1 / 28

Imunoloģiskās metodes

Imunoloģiskās metodes. 1.) Imun(histo/cito)ķīmija 2.) ELISA 3.) Plūsmas citometrija 4.) Western blot 5.) Radioimunitātes testi 6.)Imunoprecipitācija. Kas ir ideālā metode? 1.) “High throughput” augstas efektivitātes

ivana
Download Presentation

Imunoloģiskās metodes

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Imunoloģiskās metodes 1.) Imun(histo/cito)ķīmija 2.) ELISA 3.) Plūsmas citometrija 4.) Western blot 5.) Radioimunitātes testi 6.)Imunoprecipitācija

  2. Kas ir ideālā metode? 1.) “High throughput” augstas efektivitātes 2.) Dotu priekšstatu par fosforilācijas stāvokli un informācijas apstrādi šūnās • Ļautu paralēli noteikt šūnu fenotipu (virsmas marķieri) • Būtu iespējama vienas šūnas līmeni • Kvalitatīva vs kvantitatīva

  3. Imūncitoķīmija • Kvalitatīvā/kvantitatīvā metode Kritiskie aspekti: - antivielu izvēle (monoklonālās/poliklonālās; primārās, sekundārās) - fiksācijas metode - mikroskopa uzstādījumi un komplektācija

  4. Kodols – Dapi Aktīns – Phallodin+Alexa 488 Mitohondriji – Mitotracker CMXRos

  5. Dapi

  6. Phallodin Amanita Phalloides Attēli no Bruce Alberts Molecular Biology of the Cell.

  7. Mitotracker CMXros Attēls no microscopyu.com

  8. Attēls no vectorlabs.co.uk

  9. Pielietojums diagnostikā • HER2 daudzuma noteikšana – krūts vēža diagnostika • Trastuzumab • Pertuzumab

  10. PubMed:22979 results for “Mesenchymal Stem Cells”15153 results for “Mesenchymal Stromal Cells” Transplantation. 1968 Mar;6(2):230-47. Analysis of precursor cells for osteogenic and hematopoietic tissues.

  11. MSC characterisation Riekstina et al. 2009.

  12. Elisa • Netiešā • “Sandwich” ELISA

  13. 1000 pg/ml 500 pg/ml 250 pg/ml 0 pg/ml

  14. Multiplex No millipore.com

  15. Ranganath et al. 2012

  16. HIV tests – viens no pirmajiem ELISA testiem

  17. Plūsmas citometrija

  18. Plūsmas citometrija

  19. Virsmas marķieru analīze

  20. Šūnas cikls

  21. Sortēšana

  22. Mitohondriju analīze Scenāriju tipi: - Hroniskā iedarbība non-quenching metode - Akūtie efekti (real-time) quenching/non-quenching Angelo et al. 2008. Izdalīti mitohondriji/ intracelulāri Eksistē dažādas mitohondriju iezīmes - masas noteikšanai Mitotracker Green - potenciāla noteikšanai Mitotracker CMX ros, Rhodamine, DIOC, JC-1

  23. Vielu citotoksisko efektu pētījumi – mitohondriju iezīmēšana Kardiomiocīti Rapamicīns mazina rotenona izsaukto mitohondriju disfunkciju. Ar sarkano –MT CMXRos, kodoli iekrāsoti ar Dapi Nediferencējušās ECŠ Pan T et al. Rapamycin protects against rotenone-induced apoptosis through autophagy induction. Neuroscience. 2009 Dec 1;164(2):541-51 Hattori F et al., Nongenetic method for purifying stem cell–derived cardiomyocytesNature Methods 7, 61 - 66 (2010)

  24. EPT Ca++ HIV TAT ir paaugstinājis Δψm? ↓pH ↑pH Mitohondrija matrikss Kā kontroles tika izmantoti oligomicīns un FCCP Perry et al. 2011

  25. Ierobežojumi ?

  26. FC + atomic mass spectrometry = Mass Cytometry

  27. SPADE analīze

More Related