İnsan Gaitasında Hemoglobinin Kalitatif Tayini

1. Gaitada Gizli Kan Testi İnsan Gaitasında Hemoglobinin Kalitatif Tayini

2. TEST TASARIMI

3. KATI-FAZ İMMÜNOKROMATOGRAFİ Kontrol Çizgisi Test Çizgisi

4. Belirteç (Altın Nanopartikül-AuNP) Dedektör Antikor Analit j İmmobilize Antikor Kontrol Çizgisi (C) Test Çizgisi (T) KATI-FAZ İMMÜNOKROMATOGRAFİ

5. Gaitada Gizli Kan Tayini • Gaitada gizli kan bulunması, tedavi edilmemesi durumunda kolorektal kansere neden olabilecek, deverticulitis, polyps ve Chron’s disease gibi gastrointestinal hastalıklara işaret eder. • Gaitada gizli kan taramasıyla bu hastalıkların erken tespiti ve tedavisinin, kolorektal kanser nedeniyle gerçekleşen ölümlerde önemli bir miktarda azalma yarattığı görülmüştür.

6. Gaitada Gizli Kan Tayini • WHO (Dünya Sağlık Örgütü) gibi bir çok organizasyon, kalın bağırsak kanseri tanısı için gaitada gizli kanın tespit eden test metotlarını önermektedir. • İmmünokromatografik test yöntemleri, kimyasal bazlı testler (guiaiac testi gibi) ile karşılaştırıldığında herhangi bir diyet gerektirmemesi gibi çok daha yüksek klinik özgüllük göstermektedir.

7. Gaitada Gizli Kan Testi • Gaitada Gizli Kan Testi, insan gaitasında, insan hemoglobininin (hHB) kalitatif olarak tespitini sağlar. • Test, monoklonal ve poliklonal antikorların bir kombinasyonunun kullanıldığı, örneklerde bulunan insan hemoglobininin yüksek hassasiyet ve seçicilik ile tespit edilmesini sağlayan iki-alanlı immünometrik bir testtir.

8. Belirteç (Altın Nanopartikül-AuNP) Dedektör Antikor Analit j İmmobilize Antikor Kontrol Çizgisi (C) Test Çizgisi (T) Gaitada Gizli Kan Testi • Monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-A nitroselüloz membranın “T” test alanında, poliklonal keçi anti-fare (IgG) antikoru “C” kontrol alanında immobilize edilmiştir.

9. Belirteç (Altın Nanopartikül-AuNP) Dedektör Antikor Analit j İmmobilize Antikor Kontrol Çizgisi (C) Test Çizgisi (T) Gaitada Gizli Kan Testi • Kolloidal altın nanopartikülleri ile konjuge monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-B bir konjugat pedin üzerinde kurutulmuştur. Örnek örnekleme pedine uygulanır. Eğer örnekte hHB bulunuyorsa, hHB kolloidal altın partikülleri ile konjuge edilmiş monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-B’ye bağlanır. Bu kompleks birlikte “T” test alanına ilerler.

10. Belirteç (Altın Nanopartikül-AuNP) Dedektör Antikor Analit j İmmobilize Antikor Kontrol Çizgisi (C) Test Çizgisi (T) Gaitada Gizli Kan Testi • Kolloidal altın partikülleri ile konjuge edilen hareketli monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-B’ye bağlanan hHB “T” test alanında monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-A’ya bağlanarak immobilize olur ve “T” test alanında kolloidal altın nanopartiküllerin birikmesine bağlı, pozitif test sonucunu belirten renkli bir test çizgisi oluşmasına sebep olur.

11. Belirteç (Altın Nanopartikül-AuNP) Dedektör Antikor Analit j İmmobilize Antikor Kontrol Çizgisi (C) Test Çizgisi (T) Gaitada Gizli Kan Testi • Eğer örnekte hHB yoksa örnek, (serbest) kolloidal altın nanopartikülleri ile konjuge edilmiş monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-B ile birlikte “T” test alanına doğru hareket eder.İmmobilize edilmiş monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-A, mobilize kolloidal altın partikülleri ile konjuge edilmiş monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-B’ye bağlanamaz ve “T” test alanında renkli bir çizgi(sinyal) oluşmaz. Bu da negatif test sonucunu gösterir.

12. Belirteç (Altın Nanopartikül-AuNP) Dedektör Antikor Analit j İmmobilize Antikor Kontrol Çizgisi (C) Test Çizgisi (T) Gaitada Gizli Kan Testi • Örnekte hHB varlığına bağlı olmaksızın kolloidal altın nanopartikülleri ile konjuge edilmiş monoklonal fare anti-hemoglobin antikoru-B, örnek “C” kontrol alanından geçerken, “C” kontrol alanında immobilize edilmiş poliklonal keçi anti-fare (IgG) antikoru bağlanır. Bu sebeple kolloidal altın partiküllerinin “C” kontrol alanında birikmesine bağlı olarak test sonucunun geçerli olduğunu gösteren renkli bir çizgi oluşur. Her koşulda “C” kontrol alanında renkli bir çizgi oluşmalıdır, eğer “C” kontrol alanında gözle görülebilir renkli bir çizgi yok ise test sonucu geçersiz olarak yorumlanır.

13. Gaitada Gizli Kan Testi ÖRNEK TOPLAMA VE HAZIRLAMA Test gaita örneği ile kullanılır. Eğer gaita örneği 6 saat içerisinde test edilmeyecekse, gaita örneği toplanmasından itibarren 3 gün boyunca 2-8 °C’de muhafaza edilebilir. Dilüent içeren örnek alım tüpüne alınan gaita örneği 3 güne kadar oda sıcaklığında, 6 aya kadar ise -20 °C’da saklanabilir. Bayanlardan mensturasyon sırasında ve 3 gün sonrasına kadar örnek alınmamalıdır. Eğer hasta hemoroit kanamasından ya da idrarında kan bulunmasından şikayetçi ise hatalı pozitif sonuçlar alınabilir. Diyet yapılması gerekmez. Testi ant-insan hemoglobin antikorları vasıtasıyla çalıştığından, yüksek hassasiyet ile sadece insan hemoglobinini tespit etmektedir.

14. Gaitada Gizli Kan Testi ÖRNEK TOPLAMA VE HAZIRLAMA • Testi kullanmadan önce; • Dilüent içeren örnek alım tüpünün kapağını açınız. • Örnek alma çubuğunu gaitanın en az üç farklı bölgesine batırarak çeviriniz. • Üzerinde gaita örneği bulunan örnek alma çubuğunu dilüent içeren örnek alma tüpüne tekrar takınız ve kapatınız. 2 dakika boyunca örnek alma tüpünü aşağı ve yukarı çalkalayınız.

15. Gaitada Gizli Kan Testi TEST PROSEDÜRÜ • Testi yapmadan önce örneği hazırlamak için “Örnek Toplama ve Hazırlama” bölümünü okuyunuz. • Test kitini alüminyum poşetinden çıkartın ve düz bir tüzeye koyun. • Dilüent içeren örnek alım tüpünün ucundaki şeffaf koruyucuyu çıkartın ve tüpün ucunu iki yana çekerek kırın. • Kasetin örnek gözüne 3 damla örnek damlatın. • Test 5 dakika içerisinde dahi reaksiyon verebilir. Sonuçlar 10 dakika içinde okunmalıdır. 20 dakika sonra oluşan sonuçları dikkate almayın, 20 dakika sonra oluşacak sonuçlar geçersiz olarak yorumlanmalıdır.

16. Gaitada Gizli Kan Testi SONUÇLARIN YORUMLANMASI Negatif: Sadece “C” alanında bir renkli çizgi görülmesi; insan hemoglobininin (hHB) var olmadığını gösterir. Pozitif: “C” ve “T” alanlarında birer renkli çizgi görülmesi, insan hemoglobininin (hHB) varlığını gösterir. Düşük konsantrasyonlardaki hHB “T” alanında silik bir çizgi oluşmasına sebep olabilir. “T” alanında silik bir çizgi dahi görülmesi “pozitif” olarak yorumlanmalıdır. Geçersiz: Hiçbir renkli çizgi görünmüyor ya da sadece “T” alanında renkli bir çizgi görünüyorsa test geçersizdir ve test yeni bir kit ile tekrarlanmalıdır.

17. Gaitada Gizli Kan Testi PERFORMANS ÖZELLİKLERİ Referans + sonuç - sonuç Cut off: 50 ng hHB/mL Hassasiyet : 99,9 % Özgüllük: 97 % Pozitif Tahmin Değeri : 93 % Negatif Tahmin Değeri : 99,9 % 100.000 ng hHB/mL derişimine kadar yapılan denemelerde hook effect görülmemiştir. Test + sonuç - sonuç

18. Gaitada Gizli Kan Testi Çapraz Reaksiyon Aşağıdaki hemoglobin türleriyle çapraz reaksiyon gözlenmemiştir. 1000 mg/ml Koyun Hb 1000 mg/ml Kuzu Hb 1000 mg/ml At Hb 1000 mg/ml Domuz Hb 1000 mg/ml Keçi Hb 1000 mg/ml Tavşan Hb 1000 mg/ml Köpek Hb

19. TEŞEKKÜRLER