1 / 27

KARAKTERISASI DAN PEMURNIAN XILANASE DARI BAKTERI RAYAP Reticulitermes santonesis

Seminar Tugas Akhir 26 Mei 2010. KARAKTERISASI DAN PEMURNIAN XILANASE DARI BAKTERI RAYAP Reticulitermes santonesis. Gde Sutawijaya Pembimbing : Zeily Nurachman , D.Sc. Institut Teknologi Bandung. Agenda Presentasi. Pendahuluan Tinjauan Pustaka Metodologi Hasil Kesimpulan.

ratana
Download Presentation

KARAKTERISASI DAN PEMURNIAN XILANASE DARI BAKTERI RAYAP Reticulitermes santonesis

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Seminar TugasAkhir 26 Mei 2010 KARAKTERISASI DAN PEMURNIAN XILANASE DARI BAKTERI RAYAP Reticulitermessantonesis GdeSutawijaya Pembimbing: ZeilyNurachman, D.Sc InstitutTeknologi Bandung

  2. Agenda Presentasi • Pendahuluan • TinjauanPustaka • Metodologi • Hasil • Kesimpulan

  3. Pendahuluan • Adanyakemampuanhemiselulotikdarirayap • Kebutuhanakanadanyaagen bleaching kertas yang ramahlingkungan • Kebutuhanenergi yang meningkat

  4. Tujuan • Mengekstraksixilandaritongkoljagung • Memproduksienzimxilanasemenggunakansubstratxylantongkoljagung • Memurnikanenzimxilanasemenggunakan FPLC dengankolom DEAE

  5. TinjauanPustaka Xilanase (EC 3.2.1.8) Xilanasemenghidrolisisikatan (1->4)-beta-D-xylosidicpadaxilan Xilanasemenghasilkanxiloligosakaridadanxilosa

  6. TinjauanPustaka

  7. TinjauanPustaka Tongkoljagung Kandungantongkoljagung : selulosa 44,9%, hemiselulosa (31,8%), dan lignin 23,3%, dankomponenlainnya (Titi Sunarti (IPB) dan Nur Richana (BB Pasca Panen Pertanian)).

  8. Metodologi • Persiapantongkoljagung • Ekstraksixilandaritongkoljagung • Produksixilanase • Pemurnianxilanase • Karakterisasixilanase

  9. Metodologi 1. Persiapantongkoljagung TongkoljagungKering Dipotongkecil-kecil Tongkoljagung yang telahdipotong Digiling TongkolJagunghalus

  10. Metodologi 2.Ekstraksi xilandaritongkoljagung filtrasi DelignifikasidenganNaOCl 1% (10:1), 5 jam, suhukamar Padatandiambil, dandikeringkan PengasamandenganHCl Supernatandiambildengancarasentrifugasi EkstraksixilanmenggunakanNaOH

  11. Metodologi Xilandikeringkan dihaluskan Xilan

  12. Metodologi 3.Produksi xilanase Pembuatan media padatdancair • 1.Komposisi media padat • K2HPO4 1,5% • MgSO4.7H2O 0,025% • NaCl 0,25% • NH4Cl 0,5 % • NH4PO4 0,5 % • Yeast 0,2% • Xilan 0.5% • Bacto agar 2% • 2. Media cairuntukproduksienzim • Komposisi • K2HPO4 1,5% • MgSO4.7H2O 0,025% • NaCl 0,25% • NH4Cl 0,5% • NH4PO4 0,5 % • Yeast 0,2% • Xilan 0,5%

  13. Metodologi • Penanamanbakteri/pembuatankolonitunggal

  14. Metodologi 20 mLkultur starter dishakerselama12 -15 jam pada 150 rpm, 37°C, setelahitudimasukankedalam media produksienzim 200 mL (dalamerlenmeyer 1L). Media produksidi-shaker dalam20 jam pada150 rpm, 37°C. Enzim yang dipanendisentrifugapada 5000 rpm untukmenghilangkan debris sel Produksixilanase

  15. Crude EnzimXylanase1L +106g(NH4)2SO4(Fraksi 0-20) *Disentrifugasipada 11000 rpm, 30 menit Supernatan Padatan *Diresuspensidengan buffer tris-HCl pH 8.0 20 mM * Didialisis Enzim hasil dialisis FraksinasiEnzimdengan (NH4)2SO4 Tujuannyauntukmengendapkan protein denganprinsip salting out

  16. Dialisis Dialisisbertujuanuntukmembersihkanamoniumsulfatdari protein, prinsipnyadenganperbedaankonsentrasi, dimanakonsentrasigaramdidalammembranlebihbesardaripadadiluarmembran

  17. FPLC Fast Performance Liquid Chromatography Merupakanpemisahandenganmemanfaatkanperbedaanmigrasisuatudarisenyawapadafasadiamdanfasagerak. Digunakankolompenukar anion DEAE-Sepharosa yang bekerjaberdasarkanperbedaanmuatandalam protein

  18. UjiAktivitasXilanase Dari BakteriRayap PembuatanDNS 0,05 gr DNS ditimbangdandilarutkandalam 25 ml NaOH 2 M, ditambahkan Na-K tartarat 15 gram, diencerkandengan aqua dm hingga 50 ml, dandisimpandalamsuhu 4⁰C. PembuatanEnzimSampel enzim 50 µL dansubstrat 450 µL diinkubasipada 60oC selama 5 menit. Kemudianditambahdengan DNS 500 µL dandiinkubasididalam air mendidih 5 menit PembuatanEnzimKontrol substrat 450 µL dandiinkubasipada 60oC selama 5 menitkemudiandicampurkandengan DNS 500 µL danienzim 50 µL, dandiinkubasididalam air mendidih 5 menit

  19. Hasil • Kromatogramdari FPLC • Aktivitasenzim • Kadar protein

  20. Puncak-puncakkromatogrammenunjukanadanyaaktivitasenzim

  21. UjiAktivitasdenganmetodagulapereduksi (reagen DNS) Terjadipeningkatanaktivitassetelahfraksinasi 0-20% sebesar 10,8 kali

  22. Penentuankadar protein

  23. Penentuankadar protein Ekstrakkasar= 1.00 = 66 µg/mL Fraksi 6 = 0.113 = 7,2 µg/mL Fraksi 7 = 0.14 = 9 µg/mL

  24. Pembahasan Puncak-puncakpadakromatogrammenunjukanadanyaaktivitasenzim, namununtukmemastikanenzimtersebutadalahxilanase, perludiujidenganmetoda DNS. Sebelumnyajugatelahdiujiaktivitasxilanaseterhadaptongkoljagung, danternyataxilanaseinitidakdapatmenguraikantongkoljagungmentah

  25. Kesimpulan • Aktivitasxilanasedaribakterirayaptergolongbesar • Dari data bisadilihatbahwaterjadipeningkatanaktivitasdenganfraksinasiamoniumsulfat.

  26. UcapanTerimakasih • Pak Zelly, tehInda, buIis, pakYayat, kak Edo untukbimbingandanmotivasinya • Teman-teman 2006 sebimbingan, Tita, Ricky, Asro • Teman-temankimiauntukbantuandansemangatnya • Peserta seminar ini

  27. Diskusi Knowledge only gained through coriousity

More Related