450 likes | 854 Views
Principi biotehnološke proizvodnje hrane. “Procesi prije bioreaktora” (upstream) 2 . Predavanje – priprema hranjivih podloga Dr. sc. Jasna Mrvčić, doc. Principi biotehnološke proizvodnje hrane. Pitanja za ponavljanje – 1. predavanje – Uvod u biotehnologiju i biotehnološke procese.
E N D
Principi biotehnološke proizvodnje hrane “Procesi prije bioreaktora” (upstream) 2. Predavanje – priprema hranjivih podloga Dr. sc. Jasna Mrvčić, doc.
Principi biotehnološke proizvodnje hrane Pitanja za ponavljanje – 1. predavanje – Uvod u biotehnologiju i biotehnološke procese • Definicija biotehnologije • Podjela biotehnoloških procesa s obzirom na vrstu biokatalizatora • Što je bioproces, od kojih se faza sastoji biotehnološki postupak proizvodnje nekog proizvoda? • Kako izgleda bioreaktor? • Razvoj biotehnologije kroz povijest • Grane biotehnologije • Osnovne grupe biotehnoloških proizvoda
Što je BIOPROCES ? PRIPREMA BIOREAKTORA (FERMENTORA) PROCESI PRIJE BIOREAKTORA PROCESI NAKON BIOREAKTORA
Priprema podloge - proračun sirovina, odnosno materijalna bilanca (ugljik, dušik, fosfor, kisik i dr.), analiza, predobrada sirovina, ukomljavanje, sterilizacija… Priprema bioreaktora - pranje, sterilizacija ili dezinfekcija • Priprema cjepiva (inokuluma) - čista kultura (kosi agar, starter) - pripreme i inokulacija podloge za propagaciju čiste kulture - inkubacija (anaerobna, aerobna) cjepivo za bioproces “Procesi prije bioreaktora”:
Što je metabolizam ? • Skup svih kemijskih reakcija koje se odvijaju u stanici • (kataboličke i anaboličke) • Koji je cilj metabolizma tj. dobit za stanicu ? • Sinteza molekula (proteina, lipida, ugljikohidrata, • nukleinskih kiselina) i staničnih organela, rast i kretanje • Što je stanicama za to potrebno ? • Izvor kemijskih elemenata koji tvore stanicu i izvor energije • Gdje će to naći ? • U svom okolišu (prirodnom staništu ili laboratorijskim podlogama) • Mikroorganizmi su u svojim nutritivnim potrebama izuzetno različiti i dostupnost nutrienata iz okoliša (uz optimalne okolišne uvjete – pH, T, prisustvo kisika, aw..) znantno utječe na njihov rast
Kako sastaviti hranjivu podlogu za mikrobni proces ? • Priprava hranjive podloge: - na temelju poznavanja hranidbenih potreba tj. metaboličkih puteva radnog mikroorganizma - ovisno o osobitostima biotehnološkog procesa (aeracija!) - tržišnoj vrijednosti proizvoda • Hranjive podloge – moraju zadovoljiti potrebe radnog mikroorganizma: • za rast i razmnožavanje (energija i sinteza njegovih gradbenih jedinica) • za sintezu ciljanog proizvoda • Podloge za uzgoj inokuluma – bogatije hranjivim sastojcima od proizvodnih podloga – omogućuju brzo umnažanje inokuluma • Mikrobni procesi – velikih volumena – kao proizvodne podloge koriste se prirodne hranjive podloge
Podjela hranjivih podloga prema kemijskom sastavu • KEMIJSKI DEFINIRANE (jednostavne, sintetičke) Točno poznatog kem. sastava Karakteristike: • Mogućnost standardizacije • Jednostavnija izolacija proizvoda • Skupe – samo za proizvodnju skupih proizvoda • Slabo su puferirane • Faktori rasta ! • PRIRODNE PODLOGE (složene, “pokrivene”) Djelomično poznatog sastava Karakteristike: • Jeftine, za velike volumene proizvoda niže vrijednosti • Djelomično ili potpuno pokrivaju potrebe m.o. za hranjivim tvarima (faktori rasta !) • Sadrže primjese koje m.o. ne mogu koristiti, a otežavaju rast m.o. i izolaciju proizvoda – potrebna predobrada
Hranjive podloge za mikrobne procese - uvijek sadrže slijedeće sastojke: 1. vodu 2. izvor biogenih elemenata (C, H, O, N, P, S) 3. mineralne soli – izvor ostalih elemenata 4. faktore rasta - vitamini, aminokiseline 5. prekursore* – gradbene jedinice sekundarnih metabolita 6. ostale sastojke – sredstva protiv pjenjenja, regulaciju pH.. • Razlog – kemijski sastav mikrobnih stanica: • Glavni sastojci mikrobnih stanica: proteini, nukleinske kiseline, ugljikohidrati, lipidi, građeni od: • aminokiselina, šećera, masnih kiselina, fosfata (C, H, O, N, P, S)
1. Voda u hranjivim podlogama • Mikrobne stanice sadrže 80 – 90 % vode • Važna je za sve biokemijske reakcije u stanici • Biokemijske reakcije odvijaju se u vodenoj otopini • Sudjeluje i kao reaktant • U vodi su otopljeni svi hranjivi sastojci podloge • U vodu izlaze sintetizirani ekstracelularni metaboliti • Pogodan medij za regulaciju temperature – brzi prijenos topline • Pogodan medij za otapanje kisika – aerobni procesi !!! • Aktivitet vode aw – pokazatelj slobodne vode kojom mikroorganizam raspolaže u metabolizmu. Dodatkom soli ili šećera aktivitet vode se smanjuje • Aktivitet vode podloga 0,63-0,99 (plijesni<kvasci<bakterije)
2. Izvori biogenih elemenata Podjela mikroorganizama prema načinu pridobivanja energije • FOTOTROFI – energiju svjetlosti Fotolitotrofi – rast ovisan o anorganskim davaocima elektrona Fotoorganotrofi - rast ovisan o organskim davaocima elektrona Industrijski važna samo alga Spirullina maxima – ishrana 2. KEMOTROFI – koriste energiju kemijskih spojeva Kemolitotrofe – rast ovisan o oksidaciji anorganskih spojeva Kemoorganotrofe - rast ovisan o oksidaciji ili fermentaciji organskih spojeva (gotovo svi industrijski važni mikroorg.)
2. Izvori biogenih elemenata Kada mikroorganizam može koristiti neki spoj kao izvor ugljika i energije ? • Ako postoji transportni mehanizam za prolaz kroz plazminu membranu • Ako u stanici postoji enzimni sustav za njegovu razgradnju
Izvori ugljika i energije Sirovine biljnog podrijetla Sirovine životinjskog podrijetla Tercijarne Primarne Sekundarne Primarne Sekundarne 2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE Tercijarne Sirovine biljnog podrijetla Primarne - monosaharidi, oligosaharidi, polisaharidi Sekundarne - melasa, hidrol, CSL, uljne pogače, sladne klice Tercijarne (otpadne) - lignocelulozne, iz prerade voća i povrća Sirovine životinjskog podrijetla Primarne - laktoza, životinjska mast Sekundarne - sirutka, pepton, kazein Tercijarne (otpadne) - hitin, kućni otpad
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE 2.1.1.Primarne sirovine • Monosaharidi Glukoza i fruktoza- sastojci svakog voća (grožđe) Čista glukoza (iz škroba - kiselinska ili enzimska hidroliza) Primjena: proizvodnja antibiotika, steroida, aminokiselina, maslačne, itakonske i vinske kiseline Glukozni sirup - 70 – 75 % s. tv. (99% glukoza) (kiselinska ili enzimska hidroliza kukuruznog ili krumpirovog škroba)D-ksiloza (pentozni šećer) sastojak hemiceluloze (sulfitna lužina) obnovljivi izvor ugljika
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE b) Disaharidi (maltoza, saharoza, laktoza)Maltoza - disaharid sastavljen od dvije D-glukozeprisutna u svim šećernim sirupima i hranjivim podlogama koje uključuju hidrolizu škrobaSaharoza (D-glukoza i D-fruktoza) Proizvod industrijske prerade šećerne repe i šećerne trske, različite čistoće (sirovi, rafinirani šećer ili melasa)Laktoza (D-glukoza i D-galaktoza) prirodni sastojak mlijeka izdvaja se kristalizacijom iz sirutke u vakumskom isparivaču nakon uklanjanja grušta i masti(BMK, Kluyveromyces, Pencillium)
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE c)Polisaharidni izvori ugljika Škrob (glukoza)n - u proizvodnji amilolitičkih enzima (Bacillus subtilis, Aspergillus oryzae); najvažniji rez. ugljikohidrat (žitarice, kukuruz, krumpir) Za mikrobne procese: kiselinska ili enzimska hidroliza Dekstrini - hidrolizom škroba pomoću α-amilaze Inulin - povezivanje fruktoznih jedinica, (80% fruktoze + 20% glukoze) Slad - klijanjem, sušenjem i otklicavanjem ječmenog, pšeničnog ili prosenog zrna Celuloza - glavni sastojak drva i biljnih vlakana, sastavljena od jedinica D-glukoze (β-vezom), obnovljivi izvor, Hidroliza!!!
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE 2.1.2. Sekundarne sirovine • MELASA • Nusproizvod šećerne industrije • Sastav ovisi o podrijetlu • Dobar puferski kapacitet • NEPOŽELJNI SASTOJCI MELASE: • Betain (povećava se stajanjem repe) • Hlapive org. kiseline • Teški metali, pesticidi • Mikroorganizmi • POŽELJNI SASTOJCI • saharoza • aminokiseline • Suvremene šećerane • - manje šećera • - više dušika i pepela
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE Sastav Slatka sirutka (g/L) Kisela sirutka (g/L) Suha tvar 63-70 63-70 Laktoza 46-52 44-46 Proteini 6-10 6-8 Kalcij 0,4-0,6 1,2-1,6 Kloridi 1,1 1,1 Fosfati 2,0 6,4 Laktat 1-3 2-4,5 2.1.2. Sekundarne sirovine Sirutka - sekundarna sirovina životinjskog podrijetla Za proizvodnju proteinskih krmiva i etanola
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE 2.1.2. Sekundarne sirovine • Grožđe - osnovni sastojak za proizvodnju vina je bobičasti plod • Grožđani sok - glukoza i fruktoza, • organske kiseline (vinska, jabučna, • limunska, jantarna, glukonska), • dušični spojevi, vitamini C i B grupe, • bogat mineralni sastav
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE 2.1.2. Sekundarne sirovine Sladni ekstrakt • vodeni ekstrakt ječmenog slada • glukoza, fruktoza, maltoza, saharoza, maltotrioza, dekstrin • bogat izvor dušičnih spojeva – proteini, peptidi, aminokiseline, purine, pirmidine, vitamine (faktori rasta) • Izvor amililitičkih enzima
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE 2.1.2. Sekundarne sirovine Mlijeko – osnovna sirovina za proizvodnju fermentiranih mliječnih proizvoda, rijetko za hranjive podloge Promjenjivog sastava – ovisno o pasmini, zdravstvenom stanju životinja, stadiju laktacije, načinu hranidbe… Kravlje mlijeko - najznačajnije, jer ga ima najviše - laktoza - kazein i proteini sirutke - mliječna mast - vitamini B2 i B12 - mikroorganizmi !!!
2.1. IZVORI UGLJIKA I ENERGIJE 2.1.3. Tercijarne sirovine - otpadni izvoriugljika - Otpadne vode prehrambene industrije (krmna biomasa ili etanol) • Iz pogona prerade krumpira (čips, pomfrit) - Kod prerade povrća (kiseli kupus, konzerviranje graha, graška i mahuna) • Melasna đibra – otpadna voda iz proizvodnje alkohola
2.2. IZVORI DUŠIKA • MINERALNI IZVORI • ORGANSKI IZVORI • BILJNI IZVORI • MIKROBNI PROTEINI • ŽIVOTINJSKI IZVORI
2.2. IZVORI DUŠIKA • MINERALNI IZVORI dušika (amonijeve soli i nitrati) - Amonijak (u obliku amonijačne vode) - Amonijev sulfat (dobro otapanje u vodi; 21 % dušika) - Diamonijev hidrogen fosfat (izvor dušika i fosfora) Koriste se soli tehničke čistoće b) ORGANSKI IZVORI dušika - Urea (pogodan izvor zbog ekonomičnosti procesa) - Aminokiseline, peptidi, purini, pirimidini c)BILJNI IZVORIdušika Brašna- čest izvor dušika zbog 10 % proteina u žitaricama Kukuruzna močevina (C.S.L.) - nusproizvod postupka ekstrakcije škroba iz kukuruza. Bogata esencijalnim aminokiselinama, vitaminima i mineralima, služi i kao izvor faktora rasta
d)MIKROBNI PROTEINI(osušena biomasa mikroorganizama) Tablica. Kemijski sastav suhe biomase kvasca Candida utilis (Cejka, 1985) • Suhi kvasac Nusproizvodi pivovara, vinarija i špiritana Autolizati kvasca (skup izvor dušika)
2.2. IZVORI DUŠIKA e)ŽIVOTINJSKI IZVORIdušika (nusproizvodi riblje industrije, prerade mlijeka, mesa i peradi) • Kazein (glavni protein u mlijeku) • Želatina (ekstrakcija i hidroliza kolagena) • Peptoni(peptoinizirani proteinski hidrolizati). Izvor organskig dušika u laboratorijskim hranjivim podlogama. - Riblje brašno(rijetko se koristi)
3. MINERALNE SOLI - IZVORI OSTALIH KEMIJSKIH ELEMENATA Izvor plinovitog kisika(najčešće atmosferski zrak - smjesa dušika, kisika i ugljika) Fosfor(soli fosforne kiseline-kalijev hidrogen fosfat, natrijev fosfat) Sumpor(sulfati topljivi u vodi i sulfatna kiselina) Makroelementi(glavni elementi) (K, Mg, Ca, Na: 10-3 do 10-4 mol/L) - Mikroelementi(elementi u tragovima) (Zn, Mn, Fe, Cr, Cu, Mo, Se: 10-6 do 10-8 mol/L)
4. IZVORI FAKTORA RASTA FAKTORI RASTA – amino kiseline, vitamini, purinski i pirmidinskinukleotidi Auksotrofi – mikroorganizmi koji su izgubili (ili nisu ni imali) sposobnost sinteze dovoljne količine svih org. spojeva potrebnih za sintezu staničnih sastojaka – zahtjevaju dodatakFAKTORA RASTA : bitni faktori rasta – ako ih stanica ne sintetizira uopće faktori koji stimuliraju rast – ako se ne sintetiziraju u dovoljnoj količini
4. IZVORI FAKTORA RASTA Tablica. Udjel vitamina (ug/g) u C- i N- izvorima (Cejka, 1985.) - Vitamini - u mnogim prirodnim izvorima ugljika i dušika - Izvori aminokiselina (kazein, pepton, kvaščev ekstrakt, C.S.L)
6. Izvori ostalih tvari Protupjenila (masti i ulja, silikoni, alkoholi) Tvari za korekciju pH Tvari mirisa i okusa (hmelj, borovica, bilje i biljni ekstrakti) Pomoćne sirovine (enzimi, nosači i dr.)
NAJVAŽNIJE INDUSTRIJSKE HRANJIVE PODLOGE: Melasa, Hidrol, Sirutka, Sulfitna lužina, Kukuruzni ekstrakt (CSL) Hidrol – nusprodukt proizvodnje glukoze iz škroba (“žitna melasa”) sastav: 40% vode i 60% s.tv (oko 77% invertnog šećera, 4% pepela) Sulfitna lužina – nusprodukt sulfitnog postupka prerade drveta sastav ovisi o drvetu koje se prerađuje, 2-3% šećera četinare – heksoze bukovo drvo – pentoze (Candida) C.S.L. – fermentirana uparena voda koja zaostaje pri proizvodnji škroba iz kukuruza - bogat izvor dušika i faktora rasta
Priprema hranjive podloge Odabir, nabava, analiza i skladištenje sirovina, predobrada sirovina 2. Izrada materijalne bilance - Seminar 3. Otapanje sirovina za kemijski definiranu podlogu ili Pripremanje kompleksne podloge - u samom reaktoru (Pr- ?) ili posebnim postrojenjima (između skladišta i postrojenja za sterilizaciju) - razrijeđenje osnovne sirovine - pripreme otopine soli... 4. Priprema vode - mekšanje (za proizvodnju piva) - demineralizacija (za proizvodnju JAP-a)
Čuvanje, nadzor i obrada sirovina • Prihvat i čuvanje sirovina Industrijski procesi – zahtjevaju velike količine sirovina – skladištenje i čuvanje (utjecaj svjetlosti, topline, zraka - očuvati kvalitetu) Sezonske sirovine – nabavljaju se za vrijeme sezone berbe (cijena!) Ovisno o fizičkom stanju sirovine: praškaste, tekuće i plinovite - Praškaste sirovine (suhi silosi ili podna skladišta) - Higroskopne (škrob, šećer-u polietilenskim vrećama) - Sirupaste sirovine (melasa) – u vanjskim spremnicima Nadzor - kemijska analiza - određivanje osnovnih sastojaka; gustoća, boja, bistrina, aroma Očuvanje kvalitete proizvoda i produktivnosti procesa znatno ovise o sastavu i kakvoći sirovina
Postupci prethodne obrade Priprema voćnih sirovina - drobljenje i usitnjavanje - ukomljavanje - odvajanje taloga, bistrenje Priprema polisaharidnih sirovina - ukomljavanje i hidroliza Priprema ostalih kompleksnih sirovina - razrijeđenje (optimalna konc. šećera), bistrenje i sterilizacija Čuvanje, nadzor i obrada sirovina
Postupci prethodne obrade (primjena pektinaza) Čuvanje, nadzor i obrada sirovina
STERILIZACIJA • Sterilizacija – postupak uklanjanja životne aktivnosti sa razl. materijala, objekata ili sredine • Provodi se: toplinom (suha, vlažna, žarenje) filtriranjem (termolabilne tekućine) zračenjem (zrak, prostor) ultrazvukom (razbijanje stanica m.o) kemikalijama (“kisela kupelj”, postrojenja) • • Sterilizacija hranjivih podloga • - šaržno (u fermentoru) • - kontinuirano (u posebnom postrojenju) • Sterilna tehnika rada
Principi biotehnološke proizvodnje hrane • Pitanja za ponavljanje – 2. predavanje – hranjive podloge • Kako sastaviti hranjivu podlogu, o čemu to ovisi? • Podjela hranjivih podloga po kem. sastavu, njihove prednosti i mane? • Što sve uvijek sadrže hranjive podloge za mikrobni proces? • Podjela m.o. po načinu pridobivanja energije • Kada neki spoj može služiti kao izvor energije za mikrobni proces? • Nabrojati i opisati primarne i sekundarne sirovine kao izvore C i N! • Najznačajnije industrijske hranjive podloge i njihove karakteristike! • Što su faktori rasta i koji su njihovi izvori? • Što je sterilizacija, čemu služi i kako se provodi?