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RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSI EZIOLOGIA e DIAGNOSI DI LABORATORIO

RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSI EZIOLOGIA e DIAGNOSI DI LABORATORIO. Dott.ssa Valentina Ebani Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti Facoltà di Medicina Veterinaria Università di Pisa. EZIOLOGIA. BATTERI  Gram negativi Giemsa Gimenez

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RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSI EZIOLOGIA e DIAGNOSI DI LABORATORIO

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Presentation Transcript

  1. RICKETTSIOSI ed EHRLICHIOSIEZIOLOGIA e DIAGNOSI DI LABORATORIO Dott.ssa Valentina Ebani Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti Facoltà di Medicina Veterinaria Università di Pisa

  2. EZIOLOGIA BATTERI Gram negativi Giemsa Gimenez  Pleomorfi coccoidi/elissoidali Parassiti intracellulari obbligati liberi nel citoplasma in vacuoli intracitoplasmatici (Rickettsie) (Ehrlichie)

  3. CELLULE BERSAGLIO CELLULE EMATOPOIETICHE CELLULE MATURE O IMMATURE ENDOTELIALI Ehrlichie Rickettsie TRASMISSIONE TRAMITE VETTORI INVERTEBRATI ZECCHE

  4. PRECEDENTE CLASSIFICAZIONE ORDINE RICKETTSIALES • Famiglia RICKETTSIACEAETribù Rickettsieae Genere Rickettsia Tribù Ehrlichieae Genere Ehrlichia Generi Coxiella Cowdria Neorickettsia • Famiglia ANAPLASMATACEAE Generi Anaplasma Aegyptianella Haemobartonella Eperythrozoon • Famiglia BARTONELLACEAE Genere Bartonella

  5. STUDI GENOMICI SU • Gene 16S rRNA • Gene groESL • Geni che codificano per proteine di membrana

  6. ATTUALE CLASSIFICAZIONE ORDINE RICKETTSIALES Famiglia RICKETTSIACEAEGenere Rickettsia Genere Orientia Famiglia ANAPLASMATACEAEGenere Anaplasma Genere Ehrlichia Genere Neorickettsia Genere Wolbachia Genere Cowdria

  7. FAMIGLIA RICKETTSIACEAE TYPHUS GROUP SPOTTED FEVER GROUP Rickettsia Orientia tsutsugamushi R. prowatzekii R. typhi R. canadensis R. rickettsii R. conorii R. felis R. helvetica R. akari R. sibirica

  8. entrata moltiplicazione rilascio

  9. Rickettsia rickettsii FEBBRE DELLE MONTAGNE ROCCIOSE ROCKY MOUNTAIN SPOTTED FEVER (RMSF) Ixodes ricinus

  10. Rickettsia rickettsii

  11. Rickettsia conorii FEBBRE BOTTONOSA DEL MEDITERRANEO Rhipicephalus sanguineus

  12. Rickettsia felis Rickettsia typhi CANE GATTO Ctenocephalides felis !?

  13. FAMIGLIA ANAPLASMATACEAE A. phagocytophila A. platys A. marginale A. bovis Anaplasma Ehrlichia Neorickettsia E. canis E. chaffeensis E. ewingii E. muris E. ruminantium N. risticii N. sennetsu N. helminthoeca

  14. entrata moltiplicazione rilascio

  15. Ehrlichia canis EHRLICHIOSI MONOCITICA “PANLEUCOPENIA TROPICALE CANINA” Rhipicephalus sanguineus MONOCITI

  16. Ehrlichia chaffeensis EHRLICHIOSI MONOCITICA MONOCITI • Ehrlichia ewingii EHRLICHIOSI GRANULOCITICA GRANULOCITI

  17. Anaplasma phagocytophila “EHRLICHIOSI” GRANULOCITICA Ixodes ricinus

  18. Neorickettsia risticii EHRLICHIA MONOCITICA “POTOMAC HORSE FEVER” MONOCITI

  19. DIAGNOSI DILABORATORIO

  20. DIAGNOSI INDIRETTA • Immunofluorescenza indiretta “gold standard” Soglia di positività • 1:40 Ehrlichie • 1:64 Rickettsie SIERO

  21. VANTAGGI: • Vetrini IFI per E.canis • A. phagocytophila • N. risticii • R. conorii • R. rickettsii • R. typhi • R. prowazekii Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti - Pisa • SVANTAGGI: • Attrezzatura • Lettura

  22. ALTRI TEST SIEROLOGICI E. canis KIT COMMERCIALI Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) ANTIGENI • whole cell • Proteine ricombinanti (p30 p30-1) • Proteina ricombinante (rMAP2)

  23. SENSIBILITA’ KIT Ridotta con titoli anticorpali 1:40 – 1:80 CANI CON EHRLICHIOSI IN FASE NON ACUTA HANNO TITOLI ANTICORPALI BASSI

  24. PROBLEMA CROSS-REAZIONI NON CONFONDERE LE CROSS-REAZIONI CON LE CO-INFEZIONI Frequenti le co-infezioni legate allo stesso vettore E. canis / R. conorii A. phagocytophila / R. rickettsii

  25. DIAGNOSI DIRETTAEhrlichiosi • STRISCIO buffy coat sangue da vasi capillari aspirato tissutale da milza, polmone, linfonodi (E. canis)

  26. ISOLAMENTO • difficoltà di esecuzione • linee cellulari diverse • laboratorio di classe 3 (eccetto E. canis) Su stipite isolato sono possibili studi spr di ordine epidemiologico

  27. DIAGNOSI MOLECOLARE • Sangue in EDTA buffy coat • Tessuti • Estrazione DNA • Polymerase chain reaction • (PCR) Utilizzo di primer diversi a seconda dell’agente eziologico ricercato

  28. Presso Dip. Patologia Animale, Profilassi e Igiene degli Alimenti, Università di Pisa E. canis E. chaffeensis A. phagocytophila N. risticii Rickettsia spp. sequenziamento

  29. CONCLUSIONI • Diversi agenti responsabili di ehrlichiosi e rickettsiosi nel CANE • Sierologia mediante IFI • Ausilio offerto da metodiche molecolari

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