APLICACIONES CLÍNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS

1. APLICACIONES CLÍNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS Mª Jesús Maza Castillo Residente 1º Análisis Clínicos Hospital Universitario de Guadalajara 25 Abril 2007

2. 1.Detección de Helicobacter pylori • 2.Evaluación de la función pancreática exocrina

3. DETECCIÓN DE Helicobacter pylori • ¿QUÉ ES? • Bacilo gram negativo que se encuentra en la mucosa gástrica asociado a distintas enfermedades digestivas

4. CARACTERISTICAS • MÓVIL • FORMA ESPIRAL • UREASA POSITIVA • -Catalasa y oxidasa positivo • -Vive en mucosa gástrica antral • -Libre en mucus, en la superfície de las células epiteliales o en el intersticio celular • NO es invasivo • NO se ha aislado en hemocultivos

5. 2. HISTORIA Robin Warren y Barry Marshall -1982 – Demuestran que la principal causa de la úlcera péptica y gástrica es Helicobacter pylori -2005- Premio Nobel. “ La bacteria que destronó al estrés”

6. 3. EL POR QUÉ SE SU IMPORTANCIA PATOLOGÍA DOS RAZONES TRATAMIENTO “Las infecciones por H.pylori afectan aproximadamente a la mitad de la población mundial”

7. Helicobacter pylori Gastritis central superficial Vasculares Autoinmune Dermatológicas Encefalopatias Diabaetes mellitus Infiltrado inflamatorio Extradigestivas PMN prominentes MALT Gastritis atrófica autoinmune (tipo A) Gastritis central difusa Gastritis atrófica multifocal (tipo B) Linfoma Ulcera duodenal Cáncer difuso Úlcera gástrica Cáncer intestinal RR=3.8

8. MECANISMOS POR LOS CUALES H. Pylori LESIONA LA MUCOSA GÁSTRICA Lipopolisacárido Sustancias externas Ureasa Urea+ H2O CO2 + 2NH4+ Actividad citotóxica Daña la microcirculación Induce apoptosis Endotoxina

9. 4. DIAGNÓSTICO INVASIVOS NO INVASIVOS • CULTIVO • HISTOLOGÍA • TÉC.MOLECULARES • (PCR) • TÉC.MOLECULARES.( Jugo pancreático, saliva o heces) • ANTÍGENO EN HECES DIRECTOS • -PRUEBA DEL ALIENTO • (con urea *C13) • SEROLOGÍA -UREASA RÁPIDA INDIRECTOS

10. SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD S(%) E(%) UREASA RÁPIDA 97 94.1 HISTOLOGÍA 98.2100 77.4 100 CULTIVO 95.5 93.5 TEST DE ALIENTO 91 50 SEROLOGÍA- ELISA 89.5 77.8 ANTÍGENOS EN HECES

11. PRUEBA DEL ALIENTO. “DETERMINACIÓN DE 13CO2 EN EL ALIENTO” “Prueba estándar entre las pruebas diagnósticas no invasivas de infección por Helicobacter pylori”

12. Test de la urea marcada O O UREASA UREASA *CO2+ 2NH4+ NH2 NH2 NH2 *C

13. 1.PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACIÓN DEL TEST Sobre de ácido cítrico Comprimido de urea (*C) 2 tapones verde (basal) Tubos de recogida de muestra 2 tapones blanco (post)

14. 1.Muestra Basal 10 MIN 200ml AGUA + AC.CÍTRICO 2 tubos 2.Muestra Posterior + 125 ml AGUA + UREA (Comprimido) 2 tubos 30 MIN

15. 2.ANÁLISIS DE LA MUESTRA • Los valores corresponden a la relacción 13CO2/CO2 en el aire espirado y el resultado se expresa como “enriquecimiento isotópico”  (13CO2/CO2)m - (13CO2/CO2)c d = ---------------------------------------- x 1000 o/oo (13CO2/CO2)c 2. δPost 1. δBasal o/oo o/oo d Post Basal d o/oo o0/oo

16. RESULTADOS Si < 5 Negativo d o/oo Si d > 5 Positivo o/oo Paciente 1 1. Basal -23.74 d 1.27 < 5 o/oo Negativo 2. Post -22.47 d o/oo Paciente 2. 1. Basal -22.39 91.67 > 5 Positivo 2. Post 69.28

17. Falsos negativos • -Realización de la prueba antes de 4 semanas de finalizar el tratamiento erradicador • Tratamiento con inhibidores de la bomba de protones o sales de Bismuto en el momento de la prueba o dias previos • Vaciamiento gátrico rápido • Realización de la prueba en las 4 h después de la endoscopia Falsos positivos • Producción de ureasa por otros bacterias en pacientes aclohídricos.(gastritis crónica atrófica) • Recoger las muestras antes de tiempo. • Recoger las muestras demasiado tarde. Elevación por la acción hidrolítica sobre la urea de la flora bacteriana.

18. EVALUACIÓN DE LA FUNCIÓN PANCREÁTICA EXOCRINA Fisiología del páncreas 1. Endocrino PÁNCREAS - Porción enzimática - Porción acuosa 2. Exocrino Digestión de carbohidratros, proteínas, lípidos conversión en moléculas absorbibles

19. Pancreatitis crónica - Proceso inflamatorio progresivo e irreversible caracterizado por la fibrosis de la glándula con destrucción del parénquima exocrino en la primera fase y en una segunda fase del parénquima endocrino • Malabsorsión por afectación del páncreas exocrino, (esteatorrea, creatorrea), y en fases avanzadas , diabetes mellitus

20. 1.Clasificación: ( Marseille –Rome) 1. Pancreatitis Crónica calcificante 2. Pancreatitis crónica obstructiva Obstrucción del conducto pancreático principal 3.Pancreatits inflamatoria Fibrosis densa e infiltrado inflamatorio mononuclear Alcohol

21. 3. Sintomatología: • Dolor crónico (80%):Dolor continuo abdominal de intensidad moderada. • Diarrea y pérdida de peso:Inadecuada digestión de los alimentos y la imposibilidad del organismo para asimilarlos. • Desnutricion progresiva

22. 4. Diagnóstico: -Pruebas de imagen: Radriografía, Ecografía, Ultrasonidos,... -Pruebas de función pancreática exocrina. • Métodos con intubación duodenal: Jugo pancreático • Métodos sin intubación duodenal: • - Niveles de enzimas en suero • - CUANTIFICACIÓN DE LA GRASA FECAL(VAN DE KAMER) ( ↑ S y E) • - Cuantificación de quimiotripsina fecal • - Cuantificación de elastasa fecal • - Prueba del pancreolauril • - Prueba de bentiromina • - TEST DE TRIGLICÉRIDOS MIXTOS.TEST DE ALIENTO

23. APLICACIONES CLÍNICAS • Detectar decrementos en la actividad de la lipasa intraduodenal. • Seguimiento de la evolución de la enfermedad pancreática ( este test es más sensible que el estudio de esteatorrea, ya que esta no se produce hasta que la producción de lipasa es menor del 10%. • Monitorización del efecto del tratamiento

24. Test de Triglicéridos-Mixtos Fundamento: • Se basa en marcar con 13C distintos sustratos que requieren la participación de enzimas pancreáticas para su escisión y absorción. • Los niveles de 13CO2 en aire espirado nos permitirán valorar la actividad enzimática del páncreas.

25. REPRESENTACIÓN DEL TEST DE ALIENTO CON TG MIXTOS MARCADOS 1,3 diesteraril-2-13C-carboxil-octanoil glicerol GLICEROL GLICEROL C20 C20 13C8 13C8 C20 C20 Absorción intestinal GLICEROL Lipasa pancreática + 13C8 13CO2 Oxidación hepática Respiración

26. Test de Triglicéridos-Mixtos 50 tubos: 2 basales + 48 posteriores • COMIDA DE PRUEBA (13C-Triglicéridos Mixtos) • Ingredientes • Mantequilla (20 gramos) • Biscottes (15 gramos) • Agua (200 mL) • Modo de preparación • Untar la mantequilla en ambos biscottes • Añadir los 250 mg de 13C-Triglicéridos en la mantequilla

27. PROTOCOLO DEL TEST DEL ALIENTO 1. + 2 tubos BASALES 10mg METOCLOPRAMIDA 10 min 2. 48 tubos POSTERIORES CADA 15 MINUTOS COMIDA DE PRUEBA: Biscotes, mantequilla, 13C-TG mixtos DURACIÓN: 6HORAS

28. ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS • Los valores corresponden a la relacción 13CO2/CO2 en el aire espirado y el resultado se expresa como “enriquecimiento isotópico”  d (13CO2/CO2)m - (13CO2/CO2)c o/oo = ---------------------------------------- x 1000 (13CO2/CO2)c Resultados: % de 13C-recovery/h y valores acumulados durante 6 h. Se calcula utilizando un programa matemático que calcula el porcentaje de sustracto recuperado como 13CO2

29. NEGATIVO NEGATIVO

30. POSITIVO

31. POSITIVO TRAS TTO CON KREÓN

32. “ BUENA ALTERNATIVA A LAS TÉCNICAS TRADICIONALES” VENTAJAS PACIENTE INVESTIGADOR • - No invasivo • Recogida de muestra • sencilla • No radioactivo (13C) • Fácil conservación • Manejo • Análisis de las muestras • Realización del test en mujeres fértiles, embarazadas, niños y ancianos • No instalaciones especiales: Espectrometria de masas (13CO2)

33. FALSOS POSITIVOS: • Vaciamiento gástrico retrasado • Daño extenso de la mucosa intestinal (celíacos, enfermedad de Crohn) • Tiempo de contacto corto entre la comida de prueba y las secreciones pancreato-biliares (pacientes gastrectomizados) • Diabetes y enfermedad hepática severa • FALSOS NEGATIVOS: • Enfermedad pancreática moderada

34. Este test es capaz de detectar disfunción pancreática incluso en ausencia de esteatorrea, así como de diferenciar si la esteatorrea está asociada o no a enfermedad pancreática • (La esteatorrea se produce si la lipasa cae por debajo de 40KU/h. )