Electroforesis en gel de ADN Tema 4.4.2 y 4.4.3.

1. Electroforesis en gel de ADNTema 4.4.2 y 4.4.3.

2. ¿Qué es la electroforesis? La electroforesis en gel es una técnica sencilla empleada de forma rutinaria en laboratorios para separar moléculas biológicas especialmente ADN, ARN y proteínas.

3. Procedimiento: La electroforesis en gel permite separar ácidos nucleicos o proteínas a lo largo de un campo eléctrico, en función de su tamaño y de su carga eléctrica. Las moléculas de ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa. Si ponemos fragmentos del ADN extraído de una muestra biológica sobre un soporte poroso (gel) y aplicamos un campo eléctrico, se producirá la migración diferencial de los fragmentos a través de los poros de la matriz.

4. La tinción del gel con bromuro de etidio, que es una sustancia fluorescente que se intercala en la molécula de ADN, y la exposición con luz ultravioleta, permite observar el resultado de ésta migración. El tamaño de los fragmentos de ADN se puede estimar comparándolos con una escala patrón de bandas.

5. Utilidad: La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes muestras biológicas. Así por ejemplo se puede usar para: • comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo • la investigación forense al momento de identificar sospechosos en escenas de crimen • para realizar exámenes de paternidad.

6. Resumen: ELECTROFORESIS • Se separan las proteínas o los ácidos nucleicos en un gel de electroforesis, con los ácidos nucleicos se utiliza un gel de agarosa. • Muestra de ADN fragmentado se coloca en uno de los pozos en el gel. • Una corriente eléctrica pasa a través del gel. • Fragmento de separación se basa en la carga y tamaño. • Fragmentos grandes se mueven lentamente. • Fragmentos negativos se mueven hacia la derecha.

7. Imagen microscópica de los fragmentos de ADN luego de ser teñidos

8. Esquema del proceso de electroforesis en gel

9. Video • http://www.medmol.es/tecnicas/68/ • http://www.youtube.com/watch?v=eauONOJ3F00&NR=1