Új laboratóriumi paraméterek a meddőség megítélésében

1. Új laboratóriumi paraméterek a meddőség megítélésében Dr. Kanyó Katalin PhD Kriston Rita, Blahó Krisztina, Dr. Konc János PhD Szent János Kórház Budai Meddőségi Centrum Diagnosticum - 2014.

2. AMH • Új mérési lehetőség a petefészek kapacitásának és stimulálhatóságának megítélésére Diagnosticum - 2014.

3. Tények az AMH-ról • A granulósa sejtek termelik • Az AMH-t a 2-6 mm-s tüszők produkálják / a > 8 mm-s tüsző kevés AMH-t termel • Az AMH szint a korral csökken / inhibin B ↓, bazális FSH ↑, AFC↓/ • Obes nőknél 65%-al kisebb az AMH szint • Az AMH szint nem függ a menstruációs ciklustól, szemben az FSH-val

4. Tények az AMH-ról • Az AMH szint előre jelzi az ovarialis választ • AMH > 3.5 ng/ml ,megnövekedett ovarium válasz, OHSS veszélye / AFC > 16 tüsző / • Az AMH szint nem függ: • fogamzásgátló tabletta szedésétől • terhességtől • GnRH agonistától • Chemotherápia, irradiáció után csökken az AMH / ovárium károsodás /

5. Tények • Az AMH, mint prognosztikus indikátora az IVF-nek(4072 ciklus, 2010 ápr.-2013.jan): • + Ciklus cancelláció bekövetkezte • + Hány petesejt nyerhető (stimuláció) • + OHSS előrejelzése • - IVF kimenetele-a terhességet illetően Reichman, Goldschlag, RosenwaksFertility and Sterility 2014. Apr. 1012-1018. Diagnosticum - 2014.

6. Tények Cancellációs arány • Ha az AMH < 0,1ng/ml –akkor 13x nagyobb a cancellációs arány, mint ahol az AMH>2ng/ml Reichman, Goldschlag, RosenwaksFertility and Sterility 2014. Apr. 1012-1018. Diagnosticum - 2014.

7. AMH GenII kit – LedgerF.S. 2014.febr. 339. • Korábbi gyártó: Immunotech - és Diagnostics Systems Laboratory • Új gyártó: BeckmanCoulter : Gen II. AMH assay – 2 módszer lépéseit egyesíti Diagnosticum - 2014.

8. AMH GenII kit – LedgerF.S. 2014.febr. 339. • Beckman Coulter: • Először csökkenő AMH érték • Instabilitás – complement cascade miatt, gyors változtatás: premixing step-fagyasztás utáni felengedést követően pufferbe viszi • Növekvő AMH érték– inaktiválja a complement cascadot –interferencia csökken • Szegényes korreláció: AMH-alacsony AFC közt Diagnosticum - 2014.

9. Nelson - GlasgowF.S. 2014. febr. 523-529. • AMH magasabb érték a vártnál (10.984 páciens) • Összehasonlítva aDiagnostics Systems Laboratory kitt korábbi eredményeit –a Beckman Coulter Generation II assay • +40% növekedés Diagnosticum - 2014.

10. Pankhurst –New ZelandF.S 2014. march 846-850. • A Beckman-Coulter AMH Gen II assay egybeméri a biológiailag inaktív pro-AMH-t és a biológiailag aktív AMH N,C-t • Ezzel magyarázhatók a jelenleg mért átlagosan magasabb AMH értékek a gyakorlatban, amelyek nem mindig korrelálnak az AFC-vel • Ajánlás: külön kellene megmérni a pro AMH-t és az AMH N,C-t és az arányukat meghatározni, mert ez nem biztosan konstans Diagnosticum - 2014.

11. Reichman, Goldschlag, RosenwaksF.S. 2014. apr. 1012-1018. • GenII AMH assay eredménye, mint prognosztikus indikátor (4072 ciklus, 2010 apr.-2013.jan): • + Ciklus cancelláció • + Hány petesejt nyerhető (stimuláció) • - IVF kimenetele-a terhességet illetően Diagnosticum - 2014.

12. Okok • Szérum tárolási körülményei különbözőek • Mikor kerül lefagyasztásra? • Mikor történik a pufferbe vitel? • Hány fokon történik a tárolás és meddig ? (szobahőmérséklet, -20 C, - 80C) X. Han, M McShane, R Sahertian, C White, W Ledger Human Reproduction, Vol.29,No5pp.1042-48. 2014.

13. Új irányzat • ANS Labs /Webster, Tx, USA/ • ultraszenzitív AMH • picoAMH (eddig mérhetetlen AMH-ra (< 0,1) fokozott érzékenység Diagnosticum - 2014.

14. Régi módszer • A 3. napi bazális FSH értékelése önmagában veszélyes a termékenység megítélésére (Pl. alacsony bazális FSH-magasabb bazális E2 = perzisztáló petefészek ciszta és nem javuló termékenység, vagy stimulálhatóság) Diagnosticum - 2014.

15. Inzulin rezisztencia • A sejtek inzulinfüggő glükózfelvételének csökkenése (norm. mennyíségű inzulin nem elegendő a hatáshoz) • Főleg PCOS-s pácienseknél • Merckformin kezelés – súly csökkentés • Inofolic ??? • Mio-inozit 2000 mg + folsav 200 mg • Ovarialis aktivitás fokozása • Szerep az ivarsejtek kialakulásában • Inzulin érzékenység fokozása Diagnosticum - 2014.

16. TSH /pajzsmirigy alulműködés/ • Anti TPO (pajzsmirigy szövete lassan pusztul) • Anti-thyreoglobulin • Hashimoto-thyreodistis /idült gyulladás/ • Nők: 4/1000 • Férfiak: 1/1000 Diagnosticum - 2014.

17. Immunológiai paraméterek • ANA vizsgálata /auto-antitest/ - a sejtmag ellen termelődnek- kettős szálú DNS elleni AT • Autóimmun betegségekben pl. SLE-ben emelkedett Diagnosticum - 2014.

18. Trombofilia szűrés • Anamnézisben nem szerepel trombo-embóliás megbetegedés • de • Infertilitás • Sikertelen IVF-ek • Koraszülés • Magzati halálozás Diagnosticum - 2014.

19. A terhesség kimenetele Diagnosticum - 2014.

20. Véralvadási faktorok • Leyden mutáció – V. véralvadási faktor • Átl. népesség: 10% (heterozygóta)(8x kockázat), trombózisos beteg: 20-30%, • A trombózis hajlam már heterozygóta formában is megnyilvánul, homozygóta: néhány ezrelék (80x kockázat) • APC rezisztencia (Leyden mutáció okozta aktivált protein C rezisztencia) - megszünteti a placenta anticoaguláns tulajdonságát Diagnosticum - 2014.

21. Véralvadási faktorok • Protrombin – II. véralvadási faktor (több véralvadást elősegítő fehérje képződik)(hajlamos családokban 18%) (a trombózisos betegek közt 6%) • Homozygóta formában – habituális vetélés hátterében van szerepe Diagnosticum - 2014.

22. Homociszteinszint • Mérsékelt emelkedés 5-10% • Oka: MTHFR v. CBS gén pontmutációja • Homozygóta formában 5-15%/átl. népesség (gyakori) • Folsav ellátottság fontos (hiányában a homocisztein magasabb) (sóska, spenót, saláta) Diagnosticum - 2014.

23. Protein C, Protein S • Véralvadással egyensúlyt tartó fibrinolízist irányító fehérje • Alacsony szintje v. hiánya trombózis hajlamot okoz Diagnosticum - 2014.

24. Coeliakia • Meddőség, vetélés • 26 éves kor után halmozódik • Glutén mentes diéta Diagnosticum - 2014.

25. D-vitamin • Hiánya – petefészek daganatok előfordulása • Szabályozó hatás az immunrendszerre • Anovulációval meglétével is kapcsolatban áll • Pajzsmirigy megnövekedés és túlműködés Magyarországon a felnőtt lakosság körében normál szint alatti Yale tanulmánya alapján az infertilis nők 93%-ban komoly hiány van, főleg a PCOS-nál Diagnosticum - 2014.

26. D-vitamin pótlása • Október-április : 1.000 - 2.000 NE • 65 éven felülieknek egész évben • Könnyű túladagolni – • a Ca szint emelkedését okozhatja • Fokozhatja: vesekő, epekő, képződését és hasnyálmirigy gondokat okozhat Diagnosticum - 2014.

27. <5 millió/ml spermiumszám esetén • Y kromoszóma mikrodeléciók • X és Y kromoszóma aneuploidiák • Cisztás fibrózis • AZF faktor Diagnosticum - 2014.

28. Cisztás fibrózis • CF-ben szenvedő férfiak 98%-a meddő • Fiú: veleszületett ondóvezeték hiány: CBAVD • Obstructive-Azoospermia (csak ürülési zavar) • Nők: sűrű méhnyakváladék – nehezített teherbeesés Diagnosticum - 2014.

29. AZF faktor • Y kromoszóma hosszú karján lévő gének deléciója • Hímivarsejt érés v. képzés részleges v. teljes zavara • Infertilis férfiak: 7-15 %-ban deléció • Azoospermiás férfiak: 70-80 %-ban deléció • AZF régió deléciója esetén: • 75% Sertoly cell only • 25% érési gátlás • A nem mozaikos Y kr. Mikrodeléciót hordozó férfiak fiai a mutációt 100%-ban öröklik

30. Oxisperm • ROS felhalmozódás • Anti-oxidáns terápia Diagnosticum - 2014.

31. VitalScreen • Eozin festés • Mozdulatlan spermiumok vizsgálata • Ha felveszi a festék vörös színét, akkor nem él a spermium Diagnosticum - 2014.

32. EpiScreen • Mellékhere szekréció - Alfa-glükozidáz • Elzáródás – norm. tesztoszteron érték mellett • Mellékhere krónikus gyulladása/Epididymitis -- Hypoandrogenizmus Diagnosticum - 2014.

33. Kariotipus meghatározás • Kromoszóma aberráció • Transzlokáció hordozás • Nemhez kötötten öröklődő betegségek Diagnosticum - 2014.

34. Diagnosticum - 2014.

35. Diagnosticum - 2014.

36. Diagnosticum - 2014.

37. Diagnosticum - 2014.

38. Diagnosticum - 2014.

39. WHO új sperma paraméterei I. • Karencia: 2-7 nap • pH > 7,2 • Spermium koncentráció:≥ 15 M/ml • Spermium szám/ejakulátum: ≥ 39 M/ml • Mennyiség: > 1,5 ml • Peroxidáz teszt: < 1 M/ml Diagnosticum - 2014.

40. WHO új sperma paraméterei II. • Motilitás: ≥ 32 % • Progresszíven mozgó: ≥ 32% • Teljes motilitás: ≥ 40% • Morfológia, strick krit. ≥ 4% • Immunológiai vizsg. /MAR teszt/: IgA, IgG • Spemaanalizátorral végzett vizsgálat Diagnosticum - 2014.

41. WHO kritériumok Diagnosticum - 2014.

42. MAR teszt • IgA • IgG • Spermiumok mosása

43. Grádiens centrifugálás Diagnosticum - 2014.

44. HBA tesztSperma HyaluronanBindingAssay • Spermium érettségét vizsgálja – friss mintában • Érett spermiumok képesek kapcsolódni • Legfontosabb mucopolysaccharideja a: • - cumulus oophorusnak • - human folliculus folyadéknak Diagnosticum - 2014.

45. HBA tesztSperma HyaluronanBindingAssay • Stimulálja a spermiumok mozgási képességét • Meghosszabbítja életképességét Diagnosticum - 2014.

46. Módszer • Az ejakulációt követően 3 órán belül végzendő a vizsgálat • 7-10 µl ondó kicseppentése a speciális tárgylemez közepén lévő körre • Fedőlemezzel letakarjuk • 10 és 20 perc közötti időszakban leszámoljuk a kötődött mozgó spermiumokat Diagnosticum - 2014.

47. Eredmény • % kötődés = • kötődött mozgó / • kötődött mozgó + nem kötődött mozgó spermiumok Diagnosticum - 2014.

48. Eredmény értékelése Diagnosticum - 2014.

49. PICSI Diagnosticum - 2014.

50. HALO sperm • Spermium DNS fragmentációjának gyors mérése • Genetikai anyag minősége • Ismeretlen okú meddőség • Habituális vetélés Normozoospermia – Varicocele esetén is lehet pozitív Antioxidáns kezelés Diagnosticum - 2014.