Les diff rents principes analytiques en NFS

1. Les différents principes analytiques en NFS

2. L'Hémogramme L'examen d'hématologie par excellence

3. La chronologie Automatisation de l'hémogramme par étapes

4. LA NUMERATION DES TROIS LIGNEES

5. La NumérationDeux principes différents La variation d'impédance Principe Coulter du nom de son inventeur. Méthode de référence. Numération des trois lignées, séparation des populations par des seuils, construction d'histogrammes Chez Coulter est combiné avec plusieurs concepts complémentaires pour une plus grande exactitude des résultats Peut être utilisé avec l'hydrofocalisation La mesure optique Associe la cytométrie en flux et la diffraction lumineuse. La source de la lumière peut être un laser ou une lampe au tungstène.

6. La variation d'impédancePrincipe Coulter

7. Occasionnellement deux ou trois cellules peuvent traverser l'orifice de comptage en même temps. Une impulsion de grande amplitude est générée. La fréquence de ces passages en coïncidence est statistiquement prévisible en fonction du nombre de cellules. Cette correction est réalisée automatiquement par les analyseurs. Correction de coïncidence  Doublet ou triplet cellulaires

8. Numération des globules blancs Bac de comptage des blancs Comptage à partir d'une suspension cellulaire. Les globules rouges sont lysés. Toute particule d'un volume supérieur à 35 fl est comptée comme un globule blanc. Ce résultat est assujeti à une correction dite "correction de coïncidence".

9. Numération des Globules Rouges Bac de comptage des Rouges/Plt Comptage et mesure du volume à partir d'une suspension cellulaire. Toute particule d'un volume supérieur à 36 fl est comptée comme un globule rouge. Les impulsions sont triées pour retenir celles correspondant au passage standard. Le résultat est assujeti à une correction dite "correction de coïncidence".

10. Construction des histogrammesRépartition des impulsions dans des canaux

11. Numération des Globules Rouges Histogramme des rouges Mise en évidence de fragments de cytoplasme ou de grandes plaquettes par l'analyse de L'histogramme à partir de 24 fl.

12. Numération des Globules Rouges Les paramètres calculés Ht = Hématocrite Ht = (GR x VGM)/10 TCMH = Teneur cellulaire moyenne en hémoglogine. Hb g/100 ml x 10 TCMH = Nb GR 10 6/mm3 CCMH = Concentration cellulaire moyenne en hémoglobine. Hb en g/100 ml CCMH = x 1000 Nb GR 10 6/mm3 x VGM

13. Numération des Globules Rouges Les paramètres calculés L'IDC ou RDW L'IDC est une valeur statistique correspondant au CV % calculé sur la distribution des rouges = coefficient d'anisocytose.

14. Numération des Plaquettes Bac de comptage des Rouges/Plt

15. Taitement mathématique des données brutes : Test de Log-normalité Lissage et extrapolation de 0 à 70 fl Ce traitement mathématique intègre les grandes et petites plaquettes tout en éliminant les interférences. Numération des Plaquettes Histogramme des Plt

16. Plt : lissage et extrapolationNumération juste et élimination des interférences

17. Plt seuils variables Les seuils variables n'éliminent pas tous les risques d'interférence

18. Numération des Plaquettes Les paramètres calculés Le Thrombocrite Tct = VMP x Nb de Plaquettes L'IDP ou PDW Indice de distribution plaquettaire

19. Numération par Hydrofocalisation  Bac de comptage des rouges avec hydrofocalisation

20. La mesure optique  Le deuxième principe pour la numération

21. La mesure optique  Ce principe ne mesure que la taille, pas le volume

22. La mesure optique  Compensation d'une interference liée au contenu de la cellule

23. La mesure de l'hémoglobine Principe colorimétrique La mesure de l'hémoglobine est réalisée dans une chambre spécifique sur la dilution des leucocytes. L’agent de lyse forme un complexe coloré avec l’hémoglobine. Le faisceau optique traverse la cuve de mesure et passe à travers un filtre de 525 nm.

24. LA FORMULETROIS POPULATIONSCINQ POPULATIONS

25. Formule 3 populationsRôle de la lyse différentielle (Cytolyse)

26. Histogramme différentielGB = Détermination des 3 sous-populations sur 5 Reconnaissance des cellules d'après le volume résultant. Coulter : 3 sous populations : Ly, Mo, Gr. Sysmex : 3 sous populations : Ly, Midcells, Ne. Les anomalies de distribution sont signalées par des alarmes.

27. 5 Pop : critères de reconnaissance La formule dépend de la pertinence des critères Volume ou taille cellulaire Principe Coulter pour le volume ou mesure optique pour la taille Conductivité ou Radio Fréquence (RF) Structure de la cellule par un courant haute fréquence Diffraction lumineuse Diffraction de la lumière par la cellule Cytochimie Coloration de la cellule Cytolyse Lyses différentielles des cellules Marquage Marquage par des anticorps monoclonaux et fluorochromes

28. Détermination de la formule Chaque société combine un ou plusieurs critères Volume/Conductivité/Diffraction Coulter Taille cellulaire/Cytolyse/Cytochimie (Actvité peroxydasique) Bayer Volume/Cytolyses/Cytochimie (Coloration des Eo.) Abx Volume/RF/Cytolyses Sysmex Diffraction lumineuse + Cytolyse Sysmex Diffraction lumineuse avec ou sans cytolyse Abbott CD Diffraction lumineuse + Marquage Abbott CD CD 4000

29. Volume/Conductivité/Diffraction Beckman Coulter

30. Volume/Conductivité/Diffraction 3 mesures physiques pour la formule complète (Coulter)

31. Analyse en 3DExploration réalisée sur plus de 8000 cellules

32. Taille cellulaire/Cytolyse/Cytochimie (Actvité peroxydasique) Bayer 

33. Taille/Cytolyse/Cytochimie (Peroxydase) Difraction lumineuse enregistrée sous deux angles différents (Bayer)

34. Taille/Cytolyse/Cytochimie (Peroxydase)  Canal basophiles

35. Taille/Cytolyse/Cytochimie (Peroxydase)  Diagramme Perox et histogramme Basos

36. Volume/Cytolyses/Cytochimie (Coloration des Eo.) Abx

37. Volume/Cytolyses/Cytochimie  Canal Matrice (ABX)

38. Volume/Cytolyse/Cytochimie  Canal basophiles

39. Volume/Cytolyse/Cytochimie  Canal Matrice/Canal Basos

40. Volume/RF/Cytolyses Sysmex

41. Volume/RF/Cytolyses  Canal Impédance/Radio Fréquence

42. Volume/RF/Cytolyses Canal Eosinophiles et Canal Basophiles

43. Volume/RF/Cytolyses Scattergramme RF/DC et Histogrammes Eo et Ba

44. Diffraction lumineuse + Cytolyse Sysmex

45. Diffraction lumineuse/Cytolyse Mesure par cytométrie en flux

46. Diffraction lumineuse/CytolyseEnregistrement de deux angles de diffraction

47. Diffraction lumineuse/CytolyseFormule Ly, Mo, Eo, Ne+Ba

48. Diffraction lumineuse/CytolyseDétermination de la 5 ème pop : les Neutrophiles

49. Diffraction lumineuse avec ou sans cytolyse complémentaire Abbott

50. Diffraction lumineuse  Diffraction multiangles MAPSS (ABBOTT)

51. Diffraction lumineuse  Angles de diffraction et critères de reconnaissance

52. Diffraction lumineuse  Diffractogrammes

53. Cytolyse complémentaire Abbott (CD 3200)

54. Cytolyse : le NOCCD 3200

55. Diffraction lumineuse + Marquage Abbott

56. Marquage à l'iodure de propidium CD 4000

57. Analyse de la fluorescence Marquage des noyaux accessibles

58. LE MARQUAGE D'AUTRES TYPES CELLULAIRESRETICULOCYTESCD4/CD8

59. RéticulocytesNouveau bleu de méthylène

60. RéticulocytesMarquage flurescent sur ARN = Fluorescence verte

61. RéticulocytesFluorescence vs Complexité

62. Lymphocytes T4/T8Marquage des sites CD4/CD8 par cytosphères (Ag-Ac)