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ANEMIAS HEMOLÍTICAS AUTOINMUNES. ABORDAJE DE LA PROBLEMÁTICA. ESTUDIOS INMUNOHEMATOLÓGICOS . T.H.e.I. Enrique Daniel Longo E-mail: quiquelongo@felsan.com.ar. Anemia hemolítica autoinmune (AHAI). Es la presencia de auto-anticuerpos ( Au-Ac) y / o complemento en la
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ESTUDIOS INMUNOHEMATOLÓGICOS. T.H.e.I. Enrique Daniel Longo E-mail: quiquelongo@felsan.com.ar
Anemia hemolítica autoinmune (AHAI) Es la presencia de auto-anticuerpos ( Au-Ac) y / o complemento en la membrana del glóbulo rojo (GR) que disminuye la sobrevida del mismo.
DATOS CLÍNICOS • SEMIOLOGÍA • ANAMNESIS • LABORATORIO
ANAMNESIS EDAD DROGADICCIÓN ENDOVENOSA SEXO DIAGNÓSTICO CLÍNICO MEDICACIÓN (incluso no prescrita) • ANTECEDENTES • Transfusionales • Obstétricos
DATOS DE LABORATORIO PRUEBAS QUE DEMUESTRAN LA EXISTENCIA DE HEMÓLISIS • HEMOGLOBINEMIA • RETICULOCITOS • HEMOGLOBINA • HAPTOGLOBINA • BILIRRUBINA • L.D.H • HEMOGLOBINURIA
LOS OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN INMUNOHEMATOLÓGICA DE LAS AHAI SON:
Identificación de las características del Au-Ac.- Identificación y exclusión de Alo-ac. eritrocitarios subyacentes.- Establecer que GR sobrevivirán mejor post-transfusión.
DETERMINACIONESINMUNOHEMATOLÓGICAS DIAGNOSTICO INMUNOHEMATOLÓGICO DETERMINACIONES CELULARES DETERMINACIONES SÉRICAS
GRUPO CONTROL FENOTIPO EXTENDIDO CONTROL PRUEBA DE COOMBS DIRECTA (PCD) de ser positiva PCD MONOESPECÍFICAS DETERMINACIONESCELULARES
GLOBULOS SENSIBILIZADOS Aut-Ac IgG Aut-Ac IgM Elución conservadora 10-15 minutos A 45°/ 50° Lavar con solución Fisiológica a 37° Cloroquina REACTIVOS SULFIDRILOS DTT O 2ME ( DTT: Ditiotreitol) EGA-KIT FENOTIPAR
PCD POSITIVADETERMINACIONES MONOESPECIFICAS IgG A.H. INDUCIDA POR DROGAS AHAI CALIENTE AHAI FRIA C 3 AHAI CALIENTE O MIXTA C 3 + IgG
PRUEBA ANTIGLOBULINA DIRECTA POSITIVA IgG + C3 C3 IgG Ac. Reactivos a T.A Eluido POSITIVO NEGATIVO NEGATIVO POSITIVO ESTUDIAR CRIOAGLUT. PRUEBA DE D-L INVESTIGAR AHID
ELUIDO POSITIVO DETERMINAR SI ALOANTICUERPO AUTOANTICUERPO Reacción hemolítica/serológica postransfusional? Pruebas globulares con patrón de campo mixto Separar hematíes propios de transfundidos
ELUIDO TODOS LOS HEMATÍES NEGATIVOS TODOS LOS HEMATÍES POSITIVOS ALGUNOS HEMATÍES POSITIVOS Investigar Anemia Hemolítica Inducida por drogas Aloanticuerpo? Autoanticuerpo Aloanticuerpo hacia antígenos de alta incidencia
DETERMINACIONES SÉRICAS • Detección de alo-ac. ( aun enmascarados por auto-ac.) • Investigación de crioaglutininas • Prueba de Donath-Landsteiner (DL) ante sospecha de HPF
Evaluar la especificidad de los Auto-Ac. suele ser frustrante ya que en la mayoría de los casos son panaglutinantes.
ESPECIFICIDADES FRECUENTES DE AUTOANTICUERPOS MAS FRECUENTE SISTEMA Rh OTRAS Anti-M, -N, -S, -Ena TS, -Ena FS, -Ena FR, Ena KT, -K, Kpb, -Jsb, -K13, -Fyb, -Jka, -Jkb, Jk3, -Lwa, -Lwab, -Dib, -Wrb, -Sc1, -Sc3, -Ge2, -Ge3, -Ge4, -Kx, -Xga, -Co3, -Ytab, -Vel, -AnWj, -It, -Pr, -Rx
Prueba de Antiglobulina Indirecta POSITIVO NEGATIVO TRANSFUSION RECIENTE ( ÚLTIMOS 3 MESES) NO HAY AC. DETECTABLES ALO-AC. AUTO-AC. ESPECIFICIDAD Y SIGNIFICADO CLÍNICO TODOS LOS AC. ADSORBIDOS A LOS GR INCOMPATIBLES VER PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA
PARA DESENMASCARAR ALO-AC. ENCUBIERTOS POR AUTO-AC • ADSORCIÓN AUTOLOGA(Si el paciente no fue transfundido) • ADSORCIÓN HOMOLOGA ( si fue transfundido o la adsorción autologa no fue suficiente)
SOBRENADANTE DE ADSORCIÓN AUTOLÓGA Todos los Hematíes NEGATIVOS Todos los Hematíes POSITIVOS Algunos Hematíes POSITIVOS No hay aloanticuerpos Aloanticuerpo Adsorción incompleta Alo-ac hacia antigenos de alta incidencia Hacer adsorción homóloga
SOBRENADANTE DE ADSORCIÓN HOMÓLOGA Todos los Hematíes POSITIVOS Algunos Hematíes POSITIVOS Todos los Hematíes NEGATIVOS Adsorción incompleta Aloanticuerpo Autoanticuerpo Alo-ac hacia antigenos de alta incidencia
PAD Negativa con clínica de Hemólisis Transfusion reciente No hay anticuerpos Diferencias cuali-cuantitativas Con PAD convencional Todos los GR Incompatibles hemolizados No inmune Error ABO Estudiar el suero y el eluido
Diferencias cuali-cuantitativas Con PAD convencional Ac. de baja afinidad PAD con Anti-IgA y Anti-IgM Pocos Ac. en los GR • Lavar con sol. • Fisiológica fria • Test en gel Pasar a métodos mas sensibles en suero/GR • Test en gel • Pruebas de consumo • Citometria de flujo • RIA,ELISA,bioensayo • Eluido concentrado • LIM-P; LIM-P-SAG • Autoenzimas, auto Peg • Acidificar el suero
Crioaglutinina activa a T° ambiente sin transfusión reciente Prueba de Antiglobulina Directa Anti-C3 POSITIVA NEGATIVA
POSITIVA Con clínica de hemólisis Adsorcíon autóloga en frío Rango térmico y título Usar sobrenadante para Buscar alo-ac. Prueba cruzada INVERSA
Crioaglutinina activa a T° ambiente sin transfusión reciente Prueba de Antiglobulina Directa Anti-C3 POSITIVA NEGATIVA
NEGATIVA AUTOCONTROL NEGATIVO POSITIVO Crioaglutinina NO PATOLÓGICA ALO-ANTICUERPO FRIO
Estamos recordandote...je.¿Te veremos el lunes?Hemocentro Buenos AiresThe big family