1 / 33

Haemopoetikus sejt alapú haematologiai immuntherapia

Haemopoetikus sejt alapú haematologiai immuntherapia. Prof. Dr. Udvardy Miklós. tanszékvezető egyetemi tanár, Belgyógyászati Intézet igazgatója. DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika Hematológiai Tanszék, Debrecen. Onko-haematologia aranykorszak.

keira
Download Presentation

Haemopoetikus sejt alapú haematologiai immuntherapia

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Haemopoetikus sejt alapú haematologiai immuntherapia Prof. Dr. Udvardy Miklós tanszékvezető egyetemi tanár, Belgyógyászati Intézet igazgatója DEOEC Belgyógyászati Intézet II. sz. Belgyógyászati Klinika Hematológiai Tanszék, Debrecen

  2. Onko-haematologia aranykorszak • Célzott therapia: monoklonális antitestek, jelátvitel gátlók (pl. imatinib), ATRA, proteaszóma gátlás sok kórkép megoldás felé halad • Vannak nehéz helyzetek, pl. időskori AML, indolens lymphomák ahol nincs áttörés • Sejtes vaccinatio ekkor indokolt, a részleges remissio (nem a nagy tumortömeg) mellett

  3. ŐSSEJTEK…. • Embryonális • blastocysta • totipotens • 2. Embryonalis • csira sejt • pluripotens • 3. Köldökzsinór • pluripotens • 4. Felnőtt őssejt • multipotens • (5. Embryonális • cc. őssejt)

  4. Haemopoetikus őssejt • Multipotens szomatikus őssejt, tipusai: 1. CD133+, CD34-: pluripotensebb, long-term HSC (haemopoesis, máj?, izom?, angiogenesis?, neuron?) 2.CD34+, CD133+: HSC és haemangioblast • 3. CD34+, CD133-, zöm, short term HSC • Adheziv fehérjék (VLA -4-5) • Cytokin receptorok (c-kit, flt-3)

  5. Haemopetikus őssejttel végzett immun therapia • Allogen transplantatio utáni és graft versus host és graft versus tumor effektus • Redukált, mini-, mikro- allotransplantatio nem myeloablativ, hanem jelentős immun effektus (pl. időskori AML) • Donor lymphocyta infusio (CML, AML), további immnmodulatio (pl. Kepivance)

  6. Aktiv immunizáció • Releváns betegség (egyéb th. nem jelent megoldást) • Legalább részleges remissio állapotában alkalmazható • Hagyományos antigen ellenanyag képzés az onkohaematologiában limitált hatékonyságu • Sejtes alapu vakcina (pl. dendritikus sejt) a jelen és jövő utja

  7. Immunisatiós lehetőségek • A beteg tumor sejtjeinek extractuma pontatlan, részben túlhaladott, de mégis jó lehet (colorectalis, myeloma) • Több betegtől származó keverék, kultura • Idiotypus(myeloma, lymphoma) fehérje, körülményes izolálás • Molecular rescue, Peptid lymphomában a hibás gén szekvencia klónozása, amplifikációja vagy géntechnika (pl. tobamovirus nicotinia) • Más antigen, pl. CEA, 10 kD colon tumor

  8. Beviteli utak • Monocyta eredetű dendritikus sejt döntően cellularis, erőteljes válasz másodlagos humoralis válasz változatos válasz arány (immun és klinikai) • Adjuváns (kulcslyuk csiga hemocianin, KLH) döntően humorális, jó válasz arány lymphomában is • „Naked DNA” injectio nem elég a tapasztalat • Tumor-DC fusiós technika (myeloma, kisérletes) • Géntechnologia-géntherapia (AML) • DC + KLH(Id alapu, NHL, myeloma)

  9. Dendritikus sejt • Folliculáris dendritikus sejt nyirokcsomó – integritas vakcinációs célra invaziv • Monocyta (CD14) eredetü dendritikus sejt in vitro cytokin hatás • Bőr, Langerhans sejtek • Lymphoid prekurzor eredetü

  10. A dendritikus sejtes vakcináció alapjai • Dendritikus sejt felveszi a tumor antigent • Intracellularis fázis • Antigen felszini expressio, döntően MHC II presentatio • A gazdaszervezetbe visszajuttatva főként CD4, de további helper/suppressor sejt aktiválás, majd humoralis válasz is • T sejt proliferatio, cytokin válasz, antigen specifikus tumor lysis • B sejt válasz

  11. Monocyta eredetü dendritikus sejt („Cologne model”) • Teljes vér (60-80 ml) vagy Apheresis, CD14 selectio (adherentia, poz. selectio) • dendritikus sejtté alakitás In vitro cytokin inkubáció (GM-CSF, IL-4) + tumor antigen/peptid CD14 -, nincs T és B sejt marker MHC I, II (CD1+, 81+) • Aktiváció: LPS, TNF, CD40-ligand • Immunsuppressio, tolerancia is kiváltható inkubáció flt-3 (ligand) • Legalább 2-8 M sejt, iv. (is) beadható

  12. Keyhole limpet, kulcslyuk csiga • Immunstimultor és adjuváns • „B Immunostimulator” (AIDS), NHL tanulmányok (1993) • Döntően cellularis, de CD4 és 8 is • Idegen fehérje, mellékhatások • DC és KLH (myeloma, foll. NHL) • KLH – kulcslyukcsiga hemocyanin, kb. 1000 kD nagy fehérje

  13. Lymphoma vakcinációs tanulmányok, folliculáris NHL • Első Stanford-tanulmány: 41 beteg, CVP utáni remissio, Id-KLH vaccinatio 14 immunválasz alakult ki, a responderek tulélése 12 évvel a diagnózis után100%, több molekuláris remissio, főleg CR-ben adott vakcina esetén • Bendandi tanulmány: 20 beteg, kemoth. utáni remissio, Id-GM-CSF vakcina cellularis válasz 2/3-ban, humoralis felében a 11 responderből 8 bcl-2 negativ lett • Naked DNA Fázis III tanulmány (USA, multicentrikus), eredmények inkább előzetesek • Timmermann tanulmány, 35 folliculáris lymphoma 35 Id-DC folliculáris lymphoma (Stanford) kemotherapia után (első CR) első 10: 8 immunválasz 4 klinikai regressio további 25 Id-DC+KLH booster injectio regressio (Id DC) 22%, progressio hiánya (Id DC+KLH) 70% (43 hónap %), részben molekuláris remissio jó eredmények a CR idején végzett vakcináció

  14. Idiotype-pulsed dendritic cell vaccination Pre-vaccine 11 months post-vaccine

  15. 100 80 60 Responders (n=14) PROBABILITY (%) p<0.0001 40 non-Responders (n=18) 20 0 0 2 4 6 8 10 TIME (YEARS) Freedom From Progression Follicular Lymphoma first remission (Timmermann tanulmány)

  16. DC vakcináció, myeloma • Eisen, állatkisérlet, izolált Id ellenes T (CD4) sejt, regressio • Id-ellenes humoralis immunválasz th. értéke kicsi, keringő PP-re hat • Döntően Id-DC, ujabban KLH kombinációval • Id-DC alapu hatékonyságot is korlátozza a jelentős paraproteinaemia • Mégis cytolysatum?? • Uj tanulmányok: peptid alapu vakcináció, ill. Id alapu DC+KLH, van válasz (30-40%) • Autolog BMT után 3 hónappal (Stanford)

  17. Id izolálás • Paraproteinaemia legalább 0,4 g/l • Izotípus és (al)osztály analízis • Eltérő M, A, G-1, G-2, G-4, G-3 • Affinitas chromatographia, kicsapás • 95% tisztaság • Alkalmas DC és KLH vakcina készitésre • A hatás limitje - paraproteinaemia

  18. Figyelemreméltó kazuisztika • Maliander V et al. Leukemia, 1:165, 2004 • Egyetlen AML-es beteg esete, akinek WT-1 elleni vakcinával – monotherapiaként -komplett remissioja alakul ki

  19. Wilms tumor antigen (1), WT-1 • Wilms tumorral összefüggésben ismerték fel először • Zinc-finger transzkripciós faktor, sejt növekedés és proliferáció szabályozása, telomerease funkciók • AML, ALL, CLL, számos nem- Hodgkin lymphoma

  20. WT-1 RT-PCR és haematologia • AML-ben rossz prognosztikai jel, de ez vitatott • MDS-ben diagnosztikus lehet • CML-ben ugyancsak jellemző, a szint csökkenése jól jelzi a tirozinkináz gátló kezelés várható hatékonyságát • Jó MRD marker • Tumor antigen peptidszekvenciák, HLA asszociációkkal

  21. Gvax WT-1, fázis I-II tanulmány • WT-1 peptid, a beteg saját in vitro irradiált tumor sejtjéval • 54 AML eset, parciális remissioban • 70%-ban esett a WT1 szint • Az igy válaszolók 2 éves tulélése jelentősen javult • Lényegesebb szövődmény, mellékhatás nem volt

  22. February 2007 | 26 ! Peptide immunotherapy with a validated target: WT1 ! AML known to be immune responsive ! Activity already demonstrated with analogous products • 66% immune response; 57% durable clinical response in AML ! Short development path with indication of AML patients in first CR • 12 month PFS endpoint ! Off the shelf approach addressing most immune haplotypes • Four synthetic and natural peptides for CD8 and CD4 response ! Inexpensive to produce

  23. Vaccine Therapy and GM-CSF in Treating Patients With Acute Myeloid Leukemia, Myelodysplastic Syndromes, Non-Small Cell Lung Cancer, or Mesothelioma This study is currently recruiting patients.

  24. .

  25. Saját eddigi WT-1 eredményeink • Peptid keverék vagy módositott peptidek előállitása indul • mRNS mérés beállitása vérből és csontvelői mintákból (WT-1 splice varánsok mérésére is alkalmas), az erőteljes expresszióval járó esetek azonositására (Biró Sándor, Human Genetika), RT-PCR (Taqman, G6PDH) • Mérések AML, MDS, CML-ben, ill. nyitás a lymphoma vonalra

  26. A GAPDH gén expressziója egészséges (1, 2, 3)és AML betegben (4, 5, 6) Rn=normalizált fluoreszcencia szignál 6 5 3 2 4 1

  27. 6 A WT1 gén expressziója egészséges (1, 2, 3,) és AML betegben (4, 5, 6) Rn=normalizált fluoreszcencia szignál 5 4 3 2 1

  28. DEOEC program • Klinikai Sejttherapiás központ colorectális cc DC sejtes- CEA, Fázis I., melanoma, haematologia • HAEMATOLOGIA -auto PBSCT 100 eset,, allogen 2007 II. félév? - AML, adjuváns, DC alapu WT-1, 65 év feletti esetek - haemangioblast-angiogenesis program, Fázis I, ETT 5 eset - myocardium, fázis I. ETT, 8 eset

  29. Dendritikus sejtek Antigen presentatio, aktivált állapot

More Related