به نام خدا نگهداری ژرم پلاسم و انتقال و کشت بدون ویروس وامن موز

1. به نام خدانگهداری ژرم پلاسم و انتقال و کشت بدون ویروس وامن موز تهیه کننده : محمدجواد بهروزی استاد راهنما: 1

2. مقدمه • رقم کاواندیش موز به تنهایی 13 درصد تجارت جهانی موز را دربر دارد. • موز،به دلیل تکثیرکلنی و تک کشتی،مستعدبه انواع بیماریها میباشد • نگهداری ژرمپلاسم،میتواند منبع درجه یک مواد ژنتیکی گیاه باشد. • نگهداری بذر،راحت ترین راه نگهداری ژرم پلاسم،در میوه ها،در موز بیدانه جوابگو نیست • نگهداری و انتخاب ژرمپلاسم ازبافت درخت در این ویترو هم به خاطر هزینه بر بودن کاربرد ندارد • نگهداری در شرایط انجماد روشی است که درآن تمام فعل وانفعالات شیمیایی متوقف میگردد • دراین روش مواد گیاهی به مدت محدود میتوان نگهداری کرد • دراین مقاله 3روش نگهداری ژرمپلاسم برای موز را تشریح میکنیم 2

3. موادو روش ها نگهداری ژرمپلاسم توده مریستمی با شیشه ای شدن: • برای این منظور،نوک شاخه،به محیط کشت نیمه منجمد MS منتقل شد • محیط MS حاوی،100 میکرومول BA، 1 میکرومول IAA • محلول PVS2 حاوی،30 درصدگلیسرول،15 درصد اتیلن گلیکول،15 درصد دی متیل سولفوکسیدو 0/4 ساکارز، به محیط کشت اضافه و PH روی 5/8 تنظیم شد. • مریستم هاتحت دمای 0 درجه ،60،120،150،180 دقیقه • قرار گرفتند. • بعدازین تیمارمریستم به میکرو وسپس به ازت مایع • منتقلشد. • بعداز 2 روز مریستم ها به محیط باززایی در محیطی • تاریک منتقل شدند 3

4. مریستم ها و بستر کشت 4

5. نمودار زیوایی و نسبت کالوس به شاخه بعد از تیمار و انجماد 5

6. نگهداری ژرمپلاسم سوسپانسیون سلولهای جنین زا: • سوسپانسیون سلول های جنین زا ازپرآوری کشت مریستم ازارقام مختلف موز بدست آمد • این سوسپانسیون در محیط ZZ حاوی نصف مقادیر استاندارد میکرو و ماکرو المنت ها و ویتامین های محیط MS میباشد • سوسپانسیون بامحلول انجماد حاوی، 7/5درصد DMSOو 180 گرم برلیترساکارز تیمار شد • سپس محلول مذکور به ازت مایع منتقل و تا -40 درجه سردشد • سپس سوسپانسیون بلافاصله،با آب مقطر40 درجه به • مدت 2 دقیقه گرم شد. • سوسپانسیون های جنین زا درنهایت به محیط باززایی • منتقل وبعد از 3 ماه گیاهچه ها شمارش شد • مشاهده شد که برخی سوسپانسیون ها،گاهی • اوقات میتوان نتیجه متفاوتی در جوانه زنی و باززایی • نمونه ها نشان دهد 6

7. سوسپانسیون سلول های جنین زا 7

8. نابودسازی ویروس ها • جهت آزمایشات،ویروس CMV و BSV از گیاه توباکو استخراج،و به ارقام موز منتقل شد. • 10 دقیقه بعداز آلودگی،،برگ موز با آب شستشو داده شد. • ازتوده های مریستمیگیاهان ویروسی مذکور جهت انجماد استفاده شد • با روش ایمونواسی (ELISA)جهت شناسایی ویروس CMV و با روش TAS-ELISA جهت شناسایی ویروس BSV استفاده شد. 8

9. نتایج • آزمایشات اخیرنشان دادکه در رشو اول تیماربا PVS2 بعد از ازت مایع توده مریستم،به نوع گونه بستگی داردو در همه ارقام یکسان نیست • برای مریستم های بیشترارقام موز،یک تیمار 20 تا 40 دقیقه ای با PSV2 بهینه میباشد • درکل یک تیمار 2/5 ساعته در مقایسه با تیمار 1 ساعته باPSV2 عملکرد خوبی با افزایش 15 درصدی باززایی مریستم ها پس از انجماد داشته است • مهمترین عاملی که باززایی سلول های جنین زا تحریک میکند کیفیت آنها است • سوسپانسیون های حاوی نسبت بیشترسلول جنین زا،در انجماد زنده ماندند • نتایج نشان دادکه درصد گیاهچه های باززایی شده بعداز انجماد عاری از ویروس CMV و BSV به ترتیب 34 و 90 درصد بود • نتایج همینطورثابت کرد هر چه اندازه مریستم کوچک تر باشد،احتمال آلودگی هم کمتر خواهد بود 9

10. بیشترین میزان جوانه زنی مربوط به سوسپانسیون THP با 57 درصد جوانه زنی میباشد 10

11. درصد گیاهان ویروسی جوانه زده سالم پس ازکشت مریستم وسپس انجماد طبق نمودار ستون سمت راستی آبی رنگ،گیاهچه های جوانه زده بعد از کشت مریستم و انجماد را نشان میدهد که بیشترین جوانه زنی را دارد.کمترین مقدار هم مربوط به ستون سمت چپی و ستون شاهد ماست که به طور مستقیم از جنین زایی به وجود آمد 11

12. نتیجه گیری • نگهداری ژرم پلاسم در حالت انجماد،تکنیک بسیار امیدوار کننده،برای پاکسازی بیماریهای ویروسی از موز میباشد • عمل وقت گیر برش مریستم در این ویترو به کنار رفته و به علاوه سیاه شدن ناشی از مواد فنولیک هم به پایان میرسد. • بعد از 1 ماه از نگهداری ،سلول ها جوانه زده و زایایی و قوه نامیه آنها در طول انجماد دست نخورده مانده بود 12

13. چکیده • نگهداری ژرم پلاسم برای نگهداری طولانی مدت درختان بیدانه و کلنی ها مثل موز کاربرد دارد. • سه روش برای انجماد ژرم پلاسم انجام شد. • روش اول انجمادسریع مریستم ها ی پیش تیمارشده با ساکارزبه مدت 2 هفته • روش دوم شیشه ای کردن نوک مریستم ریشه ها در شرایط این ویترو • روش سوم و بهترین روش ترکیب دو روش قبلی • علاوه بر نگهداری ژرمپلاسم،روش انجمادباعث نابودسازی ویروس ها در گیاهان آلوده میشود 13

14. پیشنهادات • استفاده از کشت مریستم جهت تولید گیاهان عاری از ویروس • استفاده از انجماد ژرمپلاسم جهت نگهداری ژنوتیپ های مرقوب گیاهان • استفاده از روش سوم این مقاله جهت انجماد • پیش تیماری با PSV2 باعث بهبود جوانه زنی بعد از خروج از ازت مایع است • استفاده از ژرمپلاسم جهت تولید گیاهان عاری از ویروس 14

15. منابع 15