1 / 51

OPTIKAI SPEKTROSZKÓPIA 2012 1.1. Festékpróbák az anyagtudományban (KM), szept. 25.

OPTIKAI SPEKTROSZKÓPIA 2012 1.1. Festékpróbák az anyagtudományban (KM), szept. 25. 1.2. Nem-lineáris lézerspektroszkópia (KT) 1. 3. Fotodinamikus terápia (VT) 1.4. Cirkuláris dikroizmus spektroszkópia (KM) 1. 5. Fotokróm anyagok (BP). ALAPISMERETEK (vizsgára, doktori szigorlatra átismételni).

amber-petty
Download Presentation

OPTIKAI SPEKTROSZKÓPIA 2012 1.1. Festékpróbák az anyagtudományban (KM), szept. 25.

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. OPTIKAI SPEKTROSZKÓPIA 2012 1.1. Festékpróbák az anyagtudományban (KM), szept. 25. 1.2. Nem-lineáris lézerspektroszkópia (KT) 1. 3. Fotodinamikus terápia (VT) 1.4. Cirkuláris dikroizmus spektroszkópia (KM) 1. 5. Fotokróm anyagok (BP)

  2. ALAPISMERETEK(vizsgára, doktori szigorlatra átismételni) Kémiai anyagszerkezettan V. OPTIKAI SPEKTROSZKÓPIA (Optsp05) VI. A MOLEKULÁK FORGÓMOZGÁSA (Forgo05) VII. A MOLEKULÁK REZGŐMOZGÁSA (Rezgo05) VIII. A MOLEKULÁK ELEKTRONSZERKEZETE (Molel05) X. LÉZEREK, LÉZERSPEKTROSZKÓPIAI MÓDSZEREK (Lezer05)

  3. Festékpróbák Fluoreszkáló próbák Abszorbeáló próbák

  4. Reichardt’s dye

  5. Reichardt’s dye „charge transfer” festék C. REICHARDT, Chem. Rev. 94, 2319-2358 (1994)

  6. A Reichardt-festék abszorpciós színképe 90 %-os (m/m) glicerin-víz elegyben (GW), ionos folyadékban (IL), acetonitrilben (ACN) és diklórmetánban (DCM). K.A. Fletcher, Green Chem. 3, 210-215 (2001)

  7. Oldószer polaritás S1  = 810 nm Ph-O-Ph  = 453 nm H2O S0

  8. skála Az oldószer polaritását jellemzi.

  9. Szolvatokromizmus: a szín függ az oldószertől Termokromizmus: A szín függ a hőmérséklettől Etanolban + 78 C max = 568 nm - 78 C max = 513 nm Piezokromizmus: A szín függ a nyomástól Etanolban  1 bar max = 547 nm 10 kbar max = 520 nm

  10. A fluoreszcencia-mérés előnyei az abszorpcióméréssel szemben 1. Nem kell átlátszó minta 2. Nagyobb érzékenység 3. Háromszoros szelektivitás - gerjesztési hullámhossz szerint - emissziós hullámhossz szerint - lecsengési idő szerint Hátrány: a vegyületeknek csak kis hányada fluoreszkál

  11. Fluoreszcens festékpróbák J. R. LAKOWICZ, Principles of Fluorescence Spectroscopy, 2nd Edition, Kluwer Academic, London, 1999

  12. Vázlat •  Műszerek • stacionárius spektrofluoriméter • időkorrelált egyfoton-számlálás • Statikus kioltás • dinamikus kioltás • oldószer polaritás / hőmérséklet / viszkozitás hatása • Lippert-egyenlet • vibrációs relaxáció • oldószer relaxáció • kettős fluoreszcencia • feherjék fluoreszcenciája / triptofán • FRET • rotációs diffúzió (orientációs relaxáció)

  13. Spektrofluoriméterek • stacionárius • időfelbontásos (F mérése, időkorrelált egyfoton-számlálás)

  14. Stacionárius

  15. Időkorrelált egyfoton-számlálás

  16. Fluoreszcencia lecsengési görbe

  17. Statikus kioltás

  18. Oxazin1 + receptor

  19. Dinamikus kioltás

  20. Lakowicz, p. 461

  21. Lakowicz, p. 461

  22. M + h M + h M +  M* M + Q

  23. A dezaktiválódás sebessége és fluoreszcencia-hatásfoka Kioltó nélkül Kioltóval

  24. Stern-Volmer egyenlet

  25. Oldószer polaritása és hőmérséklete

  26. Oldószer polaritás S1 S0

  27. - - - - + G v. E _ + + + + 2a Polaritás hatása: Lippert-egyenlet

  28. Lippert-egyenlet - - - - + G v. E _ + + + + 2a

  29. Naftilamin-származékok Stokes eltolódása Lakowicz, p. 191

  30. Hőmérséklet hatása: folyamatok Jablonski-diagramon vibrációs relaxáció 10-12 s oldószer relaxáció 10-10 s S1 emisszió 10-9 s abszorpció 10-15 s S0 oldószer relaxáció

  31. CH 3 + CH N(CH ) CH 2 3 3 2 CH (CH ) C 3 2 14 O Patman A Prodan lipofilizált + ionos változata

  32. IF 500 400  [nm] Lakowicz, p. 199 • Oldószer relaxáció sebessége kisebb, ha csökken a hőm. • a sáv -30C-on a legszélesebb: kettős fluoreszc.

  33. Kettős fluoreszcencia DMANCN fl. Színképe etilénglikolban Lakowicz, p. 201

  34. Fluoreszkáló aminosavak fenil-alanin tirozin triptofán

  35. Triptofán abszorpciós és emissziós spektruma (víz, pH 7) Lakowicz, p. 446

  36. A triptofán környezetének hatása fehérjék fluoreszcencia spektrumára • Apoazurin Pfl • T1 ribonuklease • staphillococcus nuclease • glucagon Lakowicz p. 453

  37. Rezonancia energia-átadás (Förster resonance energy transfer = FRET) Távolságmérés fluoreszcenciával! Mikroszkóppal a hullámhossztól függő, UV-fénnyel ~ 200 nm-es felbontás érhető el FRET: 2-10 nm-es távolságok érzékelhetők

  38. Donor festék – akceptor festék, D fluoreszc. tartománya átfed A absz. tartományával.

  39. Ha D és A távolsága kicsi, FRET, D-t gerjesztve az A fluoreszkál A hatás 1/r6-nal arányos

  40. Példa: DNS –foszfolipid kölcsönhatás vizsgálata C. Madeira, Biophys. J. 85, 3106 (2003)

  41. Akceptor Donor: EtBr (etidium bromid)

  42. BODIPY fluoreszcencia EtBr abszorpció

  43. Fehérjék konformáció-változását lehet FRET-tel követni

  44. - - - - + G v. E _ + + + + 2a Festékmolekula orientációs relaxációja

  45. Hidrodinamikai súrlódás járuléka Stokes-Einstein-Debye egyenlet

  46. Dielektromos súrlódás járuléka

  47. Níluskék festék fluoreszcenciája ioncserélő gyantán Habuchi et al., (Sapporo), Anal. Chem. 73, 366-372 (2001) Gyanta: sztirol - divinilbenzol kopolimer Keresztkötések gyakorisága () 8 % divinilbenzol Ioncserélő csoport: Na-szulfonát

More Related