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Analisi isto-patologica dei linfonodi sentinella (LNS) di carcinoma mammario

LIMITI TECNICI NEL CONFRONTO FRA SEZIONAMENTO MULTI-STEP, IMMUNOCITOCHIMICA E RT-PCR NELL'ANALISI DEI LINFONODI SENTINELLA DI CARCINOMA DELLA MAMMELLA. UNO STUDIO CONDOTTO SU TESSUTI FISSATI IN METHACARN.

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Analisi isto-patologica dei linfonodi sentinella (LNS) di carcinoma mammario

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Presentation Transcript

  1. LIMITI TECNICI NEL CONFRONTO FRA SEZIONAMENTO MULTI-STEP, IMMUNOCITOCHIMICA E RT-PCR NELL'ANALISI DEI LINFONODI SENTINELLA DI CARCINOMA DELLA MAMMELLA. UNO STUDIO CONDOTTO SU TESSUTI FISSATI IN METHACARN. Lorenzo Daniele, Laura Annaratone, Elena Allia, Sara Mariani, Enrico Armando, Martino Bosco, Luigia Macrì, Paola Cassoni,Giuseppe D’Armento, Gianni Bussolati, Gabor Cserni and Anna Sapino

  2. Analisi isto-patologica dei linfonodi sentinella (LNS) di carcinoma mammario PROCEDURE “RACCOMANDATE”: i- valutazione istologica multi-livello ii- analisi immunocitochimica (IHC) PROCEDURE “ALTERNATIVE”: iii- RT-PCR

  3. ….tuttavia, studi generalmente effettuati su: metà LNS (fissato in formalina e incluso in paraffina) metà LNS (tessuto fresco o congelato) Colorazione con ematossilina ed eosina (EE) e IHC RT-PCR ….IMPOSSIBILE CONFRONTO DIRETTO DEI RISULTATI

  4. Fissativi alternativi alla formalina: METHACARN • 60% METHANOL • 30% CHLOROFORM • 10% ACETIC ACID

  5. NEL NOSTRO STUDIO utilizzando una casistica di LNS fissati in Methacarn messo a punto un protocollo di sezionamento a step successivi (“multi-step sectioning”) a intervalli di 100 micron confronto diretto di EE, IHC e RT-PCR sulle stesse sezioni di LNS

  6. Materiali e metodi • 74 LNS fissati in Methacarn • Sezionamento “multi-step” • Prime due sezioni consecutive di ciascun livello (spessore 4 µm): EE e IHC (AE1/AE3) • Sei sezioni (spessore 7 µm), livelli 4-5: RT-PCR (Mammaglobin, CK19 e CEA)

  7. Risultati • RNA estratto con successo in 69/74 LNS • EE/IHC: • 7 macrometastasi, 2 micrometastasi e 7 cellule tumorali isolate • RT-PCR: • i- positiva per CEA/CK19/mammaglobin in 6/7 macrometastasi e in 1/2 micrometastasi • ii- positiva per CEA e/o CK19 in 3/7 cellule tumorali isolate e in 23 casi negativi per EE/IHC • iii- Nei 2 casi negativi per RT-PCR presenza di metastasi riscontrata in sezioni situate distalmente rispetto a quelle analizzate con RT-PCR

  8. mRNA per CK19, CEA e Mammaglobin non rilevato nelle sezioni dei livelli da 4 a 5 mRNA per CK19, CEA e Mammaglobin rilevatonelle sezioni dei livelli da 17 a 20

  9. Discussione e Conclusioni • Analisi istopatologica, IHC e RT-PCR: indagini non paragonabili se eseguite su porzioni differenti del linfonodo sentinella • discrepanze fra indagine molecolare e analisi morfologica • Studi prospettici con analisi quantitativa dell’RNA potranno chiarire l’utilità dell’analisi molecolare effettuata su linfonodi sentinella Da Daniele et al. Journal of cellular and molecular medicine, 2008

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