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AND Recombinante

AND Recombinante. T écnica utilizada para facilitar el estudio de los genes Aislar Amplificar Inserci ón del gen de intéres en otra molécula de DNA que sirve como vector: Molécula de DNA recombinante. Historía del AND Recombinante. Historia del DNA Recombinante.

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  1. AND Recombinante Técnicautilizadaparafacilitar el estudio de los genes • Aislar • Amplificar Inserción del gen de intéresen otramoléculade DNA quesirvecomovector: Moléculade DNA recombinante

  2. Historíadel AND Recombinante

  3. Historia del DNA Recombinante • Salvador Luria: Resctricción y Modificación • Restricción: Fagos solo crecen en un tipo especifico de bacteria. • Moficación: Si un fago tiene la capacidad de crecer en dos varios tipos de bacterias. • Sistema de Restricción: Arber and otros nucleasa que distingue entre DNA residente o extranjero. • Meselson y Yuan caracterizan una enzima que cliva de manera especifica . Enzimas de restricción porque previenen la infeccion viral. • Adición de grupos metilo.

  4. Como Cortar y Pegar el DNA Enzimas de restricción o endonucleasas de restricción: • Reconocenunasecuenciaespecífica, corta de nucleótidos en hebradoble DNA denominadasitio de restricción. EnzimaLigasa: Une dos piezas de DNA mediante la formación de enlancesfosfodiester.

  5. Enzimas de Restricción Tresclases • Tipos de secuenciasquereconocen • La naturaleza del cortequehacen en la hebra de DNA • Estructura de la enzima

  6. Sitios de Reconocimiento de lasEndonucleasas • Reconocensecuenciassimetricas de DNA de 4-6pb • SecuenciasPalindromicas: secuencia 5’>3’ es la misma de la dirección 3’>5’

  7. Sitios de Reconocimiento de lasEndonucleasas Terminaciones Escalonados Sticky cohesivos Romos Blunt

  8. Sitios de Reconocimiento de lasEndonucleasas

  9. Union y Clivaje del DNA porEnzimas de Restriccion

  10. DNA Ligasas • Catalizan la formación de un enlace fosfodiester entre el fosfato 5’ de un nucleotido de un fragamento de DNA y el grupo 3’ hidroxilo de otrofragmento • Requieren ATP como cofactor • Ligasa mas usadaes del fago T4

  11. DNA Ligasas

  12. Clonación • Generación de fragmentos de DNA usandoenzimas de restricción • Ligación de fragmentos de DNA a otramolécula de DNA denominada vector • Tranferencia de la molécularecombinante a unacélulahospedara • Recuperación de los fragmentos de DNA clonados • Purificación y Analisis.

  13. Clonación

  14. Vectores • Moléculas transportadoras de DNA • Pueden replicarse de manera independiente • Poseen sitios de restricción que estan presentes una sola vez en el vector • Poseen un marcador de selección • Faciles de recuperar de la célula hospedera

  15. Plásmidos • DNA circularesextracro;:mosomalesquetienen un origen de replicación y que se replican de maneraautonomadentro de lasbacterias • pBR322: p:plasmido, BR: Bolivar & Rodriguez, 322:número de identificación. • Poseen un gen de resistencia a antibioticos • Poseen un polylinker con multiples sitios de restricción

  16. Plasmidos

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