1 / 20

IVAN Å OÅ A, dr. med.

SVEUČILIŠTE U RIJECI MEDICINSKI FAKULTET ZAVOD ZA SUDSKU MEDICINU I KRIMINALISTIKU. ODNOS EKSPRESIJE KOŠTANOG MORFOGENETSKOG PROTEINA-9 I PREOBRAŽAVAJUĆEG ČINITELJA RASTA-β KOD RAZLIČITO IZRAŽENIH REGENERATIVNIH PROCESA U LJUDSKOJ JETRI. IVAN ŠOŠA, dr. med.

matt
Download Presentation

IVAN Å OÅ A, dr. med.

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. SVEUČILIŠTE U RIJECI MEDICINSKI FAKULTET ZAVOD ZA SUDSKU MEDICINU I KRIMINALISTIKU ODNOS EKSPRESIJE KOŠTANOG MORFOGENETSKOG PROTEINA-9 I PREOBRAŽAVAJUĆEG ČINITELJA RASTA-β KOD RAZLIČITO IZRAŽENIH REGENERATIVNIH PROCESA U LJUDSKOJ JETRI IVAN ŠOŠA, dr. med.

  2. Otkriće koštanih morfogenetskih proteina Marshall R. Urist (1965): Bone: formation by autoinduction. Science 159, 893-899. Ugradnjomdemineraliziranogkoštanogmatriksa u potkožnotkivoili u mišićizazvano je stvaranjekosti. Demineraliziranikoštanimatrikssadržiosteoinduktivnetvari. Slijedmorfološkihpromjenakojedovode do stvaranjanovekostisličan je procesimatijekom embrionalnograzvojairastakosti.

  3. BMPs i TGF-nadobitelj Chen D i sur. 2004

  4. mRNA za BMP-9 je prvi puta izolirana iz jetre miša (Celeste AJ i sur., 1994) • Potiče proliferaciju stanica ljudskog hepatoma i veže se na mišje hepatocite (Song JJ i sur., 1995). Koštani morfogenetski protein -9 Caperuto LC i sur., 2008 • Ima važno mjesto u angiogenezi, hondrogenezi, osteogenezi, hepatogenezi, kolinergijskom usmjeravanju neurona ventralnog telencefalona tijekom embrionalnog razvoja. Utvrđen je i njegov hipoglikemijski učinak te je bio predložen za inzulinu sličnu tvar koju izlučuje jetra ( eng. Hepatic Insulin Sensitizing Substance, HISS).

  5. BMP-receptori

  6. BMP-9 je ligand za ALK receptor

  7. Stereostruktura BMP-9 molekule • Konfiguracija molekule poput leptira • Sadržava AK lizin (Lys60) Brown MA i sur., 2005.

  8. Kvantitativna RT-PCR analiza ekspresije BMP9 mRNA u 9 ljudskih tkiva Bidart i sur. 2012

  9. Ekspresija BMP-9 mRNA u različitim staničnim populacijama unutar jetre Bidart i sur. 2012

  10. Jetra regulira metabolizam glukoze • Učinak sličan inzulinu na metabolizam glukoze i masnih kiselina Chen C i sur., 2003.

  11. Zonalna građa jetrenog režnjića Gebhard RL i sur. 1992

  12. Regeneracija jetre (Michalopoulos GK., 1997)

  13. Hipoteza • Pretpostavka je da je BMP-9 različito izražen u hepatocitima različitih zona jetrenog režnjića te da se to mijenja sukladno oštećenju jetrenog parenhima. • Sukladno dosadašnjim rezultatima koji ukazuju da BMP-9 sintetiziraju hepatociti te da ovaj morfogen potiče njihovu proliferaciju, moguće je da BMP-9 ima regenerativnu ulogu u jetri. • Uzimajući u obzir činjenicu da regenerativne promjene u jetri započinju periportalno, zaočekivati je jaču ekspresiju BMP-9 u regenerativnim hepatocitima cirozom zahvaćene jetre u odnosu na zdravu jetru čovjeka.

  14. Utvrditi izraženost i lokalizaciju BMP-9 i TGF-β u tkivu zdrave i različitim stupnjem cirozom zahvaćene jetre u čovjeka (početna ciroza i nodularna ciroza). Istražiti postoji li različita izraženost BMP-9 i TGF-βu hepatocitima jetrenog režnjića prema zobaknoj podijeli jetrenog režnjića. Istražiti da li se izraženost BMP-9 i TGF-β u hepatocitima mijenja sukladno dijelu jetrenog režnjića, u zdravom tkivu i tkivu oštećenom različitim stadijima razvoja ciroze jetre. Analizirati stupanj oštećenosti uzorka tkiva humane jetre mjerenjem aktivnosti enzima matriks-metaloproteinaza (MMP-2 i MMP-9). Kvantificirati razinu izraženosti proteina BMP-9 i TGF-β u tkivu zdrave jetre i u tkivu jetre koja je zahvaćena određenim stadijem ciroze. Analizirati međusobni odnos razine izraženosti proteina BMP-9 i TGF-β u različito oštećenom jetrenom tkivu, gdje nalaz obrnuto razmjernog odnosa ide u prilog regenerativne uloge BMP-9 u humanoj jetri. Ciljevi istraživanja

  15. Ispitanici • Ispitivanu skupinu čine uzorci jetrepočetne i nodularne ciroze, dobiveni iz arhivskog materijala Zavoda za Sudsku medicinu i kriminalistiku Medicinskog fakulteta u Rijeci (N=20). Uzorci tkiva jetre dobiveni su tijekom postupka sudskomedicinske obdukcije od oba spola, u rasponu od 25 do 50 godina starosti. • Kontrolnu skupinu čine uzorci zdrave jetre na kojima nisu dokazane gore navedene promjene (N=20). Uzorci su dobiveni iz arhiva Zavoda za Sudsku medicinu i kriminalistiku Medicinskog fakulteta u Rijeci. • Kriteriji za neuključivanje obuhvaćaju: kronične, zarazne bolesti jetre, autoimune bolesti jetre ili sustavne autoimune bolesti, hepatocelularni karcinom, karcinom žučnih kanalića, metastatske bolesti jetre, prirođene kolangiopatije.

  16. Metode • Imunohistokemijska analiza • Westernblot analiza • Natrij-dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforeza (SDS-PAGE) – zimografija

  17. Statistička analiza • Statistica 8.1 • Normalnost raspodjele - Kolmogorov-Smirnovljev test / usporedba kumulativne s očekivanomraspodjelom podataka • Parametrijski testovi – one-way ANOVA i t-test • Neparametrijski testovi - Kruskal-Wallis test i Mann-Whitney test

  18. Etički aspekti istraživanja • Revizija Helsinške deklaracije iz 2008. • Institucionalna i nacionalna regulativa istraživanja na ljudima. • Prikupljanje uzoraka tkiva u skladu s etičkim i bioetičkim principima • Rukovanje humanim tkivom - medicinska tajna - anonimnost - neškodljivost postupka - pravednost i dobročinstvo

  19. Očekivani znanstveni doprinos Važnost ovog istraživanja je u mogućnosti razjašnjavanja načina izražaja BMP-9 u cirozom promijenjenom parenhimu jetre. Hepatoregenerativno svojstvo je dokazano inzulinu te je utvrđeno da BMP-9 ima inzulinu sličan promitogeni učinak na hepatocite. Stoga očekujemo veću izraženost BMP-9 na mjestima spontane regeneracije jetrenog parenhima.

  20. U nodularnoj fibrozi je zbog porto-kavalnog shunta smanjen dotok inzulina, zbog čega očekujemo kompenzatorno veću produkciju BMP-9 u hepatocitima regeneracijskih čvorića. • Rezultat obrnuto razmjernog odnosa razine izraženosti proteina BMP-9 i TGF- β uz nalaz veće izraženosti BMP-9 na mjestima regeneracije hepatocita, išao bi u prilog regenerativne uloge BMP-9 u humanoj jetri.

More Related