Diagnosticul bacteriologic al TB

1. Diagnosticul bacteriologic al TB

2. Examenul microscopic • Se practica pe frotiu din proba clinica respectiva si identifica micobacteriile punand in evidenta proprietatea de acid –alcoolo-rezistenta • Frotiul se prepara steril (ansa bacteriologica), se usuca la aer( la temperatura camerei sau pe o platina incalzitoare),nu se usuca la flacara • Fixarea : se tine lama cu pensa si se trece partea opusa frotiului prin flacara becului de gaz de 3 ori

3. Pentru evidentierea BAAR este coloratia de referinta Se mai poate face cu substante fluorescente: cu auramina-rhodamina Colorarea cu fuxina la cald pentru a permite intrarea colorantului in interiorul micobacteriilor, si astfel se coloreaza in rosu Coloratia ZIEHL-NEELSEN

4. Decolorarea cu acid –alcool (alcool 70° si acid sulfuric) pana la disparitia macroscopica a coloratiei rosii Se decoloreaza toate structurile cu exceptia micobacteriilor care raman colorate in rosu Pt contrast recolorare cu albastru de metilen Coloratia ZIEHL-NEELSEN

5. Examenul microscopic • Ex se face la microscopul optic cu obiectiv cu imersie 100x • Micobacteriile apar ca niste bastonase subtiri, rosii, usor incurbate, +/_granulare, izolate sau grupate in perechi sau grupuri, pe fond albastru • Se numara BAAR de pe 100 de campuri microscopice • Rezultatele se exprima cantitativ in functie de densitatea bacililor pe lama • Sensibilitatea e relativ mica fiind necesara prezenta a cp 10000 bacili/ml pt un rezultat pozitiv

6. Exprimarea semicantitativa a rezultatelor ex mo al sputei pt prezenta BAAR- obiectiv imersie 1000x

7. Cultura micobacteriilor • Este metoda de referinta pentru diagnosticul TB • Permite identificarea tulpinei de micobacterie si ulterior testarea sensibilitatii acesteia la medicamentele antituberculoase • Probele clinice contaminate(sputa) trebuie decontaminate cu antiseptice obisnuite si omogenizate • Ulterior se centrifugheaza si se neutralizeaza cu un acid slab • Produsul astfel preparat sau direct daca e sterila proba se inoculeaza pe mediile de cultura

8. MEDIUL LÖWENSTEIN JENSEN • Cultura pe medii solide reprezinta standardul de referinta pt izolarea MTB • Perioada de crestere a MTB este de 4-6 saptamani • Cultura pe medii lichide cu detectie radioactva /fluorescenta permite detectarea lor in 1-2 saptamani ,dar e mai scumpa si mai putin disponibila

9. MEDIUL LÖWENSTEIN JENSEN

10. Coloniile MTB pe medii solide sunt rorunde, galben- palide, conopidiforme, cu suprafata rugoasa, izolate sau confluente in functie de densitatea bacililor din inoculul initial Identificarea speciei se face prin teste bichimice Exprimarea rezultatelor se face semicantitativ in functie de densitatea coloniilor Cultura micobacteriilor

11. REFERINTE • http://images.google.ro/imgres?imgurl=http://telmeds.org/AVIM/Abacterio/mycobacterias%2520y%2520nocardia/El_medio_de_cultivo_se_llama_Lowenstein_Jensen.JPG&imgrefurl=http://telmeds.org/AVIM/Abacterio/mycobacterias%2520y%2520nocardia/mycobacterias_nocardia.htm&h=600&w=900&sz=171&hl=ro&start=15&um=1&tbnid=4P7BwIflgWEkmM:&tbnh=97&tbnw=146&prev=/images%3Fq%3DLowenstein%2BJENSEN%26svnum%3D10%26um%3D1%26hl%3Dro%26lr%3Dlang_ro%26sa%3DG • Tuberculoza- curs pentru studenti, 2004- Institutul de Pneumologie “Marius Nasta” Programul National de Control al Tuberculozei • http://faculty.plattsburgh.edu/jose.deondarza/Bio406/Handouts/notes_09.htm http://images.google.ro/imgres?imgurl=http://telmeds.org/A