Place du laboratoire dans la prise en charge des patients atteints de fièvre hémorragiques virale

1. Place du laboratoire dans la prise en charge des patients atteints de fièvre hémorragiques virale MC Hernandez eric HIA Bégin, service de biologie

2. Introduction • Fièvre hémorragique virale • toujours le samedi soir • si possible après 20 h 00 • chez un malade grave • et bien sur « urgent » Mais que veux donc le clinicien ? mais que peut faire le laboratoire ?

3. Objectifs de ce cours • Présenter les agents des FHV et leur résistance • Les prélèvements à réaliser • Modalités de transport • CAT au laboratoire pour le diagnostic et la prise en charge du patient • Méthodes de diagnostic utilisables

4. Généralités • Virus à ARN • Enveloppés, fragiles dans le milieu extérieur • Syndrome commun • hémorragies externes • hémorragies internes • état de choc

5. Genre Fièvre hémorragique Famille Virus Flaviviridae Amaril Fièvre Jaune Flavivirus Dengue Dengues Omsk Fièvre hémorragique d’Omsk Kyasanur M. forêt de Kyasanur Bunyaviridae Phlebovirus Rift Valley Fièvr e de la Vallée du Rift (FVR) Nairovirus Crimée - Congo Fiévre Hémorragique de Crimée - Congo (CHF - C) Hantavirus Hantaan (FHSR) Puumala Arenaviridae Arénavirus Junin Fièvre Hémorragique d’Argentine Machupo FH de Bolivie Guanarito FH du Venezuela Sabia Fièvre de Lassa Lassa Filoviridae Filovirus Marburg Maladie de Marburg Ebola Maladie à virus Ebola

6. Transmission nosocomiale • Aérosols • Contacts étroits avec un malade • Fluides biologiques • urines • sang • Matériel souillé

7. Désinfection • Virus fragiles dans le milieu extérieur • Sensibles aux désinfectants • eau de Javel 3,6° Cl déchets, déjections, produits biologiques • eau de javel 0,5° Cl mains nues, peau, petit matériel • virucidie obtenue si > 0,15°Cl Nota : (1° = 10000 ppm = 1 mg/L)

8. Désinfection (2) • Matériel à usage unique • containers étanches, double emballage • eau de javel 3° Cl (1% de chlore actif) ou éventuellement autoclavage avant incinération. • Matériel réutilisable • matériel réutilisable ---> peroxyde d’hydrogène, glutaraldéhyde eau de javel ou stérilisation par autoclavage

9. Prélèvements • Diagnostic virologique • Examens de prise en charge du patients

10. Diagnostic virologique • Prélèvements sanguins ++ • 2 tubes héparinés (anticoagulant) Cultures, recherche des antigènes, RT-PCR • 2 tubes secs RT-PCR, sérologie • Tissus (patients décédés) foie, rate, cœur, poumons, rein ---> tous virus FHV peau --> Ebola

11. Examens de prise en charge • Limiter les analyses au strict nécessaire précautions de transport / pas de centrifugation • NFS - plaquettes sur automate (bouchon fermé) • hémostase (tube décanté, bouchon fermé, sur automate • frottis pour recherche de paludisme (sous hotte) • sérologies (sérum inactivé) • transaminases, créatinine (sérum inactivé) • bactériologie : hémocultures, LCR • Assurer • protection du personnel (vêtements, masque, hotte….) • traçabilité / élimination des déchets

12. Prélèvement • Protection physique • tenue Tyvek • masque FFP3 • surblouse, • lunettes, • gants • Utilisation de matériel de sécurité • Application des précautions standard

13. Etiquetage et renseignements cliniques • Etiquetage • nom, prénom, date naisance, lieu naissance, • type prélèvement, • date, heure, • nom du préleveur • Renseignements cliniques: indispensables

14. Levée de l ’isolement Prise en charge efficace Diagnostic précoce Prélèvements de bonne qualité Importance des prélèvements

15. Primaire Secondaire Transport au laboratoire (1) Documents Tertiaire

16. Transport au laboratoire (2)

17. Envoi au LSB4 (1) 2 tubes secs 2 tubes héparinés triple emballage Transport + 4° C Envoi laboratoire P4

18. Envoi au LSB4 (2) • Prise de contact avec le centre de référence • CR des FHV (Hambourg), Laboratoire P4 Biomérieux (Lyon) • Triple emballage agréé (ministère transport) • Etiquetage conforme • Document de bord • document de transport ou déclaration permanente • document identifiant les marchandises et la quantité • consignes en cas d’accident conservées dans la cabine, lues et comprises. • Réserve au laboratoire: 1 tube sec + tube hépariné • Conservation - 20°C

19. Obligations du transporteur • Véhicules fermés ou couverts • Matériel de transport et équipement - moyens d’extinction incendie - cale, deux signaux d’avertissement, baudrier ou vêtement fluorescent, lampe de poche. • Prescriptions générales pour les conducteurs • formation aux prescriptions régissant ce type de transport • verrouillage du compartiment chargé • transport de voyageurs interdit • utilisation des moyens d’extinction incendie Délai minimal de transport et rendu des résultats 24 -36 heures

20. Traitement des examens de prise en charge au laboratoire • Objectifs • garantir la sécurité du personnel • Servir le malade • assurer la traçabilité des actions pour • prise en charge • diagnostic • traitement

21. Au laboratoire déconditionnement sous hotte • Sérologie biochimie: • Inactivation du sérum sous hotte • Triton 2% + Tributyril phosphate 2%, (45°C pendant 1 heure) • ---> sérologies • Test unitaire VIH • MNI test • ---> transaminases • ---> créatinine Tube EDTA (passer tube eau javel) - NFS Plaquettes - frottis sanguin sous hotte fixation alcool Recherche paludisme - test rapide • Tube citraté décanté: • Groupe sanguin • distribution en microplaque fermée, • désinfectée sous hotte

22. Examens automatisés • Priorité +++ • automates fermés • tube primaires • désinfection • neutralisation des déchets

23. Tests rapides

24. Examens sur sérum inactivé • Toutes les sérologies sont possibles • La coagulation n’est pas fiable sauf PDF, Fibrinogène et D-Dimères

25. PCR avec extraction automatique en laboratoire LSB3

26. Conclusion • Prise en charge complexe • Nécessité d’un minimum d ’examens biologiques dans l’intérêt du patient • Les virus ne « sautent pas » Faut-il attendre 24 -36 h pour faire un diagnostic de paludisme ?