ELETTROFORESI SU GEL DI AGAROSIO

1. ELETTROFORESI SU GEL DIAGAROSIO Esercitatori

2. (2n-2n)x 94°C 94°C n= cycles number x= starting template DNA 30’’’ 72°C 72°C 58°C 30’’ CONDIZIONI DI UTILIZZO PER LA PCR 5’ 4°C  1’ 30’’ 28 Cycles Thermal Cycler The integrity of PCR ampliconswill be analyzed by electroforesis • 2° DAY

3. ELETTROFORESI SU GEL DIAGAROSIO • Permette la separazione di acidi nucleici in funzione delle loro dimensioni, della carica e della forma • E’ una tecnica fondamentale per: • 1_l’analisi (elettroforesianalitica); • 2_la purificazione degli acidi nucleici (elettroforesi preparativa) • 2° DAY

4. catodo anodo ELETTROFORESI SU GEL DIAGAROSIO - + RNA e DNA sono carichi negativamente • 2° DAY Gli acidi nucleici sono carichi negativamente ed in un campo elettrico migrano dal polo negativo verso il polo positivo.

5. Effetto “setaccio” in un gel uniforme ELETTROFORESI SU GEL DIAGAROSIO Nell’elettroforesi gli acidi nucleici vengono sottoposti ad un campo elettrico (vengono “fatti migrare” o “correre”) all’interno di una matrice (gel di agarosio o poliacrilammide). - • 2° DAY +

6. L’agarosio è un polisaccaride, isolato da un’alga, costituito da residui alternati di D-galattosio e 3,6-anidro-L-galattosio. ELETTROFORESI SU GEL DIAGAROSIO L’elettroforesi in gel di agarosio consente la separazione di molecole di grandi dimensioni (100-20.000 paia basi). • 2° DAY Risoluzione Concentrazione di agarosio 0.8% : 0.5 – 20 kb 2% : 0.1 – 3 kb

7. 1% agarose gel in 1X TAE electroforesis buffer • Run Time: 40 min. • Voltage: 80 V • Samples: 1/20 final Volume (5 l) + Loading buffer PROTOCOLLO GEL AGAROSIO 100V 0,2A Polo - Polo + • 2° DAY

8. White ON CORSA SU GEL AGAROSIO 100V 0,2A Polo - Polo + • 2° DAY UV

9. CORSA SU GEL DI AGAROSIO DEI PLASMIDI • 3° DAY

10. NANODROP: Dosaggio Spetrofotometrico del DNA Plasmidico • 3° DAY