Download
1 / 23
290 likes | 602 Views
تشخيص آزمايشگاهي ويبريوكلرا (وبا). عليرضا سليمي MS. آيا براي تشخيص خوب نياز به آقا بالاسر داريم؟. جمع آوري و انتقال نمونه :.
E N D
تشخيص آزمايشگاهي ويبريوكلرا (وبا) عليرضا سليمي MS
آيا براي تشخيص خوب نياز به آقا بالاسر داريم؟
جمع آوري و انتقال نمونه : • نمونه برداري عمدتاً توسط همكاران واحد مبارزه با بيماريها كه در سطوح محيطي شهرستان فعاليت دارند و بهورزان خانه هاي بهداشت انجام مي گيرد لذا توجه دادن همكاران اين سطوح به نكات ياد شده از ضروريات يك تشخيص موفق و بدنبال آن درمان و كنترل بيماري مي باشد .
نمونه برداري بايد در مدت زمان 24 ساعت اول بيماري قبل از مصرف هرگونه آنتي بيوتيك يا دارويي انجام گيرد نمونه هاي مشكوك (شامل مدفوع،ركتال سوآب، مايعات بدن، بافتهاي آلوده و ………) بايد توسط محيط هاي ترانسپورت مناسب هرچه سريعتر به آزمايشگاه منتقل شود زيرا ويبريوها در صورت خشك شدن از بين رفته و حتماً بايد در محيط مرطوب نگهداري شوند . مناسب ترين محيط جهت نگهداري و انتقال ، محيط كاري بلر است كه قادر به نگهداري ويبريوها تا حدود 4 هفته مي باشد . (طرز ساخت محيط در همين جزوه توضيح داده شده است) • محيط ها و روشهاي ديگري جهت انتقال نمونه وجود دارند كه بدليل كارآمدي روش فوق از ذكر آنها خودداري مي شود .
كشت و جداسازي : • نمونه ها - سوآب مقعدي درون محيط كاري بلر - نمونه آب جهت بررسي ويبريوكلرا - نمونه مدفوع • اقدامات زير بترتيب بايد انجام پذيرد : انتقال ركتال سوآب حاوي نمونه (يا حدود 5/0 گرم مدفوع يا کاغذ صافي که حدود 1 ليتر آب مشکوک از آن عبور داده شده) به محيط آب پپتونه قليايي اتوگذاري در درجه حرارت 37 درجه سانتيگراد بمدت 8-5 ساعت همزمان با عمل فوق از نمونه مدفوع اوليه يا ركتال سوآپ مستقيماً بر روي محيط انتخابي TCBS نيز كشت مي دهيم .
برداشت از محيط آب پپتونه اتو گذاري شده بوسيله لوپ از قسمت بالاي آن وکشت در محيط TCBS • بررسي محيط هاي TCBS اول و دوم از نظر وجود كلنيهاي مشكوك پس از گذشت زماني حدود يك شب در صبح روز بعد • در صورت رشد كلنيهاي زرد رنگ و محدب بزرگ به ويبريوكلرا مشكوك مي شويم . • اما !!!!!!!!!!!!!!!!!!
بايد توجه نمود: • كه بعضي از انواع پروتئوسها ، اشرشياكلي و كوكسيها نيز ممكن است در روي محيط TCBS رشد كرده و توليد كلنيهاي زرد يا سبز نمايند كه بايد از ويبريو افتراق داده شوند كه استفاده از محيط هاي KIAو SIM و تست اكسيداز در اين موارد بسيار كمك كننده است .
وقت کم است چکار کنيم؟ • بايد خاطرنشان كرد كه در صورت كمبودامكانات و زمان مي توان از كلنيهاي زرد رنگ موجود در روي محيط TCBS مستقيماً براي انجام واكنش آگلوتيناسيون استفاده نمود و چنانچه واكنش آگلوتيناسيون لاتكس با آنتي سرم پلي والانت O1مثبت بود تعيين تيپ توسط آنتي سرم هاي اگاوا و اينابا انجام گرفته و نتيجه سريعاً به مقامات بهداشتي شهرستان گزارش ميگردد .
تست آگلوتيناسيون لاتكس دراين مرحله منفي شد حال چکار کنيم ؟ • براي انجام تستهاي تكميلي از كلنيهاي مثبت يا مشكوك روي محيط هاي KIA وSIM كشت مي دهيم و پس از 18 ساعت انكوباسيون مجدداً از كلنيهاي موجود بر روي محيط KIAواكنش آگلوتيناسيون را انجام مي دهيم در صورتيكه اين واكنش مثبت باشد تعيين تيپ نموده و نتيجه گزارش مي گردد.( در صورت مثبت بودن تست آگلوتيناسيون براي تأييد نتيجه مثبت نيز بايستي عمليات فوق صورت پذيرد.)
در صورت منفي شدن واكنش آگلوتيناسيون از کلنيهاي روي محيط KIA و دارا بودن خصوصياتي كه در ادامه توضيح داده خواهند شد توسط باكتري، نتيجه ناگ يا v. clolerae . non O1گزارش مي شود .
نكته 1 :براي انجام آگلوتيناسيون از روي محيط TCBS بايد بلافاصله بعد از بيرون آوردن پليت از انكوباتور آزمايش را انجام داد . • نكته 2 : از آنجائيكه ممكن است بطور همزمان ويبريوكلرا گروه O1 وnon O1 وجود داشته باشند بهتر است حداقل 5 كلني با آنتي سرم پلي والان چك شود .
روش انجام تست آگلوتيناسيون : • يك قطره از آنتي سرم پلي والانت را مستقيماً بر روي يك لام شيشه اي تميز و در صورت امكان نو قرار داده و توسط فيلدوپلاتين از كلنيهاي مشكوك برداشته و در آنتي سرم حل مي نماييم و در زير چراغ مطالعه بررسي مي كنيم نکته :معمولاً كلنيهاي ويبريو در همان ابتدا براحتي در آنتي سرم حل شده و تكه تكه نمي شود. • در مدت 3 دقيقه حركت دوراني در صورت مثبت بودن تست ، آگلوتيناسيون ايجاد مي گردد و به دنبال آن به همين روش كلني را در آنتي سرم اگاوا و اينابا حل نموده و آگلوتيناسيون را بررسي مي كنيم .
در صورت واكنش با هريك از آنتي سرم هاي ياد شده نتيجه همان آنتي سرم گزارش مي گردد و در صورت مثبت شدن هر دو نوع آنتي سرم ،هيكوجيما قابل گزارش مي باشد . • چنانچه تست آگلوتيناسيون منفي شد بسراغ ساير تستهاي ذكر شده جهت تعيين منفي يا ناگ بودن كلني مي رويم .
تست اكسيداز : تست اكسيدازاز مهمترين تستهاي موجود جهت افتراق بين خانواده ويبريوناسه از خانواده انتروباكترياسهمي باشد چراكه خانواده ويبريوناسه اكسيداز مثبت و خانواده انتروباكترياسه اكسيداز منفي مي باشند . علت اينكه اين تست از چنين اهميتي برخوردار است اين مي باشد كه همچنانكه اشاره شد بيشترين باكتريهايي كه ممكن است همراه ويبريو روي محيط TCBS رشد كنند پروتئوسها و اشرشياكلي مي باشند كه از خانواده انتروباكترياسه مي باشند و در تشخيص نهايي جهت گزارش نتيجه بين ناگ و منفي بسيار كمك كننده است .
روش انجام تست : چنانچه از ديسك اكسيداز استفاده مي شود ابتدا توسط يك قطره آب مقطر ديسك را مرطوب كرده سپس توسط يك اپليكاتور پلاستيكي مقداري از كلني ويبريو را برداشت كرده (كلني مورد نظر بايستي حتماً از روي محيط KIA برداشته شود و كلني TCBS جهت تست اكسيداز مناسب نبوده و نتيجه منفي كاذب خواهد داد) و روي ديسك مرطوب مي گذاريم چنانچه رنگ قرمز يا ارغواني ايجاد شد ، تست مثبت تلقي شده و در صورت عدم تغيير رنگ تست منفي مي باشد .
نكته :از اضافه نمودن آب مقطر اضافي به ديسك بايد خودداري گردد چراكه تركيب پارادي متيل فنيلن دي آمين هيدروكلرايد از ديسك جدا شده و ممكن است واكنش كاذب منفي داشته باشد همچنين همانطوركه اشاره شد حتماً بايد از اپليكاتور جهت انجام تست استفاده نمود چراكه فيلدوپلاتين فلزي بوده و ممكن است معرف ديسك با آهن فيلدوپلاتين واكنش كاذب مثبت ايجاد نمايد (از لوپ پلاتين يا نيكروم مي توان استفاده كرد) .
آزمايشات تكميلي : • كشت روي محيط KIA : از كلني مشكوك روي محيط TCBS با فيلد وپلاتين يك كلني برداشته و ابتدا در قسمت تحتاني و سپس در قسمت شيبدار بطور سطحي كشت مي دهيم . لوله هاي كشت شده KIA نبايد بيش از 18 ساعت در 37 درجه سانتيگراد قرار گيرد در صورت رشد ويبريوكلرا اعم از O1 يا non O1 واكنش بصورت آلكالن اسيد يعني قسمت سطحي قرمز و قسمت تحتاني زرد رنگ خواهد شد و هيچگونه گازي در لوله مشاهده نمي گردد . KIA Alk/Acid TSI Acid/Acid
كشت روي محيط SIM : از اين محيط براي بررسي حركت ، توليد اندول و ايجاد SH2 استفاده مي شود بدين صورت كه از كلني مشكوك توسط فيلدوپلاتين بطور عمقي در محيط كشت مي دهيم و پس از گذشت حداكثر زمان 18 ساعت تحرك باكتري كه در قسمت عمق محيط در صورت مثبت بودن قابل مشاهده است بررسي مي گردد و با اضافه كردن معرف كوآكس نيز به بررسي اندول مي پردازيم و توليد SH2 توسط باكتري محيط را سياه مي كند كه در مورد ويبريو SH2 منفي و حركت و اندول مثبت مي باشد .
حال با توضيحات ياد شده و براي جمع بندي مطالب مي توان براحتي با داشتن نتايـــــج تستهاي فوق بشرح زير نتيجه نهايي كه شامل مثبت ، منفي و ناگ مي باشد را گزارش نمود : • مثبت (اگاوا-اينابا-هيكوجيما) : ايجاد آگلوتيناسيون با آنتي سرم پلي والانت و يكي يا هر دو آنتي سرم اگاوا و اينابا . • نـاگ : عدم ايجاد آگلوتيناسيون با آنتي سرم پلي والانت O1 – تست اكسيداز مثبت –SH2 منفي – گاز منفي – اندول مثبت – حركت مثبت • منفــي : عدم ايجاد آگلوتيناسيون با آنتي سرم پلي والانت – تست اكسيداز منفي
Thank you for your attention.Salimi-1385 بهاري زيبا برايتان آرزومندم
