EKSTRAKSI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM LIPASE

1. EKSTRAKSI DAN UJI AKTIVITAS ENZIM LIPASE

2. EKSTRAKSI ENZIM LIPASE • Lipase (triacyl glycerol acylhydrolase, EC. 3.1.1.3)  enzim yang menghidrolisis triasilgliserol menjadi asam lemak bebas dan gliserol dan mempunyai aktivitas maksimum pada daerah interface minyak dan air • Produk hasil hidrolisis yang lain adalah monogliserida dan digliserida. • Penggunaan enzim lipase antara lain pankreas, susu, tanaman yang menghasilkan trigliserida (seperti kacang, kedelai), kapang dan bakteri.

3. Reaksi Trigliserida

4. Faktor hidrolisis lipase • Suhu • pH • Konsentrasi substrat • Konsentrasi Enzim

5. Satuan Aktivitas Enzim • Satuan unit ( U ) yang didfinisikan sebagai jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per menit pada kondisi tertentu. Satuan 1 Unit Enzim (UE) : mol per menit • Sistem SI; dengan satuan KATAL yang didefinisikan sebagai : jumlah enzim yang dapat mengkatalisis perubahan 1 mol substrat per detik ( 1 KAT = 60 x 106 Unit) atau 1 Unit = 16.67 nanokatal . Sistem ini belum banyak diterima secara luas

6. Tujuan Praktikum • Mempraktikkan cara menguji aktivitas lipase dari kacang tanah dan dedak padi • Menghitung aktivitas enzim

7. Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Dedak Padi • Bahan • dedak padi • susu sapi segar • dietil eter • buffer phospat pH 7.5 • NaOH 0.1 N • indikator PP • alkohol

8. Alat • corong pipet volume 10 ml • kertas saring bola hisap • magnetik stirer gelas ukur 50 ml • sentrifuse gelas beker • mortar buret • Water bath pengaduk • erlenmeyer 100 ml pipet tetes • neraca analitik

9. Dedak padi sebanyak 10 gram • ditambah 50 ml dietileter, aduk-aduk dan gojog untuk melarutkan lemak. • Saring dengan kertas saring, filtratnya berisi lemak dan turunannya yang larut dalam dietil eter. • Ampas yang diperoleh ditambah dengan 40 ml 50 mM bufer phosphat pH 7 atau 40 ml 10 mM Tris HCL Bufer pH 7,5 • Campuran tersebut dimagnetik stirer selama 30 menit. • Selanjutnya saring dengan kain saring dua lapis. • Filtratnya disentrifugasi, supernatan merupakan ekstrak enzim kasar yang terlarut dalam buffer.

10. Ekstraksi dan Uji Aktivitas Lipase dari Kacang Tanah • Bahan: • susu sapi segar • kacang tanah • alkohol • buffer phospat pH 6.5 • Indikator NaOH 0,1 N • Indikator pp

11. Hancurkan 5 gram kacangtanah • Tambahkan 50 ml 0,1 N NaCl atau 0,1 M buffer phospat pH 6,5 biarkan 30 menit pada suhu kamar. • Saring dengan kertas saring kasar. Filtrat yang diperoleh merupakan ekstrak enzim lipase kasar. • Substrat (susu sapi segar) dipanaskan suhu 80oC selama 10 menit. • Sebanyak 8 ml substrat (susu sapi pasteurisasi) dimasukkan dalam labu Erlenmeyer 100 ml dan seimbangkan suhunya dalam penangas air 370C. • Tambahkan 2 ml ekstrak enzim lipase kasar. • Inkubasikan selama 10 menit, 370C. Setelah inkubasi tambahkan 40 ml alkohol. • Sebagai blanko adalah susu sebanyak 8 ml ditambah 2 ml larutan pengekstrak enzim (Larutan NaCl atau Buffer phosphat) dan 40 ml alkohol tanpa dilakukan inkubasi. • Tambahkan 5 tetes indikator pp pada msing-masing sampel dan blanko, kemudian titrasi dengan 0,1 N NaOH sehingga berubah menjadi mencapai warna PINK .

12. Aktivitas enzim dinyatakan dalam mol / menit ml enzim atau Unit/ml • Aktivitas lipase = ( ts- tb ) NaOH x M NaOH x1000 • Volume enzim x menit • Satuan aktivitas lipase = μmol/ ml enz mnt • Dengan : ts = titrasi sample • tb = titrasi blanko • waktu inkubasi = 10 menit • M NaOH = Molaritas NaOH • 1000 berasal dari konversi mmol = 1000 μmol

13. % kemurnian = 100% x aktivitas spesifik sampel enzim aktivitas spesifik enzim murni