1 / 35

TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA

TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA. Sanja Salamunović, dipl.ing.med.lab.diag. KLINIČKA JEDINICA ZA TIPIZACIJU TKIVA KLINIČKI ZAVOD ZA TRANSFUZIJSKU MEDICINU I TRANSPLANTACIJSKU BIOLOGIJU KBC-ZAGREB Zadar, 23.rujan 2011. TRANSPLANTACIJA?.

tamara-dillon
Download Presentation

TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. TIPIZACIJA HLA MOGUĆIH PRIMATELJA I DARIVATELJA ORGANA KOD TRANSPLANTACIJE SOLIDNIH ORGANA Sanja Salamunović, dipl.ing.med.lab.diag. KLINIČKA JEDINICA ZA TIPIZACIJU TKIVA KLINIČKI ZAVOD ZA TRANSFUZIJSKU MEDICINU I TRANSPLANTACIJSKU BIOLOGIJU KBC-ZAGREB Zadar, 23.rujan 2011.

  2. TRANSPLANTACIJA? • Unošenje stranog tkiva - organa davatelja u organizam primatelja u svrhu liječenja • Prema vrsti transplantata razlikujemo: Transplantaciju nelimfatičnog tkiva (solidnih organa): • Bubreg, srce, jetra, gušterača, pluća, rožnica Transplantaciju limfatičnog tkiva: • Koštana srž, krvotvorna matične stanice

  3. MALO POVIJESTI... KBC-RIJEKA • 1971. Prva transplantacija bubrega sa živog darivatelja • 1972. Prva transplantacija bubrega sa umrle osobe Prof.dr.Vinko Frančišković i sur. • 1971. Prva tipizacija antigena HLA Prof.dr.Ksenija Vujaklija - Stipanović KBC-ZAGREB • 1988. Prva transplantacija srca Prof.dr.Josip Sokolić i sur. KBC – ZAGREB • 1990. Prva transplantacija jetre Doc.dr.sc.Vuk Borčić i sur.

  4. ....I JOŠ MALO • KB JORDANOVAC, • 2002. Prva transplantacija pluća • Prof.dr.sc.Zoran Slobodnjak i sur. • KBC- RIJEKA • 1993. Prva simultana transplantacija bubrega i gušterače • Prof.dr.sc. Miomir Zelić i sur. • KB – MERKUR • 2002. – Prva,simultana transplantacija jetre i bubrega • Prof.dr.sc.Josip Pasini • Dr.Stipe Jandrijević i sur.

  5. TRANSPLANTACIJA ORGANA U RH 26.05.2007. RH PUNOPRAVNA ČLANICA EUROTRANSPLANTA

  6. EFI AKREDITIRANI LABORATORIJI U RH UVJET ZA PRIHVAĆANJE LABORATORIJA U ET PROGRAM: • AKREDITACIJA EVROPSKE FEDERACIJE ZA IMUNOGENETIKU (EFI AKREDITACIJA) ZAGREB ( 22.05.2007.) KJ za tipizaciju tkiva, Klinički zavod za transfuzijsku medicinu i transplantacijsku biologiju, KBC Zagreb • Referentni centar MZSS za tipizaciju tkiva RIJEKA ( 12.09.2008.) KJ za tipizaciju tkiva, Klinički zavod za transfuzijsku medicinu, KBC Rijeka

  7. EFI AKREDITACIJA

  8. EUROTRANSPLANT ? • Najveća europska organizacija za transplantaciju organa • Obuhvaća regiju u kojoj živi 120 000 000 stanovnika • 7 zemalja članica • Belgija, Njemačka, Hrvatska, Luksemburg,Nizozemska, Austrija i Slovenija

  9. EUROTRANSPLANT ? • Središte u Leidenu - Nizozemska • Povezuje transplantacijske centre, laboratorije i donorske bolnice u zemljama članicama • Povezujući donorski organ s primateljem ostvaruje se cilj - optimalno iskorištenje doniranih organa • Na središnjoj listi čekanja Eurotransplanta prijavljeno je oko 16 000 mogućih primatelja organa • Liste čekanja podijeljene su po organima (bubreg, srce, jetra, pluća)

  10. EUROTRANSPLANT - PREDNOSTI • Postojanje jedinstvenog donorskog identifikacijskog sustava • Velik broj donorskih organa (godišnje oko 7000) • Postojanje jedinstvene liste čekanja ( za svaki organ posebno ) • Velik broj prijavljenih primatelja daje mogućnost odabira najpodudarnijeg donorskog organa • Povećavanje šanse hitnog dobivanja organa živitno ugroženim pacijentima • Udruženi stručnjaci svih članica izrađuju i poboljšavaju propise za raspodjelu (ALOKACIJU) donorskih organa -

  11. RASPODJELA ORGANA U EUROTRANSPLANTU Raspodjela organa se temelji na medicinskim i etičkim načelima vodeći računa o : • Krvnoj grupi • HLA podudarnosti između darivatelja i primatelja • Postotku senzibilizacije antitjelima HLA • Vremenu provedenom na listi čekanja • Dobi pacijenta, ako se radi o djeci • Životnoj ugroženosti • Nacionalnoj uravnoteženosti primatelja i darivatelja organa • Svaki od navedenih parametara donosi određen broj bodova • Najveći broj bodova donosi upravo HLA podudarnost

  12. CILJ DOBRE PODUDARNOSTI HLA Imunološki predtransplantacijski cilj je • spriječiti odbacivanje transplantata • Bolja podudarnost u alelima HLA – duže preživljavanje transplantata

  13. Manja nepodudarnost – duže preživljavanje transplantata

  14. ODREĐIVANJE HLA PODUDARNOSTI PRIMATELJA I DAVATELJA • Imunogenetski test HLA TIPIZACIJA • To je određivanje polimorfizma alela HLA laboratorijskim testovima

  15. SUSTAV HLA Glavni sustav tkivne snošljivosti kod ljudi nazvan • Human Lekocitni Antigeni ( HLA ) • Središnji dio svih imunoloških reakcija - sudjeluje u imunološkim zbivanjima prerade i predočavanja antigena limfocitima T • Sustav čine blisko vezani geni smješteni na kraćem kraku kromosoma 6 • Obuhvaća ~ 0,1% ljudskog genoma (~4.000.000 pb) • To je najpolimorfniji genetski sustav u čovjeka • Poznato više od 3500 alela HLA razreda I i razreda II

  16. Geni sustava HLA su podijeljeni na RAZRED I RAZRED II Unutar razreda geni su podijeljeni na lokuse RAZRED I (lokus A, B,C) RAZRED II (lokus DR,DQ,DP) PODJELA GENA SUSTAVA HLA

  17. ZNAČAJ ODREĐIVANJA GENA HLA • presađivanja tkiva i organa • povezanost s bolestima • antropološka istraživanja • sudska medicina

  18. TIPIZACIJA TKIVA ODREĐIVANJE GENA HLA LABORATORIJSKIM TESTOVIMA NA SVAKOM LOKUSU TIPIZACIJOM TKIVA ODREĐUJU SE DVA ALELA JEDAN NASLIJEĐEN JEDAN NASLIJEĐEN OD OCA OD MAJKE DR3 A1 DR4 B7 A3 B8

  19. REZULTAT HLA TIPIZACIJE HLA - A1, A3 B7, B8 DR3, DR4

  20. TIPIZACIJA HLA PRIMATELJA ORGANA • Metoda izbora – molekularna ( DNA) tipizacija • Uvjet za prijavljivanje na listu čekanja • Obavezno određivanje alela HLA -A, -B, -DR • Preporučljivo i određivanje HLA -C, -DQ • Primatelji bubrega se tipiziraju iz dva neovisno izvađena uzorka venske krvi ( s antikoagulansom EDTA ) • Prvi uzorak se tipizira metodom PCR-SSP • Drugi uzorak se tipizira metodom PCR-SSO • Dvije tipizacije svakog primatelja bubrega moraju biti identične • Primatelji srca, jetre, pluća se tipiziraju jednokratno metodom PCR-SSO • Nakon uspješne tipizacije primatelji se prijavljuju na ET liste čekanja

  21. DARIVATELJI ORGANA • Svaka umrla osoba kod koje je nastupila cerebralna smrt ( trajni prestanak svih moždanih funkcija) – KADAVERIČNI DARIVATELJ • Darivatelj može biti i živa osoba ( bubreg, dio jetre itd.) • U RH je zakonom propisan protokol utvrđivanja moždane smrti • Zakon o pretpostavljenom pristanku • Pristanak obitelji

  22. Tipizacija HLA darivatelja organa • Transplantacijski koordinatori (zemalja članica ET) prijavljuju ET-u postojanje darivatelja organa u svojoj zemlji • Transplantacijski koordinatori Ministarstva zdravstva i socijalne skrbi RH kontaktiraju pripravnog djelatnika za tipizaciju tkiva ( Zagreb, Rijeka ) • Pristupa se tipizaciji darivatelja - po hitnom postupku • Molekularna tipizacija gena HLA izvodi se metodom PCR-SSP • Iz uzorka venske krvi uzete sa antiloagulansom EDTA • Koriste se dva paralelna testa ( različitih proizvođača) za lokuse HLA -A, -B, -C ,-DR i – DQ (Olerup, Innvitrogen) • Vrijeme izvođenja tipizacije gena HLA je 5 – 6 sati • Izvješće sa tipizacijom donora se šalje u dežurni centar ET

  23. IZOLACIJA DNA • Venska krv sa EDTA kao antikoagulansom • Izolacija DNA - komercijalni set za brzu izolaciju DNA pomoću kolumni (Nucleospin@Blood) • Enzim proteinaza K, uz pomoć pufera, razara proteinske strukture staničnih membrana • DNA izlazi iz jezgre i veže se za silikonsku membranu kolumne • Metoda brza, jednostavna

  24. PCR- SSP • PCR (engl. polymerase chein reaktion) • SSP (engl. sequence specific primers) • Enzimatsko umnažanje dijela DNA molekule uz pomoć specifičnih primera za alel ili grupu alela • Mala količina materijala • Velika količina umnožene DNA • Kratko vrijeme izvođenja testa

  25. PCR - SSP • Molekularna tipizacija lokusa na komercijalnim testovima • HLA-A* 24 reakcije • HLA-B* 48 reakcija • HLA-C* 24 reakcije • HLA-DRB1* 24 reakcije • HLA-DQB1* 8 reakcija • Za darivatelje organa izvodi se paralelno na dva testa različitog proizvođača ( Olerup, Innvitrogen ) • Za primatelje organa ova metoda se primjenjuje za tipizaciju prvog uzorka MPB

  26. SET ZA MOLEKULARNU TIPIZACIJU HLA – SSP( Olerup )

  27. VIZUALIZACIJA REZULTATA Elektroforeza • Uzorci se nanose na 1,5% agarozni gel, kroz koji protiče istosmjerna struja • Nukleinske kiseline su negativno nabijene te u električnom polju putuju prema pozitivnom polu • Dolazi do razdvajanja fragmenata jer manji fragmenti putuju brže od većih • DNK se boji etidium bromidom koji se umeće između parova baza DNK • Razdvojeni fragmenti pobuđeni UV svjetlom narančasto fluoresciraju

  28. DETEKCIJA REZULTATA • Test se očitava kao niz pozitivnih i negativnih reakcija • Svaki gel je fotografiran kamerom (G:Box Synergine) • Analiza uz pomoć kompjuterskog programa • Run Score (Olerup) • UniMatsch 4,0 (Innvitrogen) • Pozitivna reakcija – vidljive su dvije vrpce: jedna kontrolnih početnica, a druga alel specifičnog produkta – • na nekim reakcijama uz produkt kontrolnih početnica su prisutni i alel specifični produkti • Negativna reakcija – vidljiva je jedna vrpca koja je produkt kontrolnih početnica • prisutan je samo produkt kontrolnih početnica

  29. KOMPJUTERSKA ANALIZA ( RUN SCORE – Olerup )

  30. NALAZ HLA TIPIZACIJE

  31. PRIJAVA TIPIZACIJE PRIMATELJA U ET

  32. PRIJAVA TIPIZACIJE DAVATELJA - ET OBRAZAC

  33. Alokacijska lista Lista čekanja

  34. HVALA NA PAŽNJI !

More Related