330 likes | 480 Views
Haemopoetikus sejt alapú haematologiai immuntherapia. Prof. Dr. Udvardy Miklós. tanszékvezető egyetemi tanár, Belgyógyászati Intézet igazgatója. DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika Hematológiai Tanszék, Debrecen. Onko-haematologia aranykorszak.
E N D
Haemopoetikus sejt alapú haematologiai immuntherapia Prof. Dr. Udvardy Miklós tanszékvezető egyetemi tanár, Belgyógyászati Intézet igazgatója DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika Hematológiai Tanszék, Debrecen
Onko-haematologia aranykorszak • Célzott therapia: monoklonális antitestek, jelátvitel gátlók (pl. imatinib), ATRA, proteaszóma gátlás sok kórkép megoldás felé halad • Vannak nehéz helyzetek, pl. időskori AML, indolens lymphomák ahol nincs áttörés • Sejtes vaccinatio ekkor indokolt, a részleges remissio (nem a nagy tumortömeg) mellett
ŐSSEJTEK…. • Embryonális • blastocysta • totipotens • 2. Embryonalis • csira sejt • pluripotens • 3. Köldökzsinór • pluripotens • 4. Felnőtt őssejt • multipotens • (5. Embryonális • cc. őssejt)
Haemopoetikus őssejt • Multipotens szomatikus őssejt, tipusai: 1. CD133+, CD34-: pluripotensebb, long-term HSC (haemopoesis, máj?, izom?, angiogenesis?, neuron?) 2.CD34+, CD133+: HSC és haemangioblast • 3. CD34+, CD133-, zöm, short term HSC • Adheziv fehérjék (VLA -4-5) • Cytokin receptorok (c-kit, flt-3)
Haemopetikus őssejttel végzett immun therapia • Allogen transplantatio utáni és graft versus host és graft versus tumor effektus • Redukált, mini-, mikro- allotransplantatio nem myeloablativ, hanem jelentős immun effektus (pl. időskori AML) • Donor lymphocyta infusio (CML, AML), további immnmodulatio (pl. Kepivance)
Aktiv immunizáció • Releváns betegség (egyéb th. nem jelent megoldást) • Legalább részleges remissio állapotában alkalmazható • Hagyományos antigen ellenanyag képzés az onkohaematologiában limitált hatékonyságu • Sejtes alapu vakcina (pl. dendritikus sejt) a jelen és jövő utja
Immunisatiós lehetőségek • A beteg tumor sejtjeinek extractuma pontatlan, részben túlhaladott, de mégis jó lehet (colorectalis, myeloma) • Több betegtől származó keverék, kultura • Idiotypus(myeloma, lymphoma) fehérje, körülményes izolálás • Molecular rescue, Peptid lymphomában a hibás gén szekvencia klónozása, amplifikációja vagy géntechnika (pl. tobamovirus nicotinia) • Más antigen, pl. CEA, 10 kD colon tumor
Beviteli utak • Monocyta eredetű dendritikus sejt döntően cellularis, erőteljes válasz másodlagos humoralis válasz változatos válasz arány (immun és klinikai) • Adjuváns (kulcslyuk csiga hemocianin, KLH) döntően humorális, jó válasz arány lymphomában is • „Naked DNA” injectio nem elég a tapasztalat • Tumor-DC fusiós technika (myeloma, kisérletes) • Géntechnologia-géntherapia (AML) • DC + KLH(Id alapu, NHL, myeloma)
Dendritikus sejt • Folliculáris dendritikus sejt nyirokcsomó – integritas vakcinációs célra invaziv • Monocyta (CD14) eredetü dendritikus sejt in vitro cytokin hatás • Bőr, Langerhans sejtek • Lymphoid prekurzor eredetü
A dendritikus sejtes vakcináció alapjai • Dendritikus sejt felveszi a tumor antigent • Intracellularis fázis • Antigen felszini expressio, döntően MHC II presentatio • A gazdaszervezetbe visszajuttatva főként CD4, de további helper/suppressor sejt aktiválás, majd humoralis válasz is • T sejt proliferatio, cytokin válasz, antigen specifikus tumor lysis • B sejt válasz
Monocyta eredetü dendritikus sejt („Cologne model”) • Teljes vér (60-80 ml) vagy Apheresis, CD14 selectio (adherentia, poz. selectio) • dendritikus sejtté alakitás In vitro cytokin inkubáció (GM-CSF, IL-4) + tumor antigen/peptid CD14 -, nincs T és B sejt marker MHC I, II (CD1+, 81+) • Aktiváció: LPS, TNF, CD40-ligand • Immunsuppressio, tolerancia is kiváltható inkubáció flt-3 (ligand) • Legalább 2-8 M sejt, iv. (is) beadható
Keyhole limpet, kulcslyuk csiga • Immunstimultor és adjuváns • „B Immunostimulator” (AIDS), NHL tanulmányok (1993) • Döntően cellularis, de CD4 és 8 is • Idegen fehérje, mellékhatások • DC és KLH (myeloma, foll. NHL) • KLH – kulcslyukcsiga hemocyanin, kb. 1000 kD nagy fehérje
Lymphoma vakcinációs tanulmányok, folliculáris NHL • Első Stanford-tanulmány: 41 beteg, CVP utáni remissio, Id-KLH vaccinatio 14 immunválasz alakult ki, a responderek tulélése 12 évvel a diagnózis után100%, több molekuláris remissio, főleg CR-ben adott vakcina esetén • Bendandi tanulmány: 20 beteg, kemoth. utáni remissio, Id-GM-CSF vakcina cellularis válasz 2/3-ban, humoralis felében a 11 responderből 8 bcl-2 negativ lett • Naked DNA Fázis III tanulmány (USA, multicentrikus), eredmények inkább előzetesek • Timmermann tanulmány, 35 folliculáris lymphoma 35 Id-DC folliculáris lymphoma (Stanford) kemotherapia után (első CR) első 10: 8 immunválasz 4 klinikai regressio további 25 Id-DC+KLH booster injectio regressio (Id DC) 22%, progressio hiánya (Id DC+KLH) 70% (43 hónap %), részben molekuláris remissio jó eredmények a CR idején végzett vakcináció
Idiotype-pulsed dendritic cell vaccination Pre-vaccine 11 months post-vaccine
100 80 60 Responders (n=14) PROBABILITY (%) p<0.0001 40 non-Responders (n=18) 20 0 0 2 4 6 8 10 TIME (YEARS) Freedom From Progression Follicular Lymphoma first remission (Timmermann tanulmány)
DC vakcináció, myeloma • Eisen, állatkisérlet, izolált Id ellenes T (CD4) sejt, regressio • Id-ellenes humoralis immunválasz th. értéke kicsi, keringő PP-re hat • Döntően Id-DC, ujabban KLH kombinációval • Id-DC alapu hatékonyságot is korlátozza a jelentős paraproteinaemia • Mégis cytolysatum?? • Uj tanulmányok: peptid alapu vakcináció, ill. Id alapu DC+KLH, van válasz (30-40%) • Autolog BMT után 3 hónappal (Stanford)
Id izolálás • Paraproteinaemia legalább 0,4 g/l • Izotípus és (al)osztály analízis • Eltérő M, A, G-1, G-2, G-4, G-3 • Affinitas chromatographia, kicsapás • 95% tisztaság • Alkalmas DC és KLH vakcina készitésre • A hatás limitje - paraproteinaemia
Figyelemreméltó kazuisztika • Maliander V et al. Leukemia, 1:165, 2004 • Egyetlen AML-es beteg esete, akinek WT-1 elleni vakcinával – monotherapiaként -komplett remissioja alakul ki
Wilms tumor antigen (1), WT-1 • Wilms tumorral összefüggésben ismerték fel először • Zinc-finger transzkripciós faktor, sejt növekedés és proliferáció szabályozása, telomerease funkciók • AML, ALL, CLL, számos nem- Hodgkin lymphoma
WT-1 RT-PCR és haematologia • AML-ben rossz prognosztikai jel, de ez vitatott • MDS-ben diagnosztikus lehet • CML-ben ugyancsak jellemző, a szint csökkenése jól jelzi a tirozinkináz gátló kezelés várható hatékonyságát • Jó MRD marker • Tumor antigen peptidszekvenciák, HLA asszociációkkal
Gvax WT-1, fázis I-II tanulmány • WT-1 peptid, a beteg saját in vitro irradiált tumor sejtjéval • 54 AML eset, parciális remissioban • 70%-ban esett a WT1 szint • Az igy válaszolók 2 éves tulélése jelentősen javult • Lényegesebb szövődmény, mellékhatás nem volt
February 2007 | 26 ! Peptide immunotherapy with a validated target: WT1 ! AML known to be immune responsive ! Activity already demonstrated with analogous products • 66% immune response; 57% durable clinical response in AML ! Short development path with indication of AML patients in first CR • 12 month PFS endpoint ! Off the shelf approach addressing most immune haplotypes • Four synthetic and natural peptides for CD8 and CD4 response ! Inexpensive to produce
Vaccine Therapy and GM-CSF in Treating Patients With Acute Myeloid Leukemia, Myelodysplastic Syndromes, Non-Small Cell Lung Cancer, or Mesothelioma This study is currently recruiting patients.
Saját eddigi WT-1 eredményeink • Peptid keverék vagy módositott peptidek előállitása indul • mRNS mérés beállitása vérből és csontvelői mintákból (WT-1 splice varánsok mérésére is alkalmas), az erőteljes expresszióval járó esetek azonositására (Biró Sándor, Human Genetika), RT-PCR (Taqman, G6PDH) • Mérések AML, MDS, CML-ben, ill. nyitás a lymphoma vonalra
A GAPDH gén expressziója egészséges (1, 2, 3)és AML betegben (4, 5, 6) Rn=normalizált fluoreszcencia szignál 6 5 3 2 4 1
6 A WT1 gén expressziója egészséges (1, 2, 3,) és AML betegben (4, 5, 6) Rn=normalizált fluoreszcencia szignál 5 4 3 2 1
DEOEC program • Klinikai Sejttherapiás központ colorectális cc DC sejtes- CEA, Fázis I., melanoma, haematologia • HAEMATOLOGIA -auto PBSCT 100 eset,, allogen 2007 II. félév? - AML, adjuváns, DC alapu WT-1, 65 év feletti esetek - haemangioblast-angiogenesis program, Fázis I, ETT 5 eset - myocardium, fázis I. ETT, 8 eset
Dendritikus sejtek Antigen presentatio, aktivált állapot