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ACL 9000 을 이용한 혈액응고검사 - PT, APTT -. 박유진. 혈액응고의 기전. 1. 내인계 응고경로 - 혈관벽의 손상에 의해 출혈이 있을 때 혈액중의 응고인자만이 관여하여 작동하는 구조이며 반응이 늦다 . - 혈액자체에서 시작 2. 외인계 응고경로 - 손상을 입은 혈관의 혈액중에 조직액이 혼입되어 작동하는 응고구조를 말하며 반응은 빠르다 . - 혈관벽이나 주위조직의 손상으로 시작 . 혈액응고의 기전. 3. 공통응고경로
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혈액응고의 기전 1. 내인계 응고경로 - 혈관벽의 손상에 의해 출혈이 있을 때 혈액중의 응고인자만이 관여하여 작동하는 구조이며 반응이 늦다. - 혈액자체에서 시작 2. 외인계 응고경로 - 손상을 입은 혈관의 혈액중에 조직액이 혼입되어 작동하는 응고구조를 말하며 반응은 빠르다. - 혈관벽이나 주위조직의 손상으로 시작
혈액응고의 기전 3. 공통응고경로 - 내인성 및 외인성 인자의 공통 협동작용 - 외적 경로로는 조직 thromboplastin이 활성을 시작하는 반면, 내적 경로에는 제12인자와 혈관에 있는 콜라겐과 함께 혈소판이 외적 경로를 시작한다 . - 내적 경로에서는 제8인자를 활성화하고 혈소판에 직접적으로 작용하 전혈액 응고물질을 포함하는 과립을 유리시킨다. 외적 경로의 시작이 내적 경로를 활성화하여 혈액을 응고시킨다.
Prothrombin time(PT) • 외인성 응고 계 (Ⅱ,Ⅴ,Ⅶ,Ⅹ)의 응고 활성을 종합적으로 검사하는 방법이다. • 프로트롬빈시간은 혈액 내 프로트롬빈의 전체 량을 나타내는 검사법이다. • 이 검사는 간 기능에 이상이 있는 경우 연장되기 때문에 간 기능이상을 스크린 하는데 종종 이용된다. 헤파린을 투여하는 환자에서 혈액응고 정도를 조절하는데 이용되는 중요한 검사법이다.
PT 가 연장되는 경우 • 제Ⅱ,Ⅴ,Ⅶ,Ⅹ 인자 및 제1인자 (fibrinogen) 중 한가지 또는 두 가지 이상의 양적,질적 이상이 있으면 연장된다. • 섬유소용해(DIC) • 순환항응혈소의 존재 • 혈액투석 등을 위해 heparin을 투여 받은 환자는 투여 후 3시간까지는 연장된다.
PT시간이 단축되는 경우 • 급성혈전성 정맥염 • Ether 마취 후 • 다발성 골수증 정상치 정상은 10.0 ~ 13.5초이다.
Activated partial thromboplastin time(APTT) • APTT 검사는 내인성 응고계인자의 결핍 유무를 종합적으로 screening 하는 검사이다. 이 검사에 사용되는 부분 thromboplastin은 제 5, 8, 9, 10, 11 12 인자의 작용을 하는 성분들을 포함하고 있지 않기 때문에 이런 응고인자들이 결핍된 혈청은 응고를 시키지 않는다. • partial thromboplastin은 혈소판 제3인자(PF3)와 유사한 활성화 작용을 가진 인지질 분획이다.
APTT가 연장되는 경우 • 혈우병A 또는 B에서는 모두 APTT 연장을 나타낸다. • 드물지만 APTT의 연장을 보이는 경우는 제Ⅺ인자,제Ⅻ인자,Fletcher 인자,Fitzgerald인자의 결핍 때도 있다. 3. 제Ⅰ,Ⅱ,Ⅴ,Ⅹ인자는 심한 인자의 결핍일 때 연장된다.
4. 후천적으로는 심한 간 장애, 소모성응고장애, 섬유소항진 등에 의해 복합적으로 각 인자가 감소하거나 순환 항응혈소의 증가에 의해서도 연장을 나타낸다.
5.- Prothrombin 이나 Fibrinogen에 결핍이 있으면 응혈 1단계에서는 이상이 없어도 aPTT가 연장될 수 있다. - 이런 이유로 Prothrombin시간(PT) 검사 를 동시에 측정하여 PT는 정상인데 aPTT가 길어진 경우 내적 응고기전의 이상으로 판정한다. - 즉 제 8, 9, 11, 12 인자의 결핍을 의심한다. 반대로 PT는 연장되어 있는데 aPTT는 정상이면 제 7 응고인자의 결핍 으로 진단한다. - 헤파린을 투여하는 경우 aPTT가 연장된다.
APTT가 감소되는 경우 Von Willebrand병에서는 제Ⅷ인자는 약간 감소하지만 APTT는 정상으로 나오기도 한다. 정상범위 -정상은 대체로 26 ~ 43초이다. -정상 대조와 비교해서 5초 이내는 정상, 10초 이상이 연장되면 비정상으로 본다.
ACL 9000 , 측정방법 - ACL9000은 전자동 혈액응고 분석기 모델로,Coagulation측정에서의 Reference Technology로 인식되어져 있다. - 측정방법은 660nm 파장의 LED 광원을 이용하여 응고괴에서 산란되는 빛을 90도 각도에서 측정한다. 비색법을 사용하는 Chromogenic Assay에서는 405nm파장을 이용하여 180도 각도에서 측정한다.
ACL 9000의 분석 방법 - 분석방법은 Robotic Sampling Arm Needle 에 의하여 독립적으로 혈장과 시약이 반응 큐벳인 Rotor에 분주된다. - 예가온 과정을 거친 후, 1.200RPM으로 회전 하여 혈장과 시약을 완전히 혼합하여준다. 이 과정에서 각 큐벳의 산란 광을 분당1,100번 reading 하여 결과를 산출한다.
ACL 9000 ; Throughput • PT/Fib-PT-Based/APTT항목 – 60 Test/Hour • PT/Fib-PTb/APTT/AT, 혹은 • PT/Fib-PTb/APTT/TT - 40 Test/Hour • PT-Fibrinogen – 175 Test/Hour • APTT - 110 Test/Hour
ACL 9000 사용상 주의사항 1.Data가 갑자기 낮게(10이하로) 측정되었을 경우 -시약이 떨어졌을 때 -sample 을 aspiration 하지 못했을 경우 - probe가 막혔을 경우 2.Extend mode - PT 결과가 1분(60초)이상,APTT는 2분 이상(120초)으로 측정 되었을 경우 - PT,APTT 결과입력 시 장비에서는 Error6, Error7로 측정되어지면서 LIS에서는 >120로 자동 입력된다. - 요즘 응급 ACL9000 에서는 PT > 60 , APTT > 120 over 되는 검체를 재검 하게 되면 Normal range 안에 드는 경우가 상당히 많은 편이다. < 약 10건 중 7-8건 정도 >
부적합 검체에 대한 검사결과 1일 방치한 검체에 대한 검사결과
결 과 1일 방치 : PT 결과 차이 없음 APTT 평균 2.15 상승 2일 방치 : PT 평균 2.23 상승 APTT 평균 5.39 상승 3일 방치 : PT 평균 3.52 상승 APTT 평균 11.58 상승 * 검체 방치 시간이 지남에 따라 결과값이 높아지는 것을 알 수 있다
결 과2 용혈 검체의 PT와 APTT의 값은 비용혈 검체의 값과 큰 차이를 보이지 않음을 위 표로 알 수 있다.
혈액응고인자의 국제명과 그 동의어 • Ⅰ: Fibrinogen • Ⅱ: Prothrombin • Ⅲ: Tissue factor, thromboplastin • Ⅳ: Calcium ions • Ⅴ: Proaccelerin, lable factor • Ⅶ: Proconvertin, stable factor • Ⅷ: Antihemophilic A factor [AHF], antihimphilic globulin [AHG]
혈액응고인자의 국제명과 그 동의어 • Ⅸ: Antihemophilic B factor [AHB], plasma thromboplastin component [PTC] • Ⅹ: Stuart factor, Stuart-Power factor • Ⅺ: Plasma thromboplastin antecedent [PTA] • Ⅻ: Hageman factor, contact factor • ⅩⅢ: Fibrin stabilizing factor • Prekallikrein : Fletcher factor • High molecular : Fitzgerald factor….
