 4517) (v některých lékopisech není uvedena) • Candida albicans (CCM 8215) • Aspergillus niger (CCM 8222) • Někdy vhodné použít tzv. provozní kmen
Testy účinnosti konzervace (4) V 1.pol.2007 tematický úkol HH: - zkoušky provedeny u 28 vz. (a 2 z každého regionu), převážně typu mléka, krémy se symbolem otevřeného kelímku 3 až 24 měsíců (nebo bez symbolu) - 1 vorek nevyhovující, výrobce upravil složení konzervačních látek
Testy účinnosti konzervace (5) Zkoušení pro výrobce během vývoje nového KP nebo při nutné záměně konzervační látky • Používána metoda podle lékopisu: - jednorázová inokulace - jednotlivě druhy mikroorganismů - vyočkování v intervalech 0, 24h, (48h), 1 t, 2 t, (3 t), 4 t - kvantitativní stanovení úbytku životaschopných mikroorganismů (v řádech)
Testy účinnosti konzervace (6) • Hodnocení účinnosti – zatím neexistuje specificky pro KP • Používáno v principu hodnocení podle lékopisu: - odlišné pro 2 druhy přípravků: okolo očí k místnímu použití - lékopis nerozlišuje hodnocení pro emulze olej ve vodě, voda v oleji, - kriterium A (doporučené), nelze-li dosáhnout → - kriterium B (pomalejší nebo menší pokles počtu přežívajících) - pro mastné emulze zřejmě možné/vhodné použít krit.B
Testy účinnosti konzervace (7) • Problémy souvisí s - vyřazováním účinných látek se seznamu povolených - konzervační látky omezeny kvantitativně jen jednotlivě, nikoliv v souhrnu → někdy použito 6 i více látek - tytéž látky nepůsobí stejně v různých výrobcích, závislost na složení, pH a typu emulze (o/v, v/o) - pro hodnocení výsledků u emulzí voda v oleji (v/o) by měla legálně být odlišná, mírnější kriteria - pracuje Skupina expertů pro optimální konzervaci v rámci Výboru pro kosmetické produkty při Výboru pro veřejné zdraví (Rada Evropy – Partial Agreement) – za ČR členem Dr.Špelina, skupinu vede Holandsko, dále účast Francie, Německo, Rakousko, Norsko
Zátěžové testy a trvanlivost po otevření (PAO) Zátěžové testy – základní zdroj informace pro stanovení doby trvanlivost po otevření (Návody EK, COLIPA) • Předpoklad používání za obvyklých podmínek (čisté ruce, teplota a vlhkost prostředí, čisté prostředí) • Stanovení délky PAO závisí také na • obsahu balení (velikosti) • druhu obalu • množství aplikovaném při jednom použití • obvyklé frekvenci aplikace • sdílení téhož výrobku více osobami (rodinná balení) • stabilitě produktu („rozpad“ emulze, žluknutí tukové složky oxidací apod.)