330 likes | 502 Views
Praktikum - mikrobiologie. Úkol č.1: Pozorování kvasinek v tekutém živném roztoku. Materiál : čerstvé droždí(kvasnice), cukr, Lugolův roztok Pomůcky : potřeby pro mikroskopování, kádinka, podložní a krycí sklíčka,která musí být vždy řádně omytá a odmaštěná, buničitá vata, kapátko
E N D
Úkol č.1: Pozorování kvasinek v tekutém živném roztoku • Materiál : čerstvé droždí(kvasnice), cukr, Lugolův roztok • Pomůcky: potřeby pro mikroskopování, kádinka, podložní a krycí sklíčka,která musí být vždy řádně omytá a odmaštěná, buničitá vata, kapátko • Postup práce: Do kádinky nalijeme asi 50ml vlažné vody a přidáme čajovou lžičku cukru a nadrobíme malé množství kvasnic. Vše zamícháme a necháme stát při pokojové teplotě asi 15 min. po této době odebereme vzorek suspenze kapátkem, přeneseme jej na podložní sklíčko, přikryjeme krycím sklíčkem a pozorujeme preparát objektivy o postupně zvyšujeme zvětšení 20x, 40x případně 60x.
Definice mikroorganismů • Mikroorganismy jsou velká a rozrůzněná skupina organismů žijících samostatně jako jednotlivé buňky nebo shluky nediferencovaných buněk.
„Mouchy se líhnou pouze z much“(=Larvy much nevznikají z masa)
Nicolas Appert (1810): objev konzervace potravin na základě Spallanzaniho poznatků
Systém-3 základní nadříše: • Archaebakterie • Eubakterie • bakterie • sinice • Eukaryota • houby : plísně a kvasinky • rostliny • živočichové
Archaebakterie • extrémní podmínky • např. horké sirné prameny, solná jezera, … • nejsou patogenní
Eubakterie • pravé bakterie • sinice
Živné půdy studium mikroorganismů– celé populace mnohé bakterie auxotrofní organismy agar – z ruduchy u JV pobřeží Asie a J Kalifornie (paní Hessová, Koch) tuhne při teplotě 45° Šikmé agary živné roztoky na Petriho miskách
Požadavky na médium – „ideální médium nejlépe vyhovující danému kmeni bakterie“ • Médium: Prvky, živiny Zdroj energie Zdroj uhlíku Zdroj biogenních prvků Voda Růstové faktory
Typy médií • Minimální - chemicky definovaná (bez biologických extraktů) • Minerální- minimální médium, pouze z anorganických komponent a organického zdroje uhlíku nebo bez něj (=CO2) • Komplexní- médium obsahující chemicky přesně nedefinovaný extrakt z biologických materiálů (např. silný hovězí vývar pro bakterie)
Metoda mikrobiologie Aseptická práce Čisté kultury Sterilizace
Izolace – ředění čisté kultury na misce Schéma izolace čisté kultury
Aerobní, anaerobní, fakultativní, mikroaerofilní, aerotolerantní organismy
Další dělění bakterií : G+ a G-(podle typu buňěčné stěny) kolem cytoplazmatické membrány mají jednobuněčnou stěnu z peptidoglykanu Gramovo barvení – modrofialová barva Gramnegativní bakterie nad peptidoglykanovou buněčnou stěnou mají další membránovou strukturu Gramovo barvení – červená barva Grampozitivní bakteriie
Diferenciální Gramovo barvení:G+(modré) a G- buňky (růžové) pro srovnání v jednom preparátu
Hodnocení: Kvasinková buňka je snadno pozorovatelná pod mikroskopem. Při dostatečném zvětšení uvidíme jednotlivé buňky kulovitého nebo oválného tvaru i jejich shluky. Pokud je droždí čerstvé můžeme pozorovat i dělení buněk pučením • Další pozorování:U kvasinek můžeme pozorovat struktury uvnitř buňky: glykogen- zásobní polysacharid, který nám poslouží k určení fyziologického stavu buňky. Preparát si připravíme tak, že na mírně zaschlou suspenzi kvasinek na podložním skle kápneme přiměřené množství Lugolova roztoku, přikryjeme krycím sklíčkem a pozorujeme. V jednotlivých kvasinkách uvidíme zřetelně odlišené červenohnědé části obsahující glykogen a přítomné bílkoviny budou zbarveny žlutě. Kvasinky v dobrém fyziologickém stavu-tedy mladé buňky obsahují více bílkovin- uvidíme je tedy žlutě. Starší kvasinky mají naopak více glykogenu a proto jsou uvnitř hnědočervené
Úkol č.2.: Pozorování bakterií – trvalé preparáty • Pomůcky: mikroskop, pomůcky k mikroskopovaní, TP • Postup práce: Pod mikroskopem pozorujte různé tvary bakterií a zakreslete do sešitu. Dále pozorujte G+ a G- bakterie.