Tinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para identificar bacilos Gram-positivos

1. Tinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para identificar bacilos Gram-positivos Por: Angélica Aquino María garriga Meraris Soto Luis e. Oquendo

2. Bacilos Gram + Catalasa -, no formadores de esporas

3. Hay tres especies de Erysipelothrix: • Erysipelothrixrhusiopathiae • Erysipelothrixtonsillarum • Erysipelothrixinopinata • Erysipelothrixrhusiopathiaees la única que causa enfermedades en humanos

4. Gram-positiva Catalasa negativa No formadora de esporas Tiende a formar largos filamentos No motiles Ureasa negativo Erisipeloide Produce H2S http://www.actasdermo.org/es/forma-cutanea-difusa-erisipeloide/articulo/13052968/

5. Sensible a: • Penicilina • Cefalosporinas • Eritromicina • Clindamicina • Resistente a: • vancomicina http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/A/Antibiotics.html

6. Deben ser cultivadas en caldo nutriente con: • 1% de glucosa • 5% de CO2 • A 35 ˚C • También crece en agar chocolate y agar sangre • En agar sangre las colonias son no hemolíticas

7. Después de 48h de incubación se ven dos diferentes tipos de colonias Pequeña, forma lisa transparente, reluciente y bordes enteros Grande, colonias ásperas, estructura curvea, bordes irregulares

8. Aracnobacterium, 9 especies • Aracnobacteriumhaemolyticum • Aracnobacteriumpyogenes • Aracnobacteriumbernardiae • Catalasa negativa • Agar Sangre • Beta-hemólisis

9. Tinción de Flagelos

10. Tinción de flagelos Los flagelos son órganos de locomoción Los flagelos están compuestos por cerca de 20 proteínas, con aproximadamente otras 30 proteínas para su regulación y coordinación La flagelina es la principal del flagelo Tiene su origen en el protoplasma de la célula bacteriana

11. Tipos de flagelos

12. Métodos • Kodak • Cubrir la preparación durante 5 a 10 minutos • Lavarlo por 2 ó 3 minutos • Observar la placa de la periferia hacia el centro • Método Leifson • Fuscina básica en alcohol etílico • Acido tánico en agua destilada • Cloruro de sodio en agua destilada

13. Tinte RYU • Se utiliza en el borde del cubreobjetos • Después de 5 a 10 minutos se examina la muestra

14. Bacilos Gram + No formadores de espora, actinomicetos aeróbicos filamentosos

15. Actinomicetos Grupo heterogéneo Bacterias filamentosas ramificadas Similar al crecimiento de hongos Aerobios / Anaerobios facultativos Crecimiento lento No motil

16. “Acid-fast stain” http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/

17. “Acid-fastStain” http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/Lab%20Stuff/Stains/Bacterial%20Stains.htm http://www.highlands.edu/academics/divisions/scipe/biology/labs/rome/acid_fast_stain.htm

18. Nococardiaspp. • Presente en suelo y en material vegetativo • No motil • Parcialmente ácido-resistentes • Se utiliza prueba modificada • Utiliza ácido débil • (0.5% a 1% H2SO4) • En humanos causa infecciones • pulmonares y subcutáneas • sistémica • afección al Sistema Nervioso Central • La infección progresa rápidamente

19. Otros Actinomicetos Actinomaduraspp. Gordoniaspp. A. maduraese diferencia por ser Xilosa positivo Reduce nitrato No tiene micelio No motil Parcialmente ácido-resistente

20. Rhodococcus spp. http://people.upei.ca/jlewis/html/lab_4_coryne-_mycobacterium.html • R. equis • Parcialmenteácido-resistente. • Se diferenciaporexhibircoloniasrosa-salmónen Agar Sangre • Parecido a Klebsiella

21. Identificación Actinomicetos

22. Bacilos Gram + Formadores de esporas, no filamentosos, catalasa +

23. Esporas Clostridium difficile http://promocionxxii.med-unjfsc.edu.pe/2011/10/genero-clostridium.html • Resistentes a condiciones ambientales adversas. • Organismos que producen esporas: • Hongos • Plantas • Bacterias

24. Formación de esporas

25. Tinción de Esporas Fijar la bacteria en la laminilla. Colocar un pedazo de papel toalla en la laminilla. Echar verde malaquita sobre el papel toalla.

26. Tinción de Esporas Calentar la laminilla por 5 minutos. Lavar el frotis con agua destilada. Cubrir el frotis con safranina por 30 segundos.

27. Tinción de Esporas Lavar con agua destilada y secar. http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html B. anthracis

28. Bacilos formadores de esporas Gram positivos Catalasa positivos Aeróbicos / Anaeróbicos facultativos Muchas de las especies crecen en Agar de Sangre Bacillusspp. &Clostridiumspp.

29. Bacillusspp. • B. anthracis • No motil • No fermenta lactosa • Infecciones humanas • B. cereus • Infecciones humanas • Motiles • Beta hemolítico • B. thuringienses • Insectos • Beta hemolítico • B. subtillis • Beta hemolítico • Aspecto liso, mucoide o rugoso

30. B. anthracis Son grandes, grises y planas. En Agar Sangre no son hemolíticas. Son halófilas y crecen en medios alcalinos. Susceptibles a penicilina, fluroquinolinas, entre otros.

31. B. anthracis http://biogefahr.shopkeeper.de/cgi-bin/nw/biogefahr-de/ “Medusa head”

32. B. cereus Figura 16-19 Bacillus cereus en Agar de Sangre • Tiene dos enterotoxinas • Emética • Diarrea • Crece a 37˚C en Agar Sangre. • Resistentes a penicilina. • Susceptible a vancomicina y clindamicina.

33. Identificación de Bacilos Gram + Aeróbicos Bacilos Catalasa +, no formadores de esporas y no filamentosos

34. Características Generales Se encuentran en el ambiente (agua y suelo) con facilidad. No se consideran altamente patogénicos, mas sin embargo se están aislando en infecciones clínicas con mayor frecuencia. Unos pocos son menos comunes, mas causan enfermedades severas.

35. Diagrama de Identificación

36. Corynebacteria • C. (ulcerans, diphtheriae, pseudotuberculosis) • Catalasa + • No motil • CTBA (medio) forman “halo” marrón • C. diphtheria • No produce ureasa • Fermenta glucosa y maltosa • Reduce nitrato a nitrito • Prueba de Elek para detectar toxina

37. Elek’s Test Corta papel de filtro de 75% diámetro de plato de agar y 2 cm de ancho. Saturar con antitoxina C. diphtheria y esperar que seque. Añadir suero de conejo y “potassiumtellurite” al agar caliente.

38. Elek’s Test • Coloca los papeles en el plato de agar caliente y deja que llegue al fondo. • Luego de sólido, añade el organismo y pon paralelo a este, controles negativos y positivos. • Incubar de 18- 24 horas.

39. Identificación de C. diphtheria

40. Listeria monocytogenes Rothia and Listeria Rothiaspp. Cocos Gram + Disimulan ser Bacilos Familia Micrococcacea Nitrato + No motil Hidrolizan esculina Ureasa Negativa 2/3 catalasa + Bacilos Gram + Familia Listericea Catalasa + Hidrolizan esculina Motiles B-hemolíticos Crece en 6.5% NaCl

41. Resultados de Pruebas Bioquímicas Identificación y diferenciación de bacilos gram positivos

42. Pruebas de Identificación http://es.slideshare.net/jmhr23/bacilos-gram-positivos-aerobios-no-esporulados

43. Pruebas de Identificación https://www.scribd.com/doc/28806551/Bacteriologia-diagnostica

44. Pruebas de Identificación http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf

45. Pruebas de Identificación http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf

46. Pruebas de Identificación http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis404.pdf