200 likes | 437 Views
Nye analyseteknikker (DNA) för kontroll av mikroorganismer Charlotta Engdahl Axelsson Forsknings- och utvecklingschef mikrobiologi Lantmännen Analycen AB. Varumärken. Analycens lab. Laboratorier Finland: Tampere Norge: Moss Danmark: Frederica Polen: Warszawa
E N D
Nye analyseteknikker (DNA) för kontroll av mikroorganismer Charlotta Engdahl Axelsson Forsknings- och utvecklingschef mikrobiologi Lantmännen Analycen AB
Analycens lab • Laboratorier • Finland: Tampere • Norge: Moss • Danmark: Frederica • Polen: Warszawa • Sverige: Lidköping, Kristianstad, Örebro, Skara, Uppsala
DNA analys -ny teknik • In vitro DNA amplifiering (PCR) 1983
Brett användningsområde (Analycen idag) • Patogena mikroorganismer (näringsmedel, vatten, växter) • Allergena födoämnen • Djurslagsbestämning • GMO
Patogena mikroorganismer • Salmonella • Shigella • Campylobacter • EHEC • Växtpatogena svampar • m.fl.
DNA • Arvsmassa DNA/RNA • DNA baser (nukleotider) • DNA bibliotek
Två syften • A) Detektion av mikroorganismer, arter, gener • B) Individidentifiering, smittspårning
PCR • Uppförökning av DNA • Avgränsas av s.k. primers (måste vara specifika) • Probe som kontroll av specificitet och för detektion
PCR -fördelar • Relevanta egenskaper mäts • Svårodlade mikroorganismer detekteras • Snabbheten • Specificiteten • Objektiv
PCR – att tänka på • Inte alltid kompatibel med traditionell analys • Döda/levande bakterier • Hög detektionsnivå > 1000 bakterier/ml • Provupparbetning
Lagstiftning/standardisering • DNA ok för livsmedelskontroll (gäller validerade metoder enl ISO 16140) • Standarder för EHEC och virus på gång (Norovirus och Heptit A) • Samarbete livsmedel-vatten standardisering • EHEC, Salmonella aktuellt för vatten • EU ref lab för parasiter (Cryptosporidium, Giardia)
En utskrift från DagensNyheters nätupplaga, DN.se. • Publicerad 15 aug 2007 13:53 Smitta på förskola i Sundbyberg Sundbyberg.Ett barn har smittats och ytterligare 12 barn och en ur personalen har visat tecken på att ha smittats av en infektion på en förskola i Sundbyberg. - Vi har konstaterat att ett barn har fått en cryptosporidiuminfektion, som är en parasit, säger Ingegerd Hökeberg, biträdande smittskyddsläkare vid smittskyddsenheten i Stockholms läns landsting
Protocol Filtration of 1L water Lysis of Bacteria, extraction and DNA purification Real-time PCR detection and/ or quantification Screening : specific sequences detection / controls Quantification : specific sequences detection / Standards 5 h to result Legionella spp L. pneumophila
Erfarenheter PCR och Legionella • PCR bra för detektion • Korrelation med PCR –odling dålig • Gränser baseras på odling
Framtid • Fortsatt utveckling av DNA tekniken • Odling och isolering fortsatt viktigt • DNA standarder för vattenburna patogener