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Les nouveaux outils pour maitriser la mise en bouteille stérile. Vin avec une forte population levurienne. Risque de « relargage » Pollution du matériel. Filtration = réduction proportionnelle de la charge. La filtration de mise.
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Les nouveaux outils pour maitriser la mise en bouteille stérile
Vin avec une forte population levurienne Risque de « relargage » Pollution du matériel Filtration = réduction proportionnelle de la charge
La filtration de mise Mise en bouteille stérile = levures/bouteille <10 (voir <1)
Vin avec une forte population levurienne • Analyses de la population levurienne par cytométrie de flux • Analyse du SO2 moléculaire, libre et total Filtration = réduction proportionnelle de la charge • Adaptation du traitement de mise • Adaptation du type de filtration à la population levurienne Risque de « relargage » Pollution du matériel = Maîtrise des risques 1 vin contaminé peu mettre en cause tout le travail d’une journée • Suivi microbiologique de la mise en bouteille Augmentation des risques de contamination du matériel = garantie de qualité de la mise en bouteille stérile
La cytométrie de flux • Quoi ? • Pourquoi ? • Comment ?
La cytométrie : quoi ? 19682008 Partec: l’innovation en marchedepuis 40 ans Principes des appareils de Cytométrie en Flux Pascal Brunou, David Bastien Partec France
Domaines d’applications (2) • Agrosciences: • Recherche vétérinaire • Aquaculture • Biologie végétale • Sélection variétale • Applications Industrielles: • Agroalimentaire (jus de fruit, bière…) • Produits cosmetiques • Pharmaceutique • Industrie du papier
Analogie entre microscopie et cytométrie de fluorescence Echantillon fixe sur lame au microscope Echantillon liquide focalisé sous l’objectif et le trajet optique du cytomètre Cytométrie: = « mesure des cellules »
LASER PMT 1 PMT 2 Système fluidique - Focalisation hydrodynamique Cellule de mesure = cœur du système
Excitation par un laser des particules injectées Laser Source d’excitation lumineuse ultra-performante type laser pour une excitation et analyse des signaux d’émission en quelques microsecondes Forward Scatter (FSC) Side Scatter (SSC) + Fluorescence
Différentes approches pour le marquage des cellules Sondes intra-cytoplasmiques Anticorps Sondes ADN Marqueurs de surface - organites cellulaires
Configuration simple ou multi-couleurs Système Mono-paramétrique Système Multi-paramétrique source d’excitation simple / sources multiples
La cytométrie : quoi ? Représentation des résultats en 3 dimensions : * taille-structure (FSC) / activité fermentaire de la levure (Fluorescence) * Densité de population = couleur - taille-structure (FSC) - population - Activité levurienne (fluorescence) - population
10X 100X 1000X
Caractéristiques de la méthode • Gamme de mesure : 100 à 500.000 levures/ml (sans dilution) • Limite de détection : 100 à 1000 levures/ml • Répétabilité : <10% de la mesure • Bonne corrélation entre l’activité fermentaire de la levure et l’intensité de la fluorescence mesurée
La cytométrie de flux, un outil qui : • Permet un comptage rapide et précis • Permet de connaître la viabilité et l’activité fermentaire • Apporte une solution efficace pour la maitrise des mises en bouteille stériles